兰索拉唑有关物质测定方法的比较研究

陈 苑，宋粉云

（1.广东省中医院，广东 广州 510120； 2.广东药学院药科学院，广东 广州 510006）

兰索拉唑是继奥美拉唑后研发的第2个质子泵抑制剂，临床主要用于胃溃疡、十二指肠溃疡、反流性食管炎等[1－3]，具有抑酸作用强而持久、症状消失快、溃疡愈合率高、生物利用度高和起效快等优点，临床已广泛使用[4－5]。但兰索拉唑及其制剂非常不稳定，在生产、贮存过程中都有可能会产生氧化物、磺酰化物等杂质[6－7]。2010 年版《中国药典·第一增补本》（以下简称 ChP2010）[8]、35 版《美国药典》（以下简称 USP35）、7.0 版《欧洲药典》（以下简称EP7.0）均收载了兰索拉唑的有关物质检测方法，但检测方法及控制限度各不相同，特别是ChP2010并未对已知杂质进行控制，而且控制的限度也远低于欧美药典。针对国内兰索拉唑肠溶片的质量标准落后于欧美相关标准的情况，笔者对兰索拉唑肠溶片的有关物质检测方法重新进行了比较研究，并建立了更科学可靠的有关物质测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters 2695型高效液相色谱仪，Waters 2489型紫外检测器，Waters 2996型PDA检测器，EMPOWER工作站；赛多利斯电子分析天平；乙腈、三乙胺为色谱纯，磷酸为分析纯，水为超纯水；兰索拉唑对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100709－201103，含量为 99.7%）；兰索拉唑 EP杂质 A对照品（批号为130328，含量为 96.5%），兰索拉唑 EP杂质 B对照品（批号为130322，含量为 99.5%），兰索拉唑 EP杂质 C对照品（批号为103577－40－8，含量为 97.9%），兰索拉唑 EP杂质 D 对照品（批号为110503，含量为97.0%），兰索拉唑EP杂质 E对照品（加拿大 MOLCAN公司，批号为 120619，含量为98.9%），兰索拉唑 EP杂质 F对照品（批号为 130411，含量为 98.8%），均为加拿大MOLCAN公司产品；兰索拉唑（A厂，批号为130901；B厂，批号为140101）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Waters Symmetry Shield C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）及 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：ChP2010 为甲醇－水－三乙胺－磷酸[500∶400∶5∶1.5，用磷酸溶液（1→10)调节 pH至 7.3]；USP35为以水为流动相 A，乙腈－水－三乙胺（160∶40∶1）用磷酸调节 pH至 7.0为流动相 B，进行线性梯度洗脱，见表 1；EP7.0 为三乙胺（三乙胺 1 mL，加水 60 mL，用磷酸调节 pH 至 6.2）－乙腈（60 ∶40）；检测波长均为 285 nm。分别量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液，用同一根色谱柱对3种流动相进行比较，3种流动相系统适用性试验色谱图见图1。

结果表明，采用ChP2010流动相时，对照品溶液杂质D和E、杂质B和F不能有效分离；采用USP流动相时，对照品溶液中杂质 A，B，C，D，E，F与兰索拉唑峰之间的分离情况很好，且供试品溶液中其他单一杂质分离情况也很好；采用EP7.0流动相时，对照品溶液中杂质 A，B，C，D，E，F与兰索拉唑峰也能有效分离，但供试品溶液中除已知杂质以外的大多数杂质峰均在主峰保留时间以前出峰，集中在溶剂峰附近，其他单一杂质分离情况不好。由于ChP2010的流动相系统不能满足系统适用性的要求，故仅对USP35及EP7.0作了进一步对比。

2.2 溶液制备

ChP2010：以甲醇－0.1 mol/L 氢氧化钠（4 ∶1）为溶剂，将兰索拉唑制成质量浓度为2 g/L的溶液，得供试品溶液；将兰索拉唑对照品及杂质 A，C，D，E，F 对照品制成质量浓度为 2 μg/mL，杂质 B对照品制成质量浓度为8 μg/mL的混合溶液，得对照品溶液。以甲醇－0.1 mol/L 氢氧化钠（4 ∶1）作为空白溶液。

表1 USP35中流动相梯度洗脱表

USP35：以甲醇－0.1 mol/L 氢氧化钠（1 ∶3）为溶剂，将兰索拉唑制成质量浓度为2 g/L的溶液，得供试品溶液；将兰索拉唑对照品及杂质 A，C，D，E，F 对照品制成质量浓度为 2 μg/mL，杂质B对照品制成质量浓度为8 μg/mL的混合溶液，得对照品溶液。空白溶液同ChP2010。

EP7.0：以三乙胺溶液（取水 60 mL，加三乙胺1 mL，用磷酸调节 pH至 10.5）－乙腈（60∶40）为溶剂，将兰索拉唑制成质量浓度为2 g/L的溶液，得供试品溶液；将兰索拉唑对照品及杂质A，C，D，E，F 对照品制成质量浓度为 2 μg/mL，杂质 B 对照品制成质量浓度为8 μg/mL的混合溶液，得对照品溶液。以三乙胺（取水 60 mL，加三乙胺 1 mL，用磷酸调节 pH 至 10.5）－乙腈（60∶40）作为空白溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

线性关系考察、检出限和定量限确定：精密量取2.2项下按USP35及EP7.0配制的对照品溶液，使用各自溶剂逐级稀释，得到系列质量浓度的对照品溶液，分别采用2.1项下的USP35及EP7.0色谱条件进行测定。以进样量 X（μg）对峰面积 Y作图，绘制标准曲线，按信噪比(S/N＝3)计算检出限(LOD)，10倍信噪比(S/N)计算定量限(LOQ)。结果见表2。可见，两种方法的线性关系良好，USP35方法的灵敏度稍低于EP7.0方法。

表2 USP35和EP7.0方法的回归方程、线性范围、LOD和 LOQ比较(n＝7)

精密度试验：精密量取按 USP35及 EP7.0配制的同一对照品溶液，分别采用USP35及EP7.0的色谱条件进行测定，连续进样5次。结果两种方法各色谱峰的保留时间波动均小于0.02 min，RSD 分别为 0.14% ～0.66%(n＝5)，0.05% ～0.40%(n＝5)，表明两种方法仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批次的兰索拉唑，照供试品溶液制备方法制备溶液，各6份，分别采用USP35及EP7.0的色谱条件进行测定。结果的 RSD＜2.0%(n＝6)，表明方法重复性好。

加样回收试验：称取兰索拉唑约0.25 g，精密称定，共9份，分别置 10 mL容量瓶中；另精密称取杂质 A，B，C，D，E，F对照品适量，加溶剂使溶解并稀释使成每1 mL中约含杂质B 0.1 mg，杂质 A，C，D，E，F 各约 0.02 mg的对照品溶液。分别精密量取 0.8，1.0，1.2 mL各3份，分别置上述10 mL容量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，并计算回收率。结果见表3。

表3 USP35和EP7.0方法加样回收试验结果（n＝3）

2.4 样品含量测定

取兰索拉唑，在拟订色谱条件下按 ChP2010，USP35，EP7.0方法测定样品的有关物质。结果见表4。

3 讨论

对系统适用性试验及样品有关物质测定结果进行比较，可见ChP2010的流动相不能将杂质有效分离，而EP7.0的流动相虽能将杂质 A，B，C，D，E，F分开，但由于其他杂质的出峰时间均集中在主峰出峰之前，会干扰到已知杂质的检出，检出杂质数量明显少于USP35的流动相检出的杂质数量。

表4 样品有关物质测定结果比较

本试验结果显示，使用USP35收载的溶剂时，杂质C及杂质E的回收率较低，分别为81%和76%；而使用EP7.0收载的溶剂时，杂质C及杂质E的回收率能达到98%～102%的要求，样品中杂质的检出率更高。ChP2010仅规定了单个杂质不得过0.5%，总杂质不得过2.0%，限度值远低于欧美药典；欧美药典仅杂质B限度为 0.4%，其余杂质均控制限度为 0.1%，总杂质限度为0.6%。由破坏试验可知，氧化破坏主要产生杂质 A，B，D，高温破坏主要产生杂质C和E，仅杂质 F未检出，故对杂质 A，B，C，D，E进行单独控制是很有必要的。

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