HPLC法测定双氯芬酸钠凝胶中双氯芬酸钠的含量

贾燕花，高 磊，王晓青，刘皈阳

0 引言

双氯芬酸钠为非甾体抗炎镇痛药，其通过抑制环氧合酶减少前列腺素的合成，以及一定程度上抑制脂氧酶而减少白三烯、缓激肽等产物的生成而发挥解热镇痛及抗炎作用［1-3］。双氯芬酸钠凝胶临床上主要用于类风湿关节炎、骨关节炎的症状缓解，其主要成分为双氯芬酸钠。为了控制双氯芬酸钠凝胶的质量，保证临床用药效果，笔者在原标准的基础上进行优化，建立了HPLC外标法用于测定双氯芬酸钠凝胶中双氯芬酸钠的含量。

1 仪器与方法

1.1 实验仪器 1100高效液相色谱仪(Agilent公司);PHS-3E pH计(雷磁);UNICO-2102C紫外分光光度计(上海UNICO仪器有限公司);BT25S电子天平(赛多利斯)。

1.2 试剂与药品 HPLC级甲醇(上海星可生化有限公司);AR磷酸(北京化工厂);AR磷酸二氢钾(北京化工厂);双氯芬酸钠对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号:100334-200302);联苯双酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100192-200503);双氯芬酸钠凝胶(解放军总医院第304临床部，批号:130729、130730-1、130730-2)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统试用性试验 色谱柱:Agilent Eclipse XRD-C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:甲醇 －0.005 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3.8)(70∶30);检测波长:280 nm。精密量取对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，双氯芬酸钠峰与相邻杂质峰的分离度应不小于2.0，理论塔板数按双氯芬酸钠计算应不低于2 000。见图1。

2.2 对照品溶液的制备 取双氯芬酸钠对照品适量(约20 mg)，精密称定，加甲醇溶解并稀释成40 μg/mL的溶液，制备成对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品适量(约相当于双氯芬酸钠20 mg)，加甲醇适量，搅拌使双氯芬酸钠溶解，转移至50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察 按照“2.1”项下色谱条件，精密量取对照品适量(约相当于双氯芬酸钠20 mg)，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线性储备液。分别精密量取线性储备液 2、3、4、5、6、7 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为线性考察的供试液，依次精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(Y)对浓度(X)作线性回归，得回归方程:Y=23.01 X－27.06(r=0.999 0)。结果表明，双氯芬酸钠在15.90～55.41 μg/mL时，与峰面积的线性关系良好。

图1 双氯芬酸钠凝胶高效液相色谱图注:A.辅料，B.溶剂，C.对照品，D.供试品

2.5 精密度试验 精密吸取10 μL对照品溶液，连续进样6次，记录色谱峰面积，其峰面积的RSD为0.58%。

2.6 重复性试验 精密量取供试品适量，依次制备6份供试品溶液，按“2.1”项下方法测定，按外标法计算含量(以双氯芬酸钠计)，平均含量为99.67%，RSD=0.58%，该方法可靠，重复性良好。

2.7 稳定性试验 精密量取对照品溶液10 μL，分别于 0、4、12、24、72 h 进样，记录色谱峰面积。双氯芬酸钠峰面积的RSD为0.25%，表明供试品溶液在72 h内稳定。

2.8 回收率试验 分别精密称取对照品适量(相当于双氯芬酸钠16、20、24 mg)，置50 mL量瓶中，按处方比例加入辅料，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取1 mL溶液，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液，每个浓度制备3份，按“2.1”项下方法，测定双氯芬酸钠的含量，计算回收率。平均回收率为100.48%，RSD=1.28%。见表1。

表1 回收率试验结果

2.9 样品测定 取双氯芬酸钠凝胶，按“2.1”项下色谱条件，分别取10 μL供试品溶液和对照品溶液，分别进样。以峰面积按外标法计算含量，测得3批样品的含量分别为100.32%、101.66%、99.43%。平均含量为100.47%。

3 讨论

笔者根据双氯芬酸钠凝胶剂的特点，通过对比双氯芬酸钠片、双氯芬酸钠栓剂质量标准［4］含量测定项下的色谱条件和双氯芬酸钠凝胶质量标准［5］含量测定色谱条件，依据《药品质量标准分析方法验证指导原则》(中国药典2010版二部附录XIXA)［6］进行方法学验证。本品采用双氯芬酸钠片含量测定色谱条件未能将双氯芬酸钠洗脱，而采用双氯芬酸钠凝胶军规，原含量测定色谱条件空白辅料峰与主成分峰完全分离，但内标物联苯双酯峰未能与辅料完全分离。所以参考双氯芬酸钠凝胶含量测定色谱条件，改用外标法作为本品的含量测定方法。

本研究同时考察了该方法的耐用性，通过改变流速、波长、流动相比例、流动相pH值及色谱柱，测定供试品中双氯芬酸钠的含量，呈现良好的结果，该方法适用于双氯芬酸钠凝胶中双氯芬酸钠的含量测定。

［1］ 高晓波，张洪.HPLC法测定双氯芬酸钠水凝胶中双氯芬酸的含量［J］.湖北医药学院学报，2011，30(1):75-77.

［2］ 乔明艳.国内双氯芬酸钠制剂开发概况［J］.实用药物与临床，2010，13(5):379-380.

［3］ 黄红深.用高效液相色谱法测定双氯芬酸钠的杂质［J］.北方药学，2011，8(1):3-4.

［4］ 中国药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:73-74.

［5］ 中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范［S］.北京:人民军医出版社，2002:附录14.

［6］ 中国药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录194.