正交试验法优选姜黄饮片切制工艺*

杨海玲 ，许丹妮 ，吴尤娇，黄华艳，徐 信

(1.广西中医药大学，广西 南宁 530001； 2.广西民族师范学院，广西 崇左 532200）

姜黄为姜科植物姜黄 Curcuma longa L.的干燥根茎，具有破血通经、行气止痛的功效，用于治疗心腹痞满胀痛、妇女血癖经闭等证[1]。姜黄炮制方法在历代医药专著、《中国药典》及各省炮制规范均有记载，但均未规定具体的切制工艺参数，且炮制工艺不统一[2]。姜黄中主含挥发油和姜黄素[3]，其中姜黄素可抗氧化、抗炎、抗肿瘤[4]，挥发油则可抗菌、抗病毒等[5]。因此，本试验中采用正交试验设计法优选姜黄饮片最佳切制工艺，以期为姜黄饮片炮制规范化研究及质量标准的制订提供科学依据。

1 仪器与试药

LC－1100AT型高效液相色谱分析仪（安捷伦公司，紫外检测器）。姜黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110823～200603）；甲醇、乙腈均为色谱纯；纯净水等；姜黄购于广西玉林药材市场，经广西中医学院韦松基教授鉴定为姜科植物姜黄 Curcuma longa L.的干燥根茎。

2 方法与结果

2.1 样品制备

将姜黄药材净选除杂后，等量称取9份样品，每份120 g，略泡30 min，按 L9（34）正交试验表工艺进行焖润、切片，放入烘箱中进行干燥。饮片编号为1～9。

2.2 姜黄素及挥发油含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Shimadzu VP－ODS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相:乙腈－0.1% 冰醋酸溶液(48 ∶52)；流速 1.0 mL /min；紫外检测波长:430 nm；柱温35℃。拟订色谱条件下，姜黄素分离较好，相邻峰间分离度均大于1.5，理论板数按姜黄素峰计算应不低于10 000。色谱图见图1。

2.2.2 溶液制备

精密称取姜黄素对照品0.003 0 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得对照品溶液。分别精密称取各样品粉末（80 目）0.2 g，精密加入甲醇 25 mL ，称重，回流提取 30 min，放冷，补足减失的质量，过滤，取滤液适量，离心冷藏备用，即得供试品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.2.3 线性关系考察

分别精密吸取姜黄素对照品溶液 2，4，6，8，10 μL，按拟订色谱条件测定，以峰面积(Y）对姜黄素对照品进样量(X，μg)进行线性回归，得回归方程 Y＝13 261.583 3 X＋62.3，r＝0.999 8(n＝5)。结果表明，姜黄素进样量在 0.24 ～ 1.20 μg 范围内与峰面积线性关系良好。

2.2.4 含量测定

取上述供试品溶液分别进样10 μL，按2.2.1项下条件测定姜黄素含量。分别称取姜黄各样品粉末25 g（24目），置2 000 mL的圆底烧瓶中，加入 800 mL的蒸馏水和数粒沸石，按 2010年版《中国药典(一部)》附录ⅩD挥发油测定法测定挥发油。结果见表 1。

表1 不同样品中姜黄素与挥发油含量测定结果(n＝3)

2.3 正交试验

正交表选择及因素水平设计：根据预试验结果，焖润时间(A)、切片厚度(B)、干燥温度(C)为姜黄切制的主要影响因素，干燥时间(D)为次要因素，每个因素取3个水平，选用 L9（34）正交试验表进行试验设计，见表2。

表2 姜黄饮片切制正交试验因素水平

表3 姜黄饮片切制工艺正交试验设计及结果

表4 方差分析结果

方差分析：结果见表4。姜黄切制工艺的影响因素为C(干燥温度)＞A（焖润时间）＞B（切片厚度）＞D（干燥时间），且干燥温度与焖润时间对挥发油与姜黄素含量有显著性影响。根据直观分析及生产实际情况，取重要因素较高的组合，得到较佳工艺条件为 A1B2C2D1，即焖润 8 h，厚度 2 mm，35 ℃ 烘 7 h。

2.4 验证试验

按优选的切制工艺制备2份样品，按含量测定项下方法进行测定。结果见表5。2份样品中姜黄素与挥发油的含量均较高，与正交试验结果吻合，说明本试验最佳切制工艺可行。

表5 姜黄饮片切制工艺验证试验结果(n＝3)

3 讨论

本试验中对姜黄的切制工艺进行优选，确立最佳工艺为焖润8 h，厚度2 mm，35℃烘7 h。姜黄传统的炮制方法大多采用泡法处理软化药材，由于长时间的浸泡在水中，容易出现严重的“下色”现象，易造成药物中的成分流失于水中，造成质量下降。本研究中进行了改进，使其在适量水中略泡较短时间约（30 min），再用先前泡药材时剩余水及适量清水用润法进行软化，使药材慢慢的吸收水分，这样既符合“少泡多润”的水处理原则，又减少了有效成分的损失。由表1可见，姜黄素与挥发油的含量均较《中国药典》的规定高，可佐证。由验证试验结果可见，本工艺简便、稳定、可行，可为进一步研究姜黄的质量标准提供科学依据。因此，该方法可进一步在生产中推广，既可大大地提高生产效率，又可保证饮片质量保证临床疗效。

姜黄是药食两用的植物资源，同时也是主含芳香挥发性成分的药材。由本试验结果可见，影响姜黄切制工艺的主要因素有干燥温度及焖润时间，对其主要成分挥发油与姜黄素含量的影响最显著。分析原因可能是饮片切片过薄，表面积增大，干燥时温度过高及时间过长均容易造成挥发油、姜黄素等挥发性成分散失；反之切片太厚，则有效成分又不易煎出。因此在切制加工时，一方面应注意在切制前应将姜黄按个头大小分档进行焖润，以保证焖润程度的均匀性，同时依“少泡多润”原则以减少有效成分的损失；另一方面应注意切片厚度及干燥温度与时间对其有效成分的影响。

本试验证明，切制的厚度、干燥温度和时间影响其中的姜黄素与挥发油含量。规范姜黄切片工艺，控制切片厚度、干燥温度时间等工艺参数，可以提高饮片质量。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010:247.

[2]杨海玲，覃 葆，徐 信，等.姜黄炮制历史沿革研究[J].广西中医学院学报，2012:15（1）：59－60.

[3]刘康莲，聂开敏，杨再波，等.姜黄挥发油的提取工艺及抗氧化活性研究[J].安徽农业科学，2008，36（20）：8 643－8 644.

[4]赵 鹏，蔡 辉.姜黄素抗血管新生作用研究进展[J].医学临床研究，2011，28（7）：1 407－1 409.

[5]刘红星，陈福北，黄初升.广西姜黄挥发油两种提取方法的比较研究[J].广西植物，2007，27（5）：796－800.