结核感染T淋巴细胞斑点试验在骨结核病诊断中的临床应用价值

李建华，张文龙，鲍玉成，商振德，邱南海

（天津市海河医院骨科，天津300350）

结核感染T淋巴细胞斑点试验在骨结核病诊断中的临床应用价值

李建华，张文龙，鲍玉成，商振德，邱南海

（天津市海河医院骨科，天津300350）

结核病是目前全球最常见的传染性疾病之一，结核分枝杆菌相关检查在各种结核病确诊过程中有着举足轻重的作用。传统诊断结核病主要依赖于结核菌涂片，经抗酸染色然后在显微镜下观察，尽管该方法的特异性较强，但是其敏感性较低，且对某些类型结核病如骨结核、中枢神经系统结核来说标本采集难度较大［1－2］，从而使得该方法在临床上的应用受到了极大的限制。随着研究的深入，诸多新技术逐步用于结核病的诊断。本研究旨在探讨结核感染T淋巴细胞斑点试验（T－SPOT.TB）在骨结核病诊断中的临床应用价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年6月－2014年12月我院收治的150例骨结核、15例类风湿性关节炎、22例布氏菌病、17例化脓性脊柱骨关节感染、18例骨性关节炎、23例骨肿瘤，所有患者均符合相应的诊断标准，并完善所有检查，排除各种原发性或继发性免疫功能缺陷患者。4组患者性别、年龄等一般资料相比差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 4组患者一般资料的比较

1.2 研究方法

1.2.1 PPD皮试 将0.1ml PPD（北京祥瑞生物制品有限公司生产，国药准字S10960016，规格为每1ml含50IU结核菌素纯蛋白衍化物）在研究对象左侧或右侧前臂内侧给予皮内注射，注射48－72h后对反应面积进行测量。结果判断［3］：硬结直径≤5 mm提示（－），硬结直径5－9mm提示（＋），硬结直径10－19mm提示（＋＋），硬结直径≥20mm或者有水泡甚至坏死时提示（＋＋＋）。

1.2.2 抗结核抗体检测 采用酶联免疫吸附试验（ELSIA法），抽取研究对象静脉血3ml，3 000rpm离心5min分离血清，取血清按试剂盒（成都永安制药有限公司）说明进行抗结核抗体检测。结果判断：样本的吸光值／临界对照品的吸光度值＞1.2为阳性，＜1.0为阴性。

1.2.3 T－SPOT.TB 抽取研究对象静脉血5ml，肝素抗凝，采用无菌Ficoll淋巴细胞分离液进行单个核淋巴细胞分离，淋巴细胞计数结束后进行TSPOT.TB，试剂盒由Oxford Immunotec Ltd生产。结果判断：当阴性对照孔斑点数为0－5时（抗原A孔或抗原B孔斑点数－阴性对照孔斑点数）×4≥24为阳性，反之为阴性。当阴性对照孔斑点数≥6时，抗原A孔或抗原B孔斑点数≥2×阴性对照孔斑点数为阳性，反之为阴性。

1.3 统计学分析

采用SPSS19.0统计软件进行数据分析，不同诊断方法SPN以及SPE的比较采用配对χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PPD皮试诊断骨结核的临床价值分析 PPD皮试诊断骨结核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分别为59.33%、75.79%、79.46%、54.14%、65.71%，见表2。

表2 PPD皮试诊断骨结核的临床价值分析

2.2 抗结核抗体检测诊断骨结核的临床价值分析抗结核抗体检测诊断骨结核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分别为48.67%、86.32%、84.88%、51.57%、63.27%，见表3。

表3 抗结核抗体检测诊断骨结核的临床价值分析

2.3 T－SPOT.TB诊断骨结核的临床价值分析 TSPOT.TB诊断骨结核的SEN、SPE、PPV、NPV、DA分别为84.67%、94.74%、96.21%、79.65%、88.57%，见表4。

表4 T－SPOT.TB诊断骨结核的临床价值分析

2.4 三种方法诊断骨结核的性能比较 T－SPOT.TB诊断骨结核的SEN显著高于PPD皮试、抗结核抗体（χ2值分别为8.3493、12.7992，P＜0.05）。TSPOT.TB诊断骨结核的SPE均显著高于PPD皮试、抗结核抗体（χ2值分别为6.3745、5.8311，P＜0.05）。

3 讨论

结核病是一种感染结核分枝杆菌的传染性疾病，主要经呼吸道吸入病原菌而感染，因此临床上以肺结核最为常见。值得注意的是，结核分枝杆菌感染肺以后可以随着血液传播至全身各个组织、器官，进而导致机体其他组织、器官发生结核菌感染，如骨结核、肾结核、肠结核等等。

如前所述，结核分枝杆菌相关检查在各种结核病确诊过程中有着举足轻重的作用。目前临床上检测结核分枝杆菌的主要方法有结核菌涂片、结核菌培养、PPD皮试、抗结核抗体检测等。与结核菌涂片一样，结核菌培养诊断结核病的主要优点就是SPE强，但是其不足之处除SEN不甚理想、某些类型结核病患者标本采集困难以外，还存在营养要求高、检测周期长等问题［4，5］，因此在本研究并未选用这两种方法作为研究方法。

PPD皮试在目前临床上主要用于结核病的辅助诊断及流行病学调查、卡介苗接种效果观察等。与其他方法相比，PPD皮试的主要优点就是对标本采集无要求，只要注射部位无损伤即可，但是该方法的不足之处较多，如检测结果受患者免疫功能状态影响，结核感染早期、血行播散型肺结核等重症结核等情况结果呈阴性［6］，这些因素导致PPD皮试诊断结核病的SEN、SPE均不甚理想。随着研究的深入，抗结核抗体检测逐步应用于临床，该方法只需要采集患者血清标本即可进行测定，适用于各种类型结核病的诊断，因此临床应用范围得到显著扩大。尽管如此，由于交叉免疫反应、隐性结核菌感染、机体体液免疫缺陷、特异性抗体与结核抗原形成免疫复合物、试剂质量等因素的存在［7－8］，导致抗结核抗体检测诊断结核病的SEN、SPE仍然有进一步提升的空间。

T－SPOT.TB是目前临床上诊断结核病的新方法之一，其主要原理就是应用酶联免疫斑点技术对患者体内是否产生结核效应T淋巴细胞进行检测，从而对患者是否感染结核杆菌进行判断［9］。在实际操作过程中，尽管该方法的操作稍显复杂，但是本研究显示其诊断骨结核的SEN、SPE均显著高于PPD皮试、抗结核抗体（均P＜0.05）。分析其原因，TSPOT.TB具有不受患者免疫状态影响，并且只对结核分枝杆菌敏感，与其他类型分枝杆菌无交叉反应等特点［10］，从而使得该方法SEN、SPE得到大幅度提高。综上所述，T－SPOT.TB诊断骨结核的可靠方法，值得临床推广应用。

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李建华（1981－），女，硕士，主治医师，研究方向：骨关节疾病、骨关节结核。

2015－03－09）

1007－4287（2015）10－1770－03