复方紫草油药效学研究

刘小丹，刘玉强，庞 雪，才 谦

(辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)



复方紫草油药效学研究

刘小丹，刘玉强，庞 雪，才 谦*

(辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600)

目的：观察复方紫草油对小鼠背部慢性湿疹的影响，探讨其可能的作用机制。方法：KM小鼠用2，4-二硝基氯苯造成慢性湿疹模型，每组给予复方紫草油、阳性药(999皮炎平)、麻油，经皮给药10天后，测定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平，取各组免疫器官(胸腺、脾脏)计算脾脏、胸腺系数。结果：复方紫草油能够改善湿疹症状，升高血清中IL-2、IFN-γ水平，降低血清中IL-4、IL-6水平，并且能够降低免疫器官的比重系数。结论：复方紫草油对小鼠慢性湿疹具有治疗作用，其作用机制可能与调节T辅助细胞(Th1、Th2)的动态平衡有关。

慢性湿疹；复方紫草油；细胞因子

湿疹(eczema)是由于多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的皮肤炎症，病因十分复杂，是由T细胞介导的细胞免疫[1]。临床上用于治疗湿疹的药物主要有苯海拉明、糖皮质激素等，有一定的临床效果，但均表现出比较明显的不良反应，在用于治疗慢性皮炎——湿疹时受到很大限制[2]。复方紫草油出自临床使用的验方，具有预防治疗烧伤、烫伤、褥疹、湿疹等功效[3]。该方由紫草、地榆、黄柏组成，以麻油加热熬炼而成。紫草含乙酰紫草素，具有清热解毒、止痒消肿除湿及抗过敏之功效，与地榆、黄柏两味中药配伍使用后使其消炎利湿、止痒解毒、促进伤口愈合的作用。本文采用2，4-二硝基氯苯造湿疹模型，测定给药后血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平并计算脾脏、胸腺系数，评价复方紫草油的药效，探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

KM小鼠，体重( 20±2)g，由辽宁长生生物技术有限公司提供。

1.2 药物、试剂

复方紫草油(自制)，999 皮炎平( 复方醋酸地塞米松乳膏，三九医药股份有限公司，批号0804089)；2，4-二硝基氯苯(2，4dinitrochlorobenzene)，长沙晶康新材料科技有限公司产品(批号20131210JD)，以丙酮配成0.5%和7%的DNCB丙酮溶液；白细胞介素-2 (IL-2)，白细胞介素-4 (IL-4)，白细胞介素-6 (IL-6)，γ干扰素 (IFN-γ) 酶联免疫试剂盒购自上海科兴商贸有限公司(批号201410)。

1.3 分组与造模

参照Boyera方法加以改进[4]造模。取50只KM小鼠，雌雄各半(40只造模，10只作为正常对照)，致敏前1天，小鼠腹部用脱毛膏脱毛，选取大约2cm×2cm以备使用。实验第1天，量取7% DNCB丙酮溶液25μL抹于小鼠腹部脱毛区激发致敏，实验第2天进行强化1次。实验第5天给小鼠背部脱毛，选取大约2cm×2cm范围以备使用。从实验第6天开始，在小鼠背部脱毛区涂抹0.5% DNCB丙酮溶液60μL，1次/3天，共4次。末次激发24h后，处死10只小鼠，检测各项指标，作为模型组。将余下30只小鼠随机分为复方紫草油组、阳性药(999皮炎平)组、麻油组，每组10只。麻油组作为溶剂对照组。

1.4 给药

各组小鼠经皮给药，3次/天，连续10天。10天后取血，测定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平；取免疫器官(胸腺、脾脏)，计算免疫器官系数。

1.5 观察指标

1.5.1 脾脏、胸腺系数的测定 各组小鼠处死后，进行解剖并且取出脾脏、胸腺，称重，并计算脾脏、胸腺的系数，公式为：脏器系数=脏器质量/体质量×100%。

1.5.2 血清IL-2，IL-4，IL-6，IFN-γ值的测定 小鼠经眼部取血1mL，3 000r·min- 1离心10min，取出血清置于微量离心管内，保存在-80℃冰箱中备用，采用酶联免疫测定法测定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ值，步骤按照IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ试剂盒中的说明书进行。

1.6 统计学处理

2 结果

2.1 病理变化

造模后，小鼠背部出现湿疹样反应，表现为不同程度的弥漫性红斑、抓痕伴血痂、水肿，边境不清，有少许栗粒样丘疹。在给药5天后观察，模型组小鼠湿疹样症状没有显著的改善，而复方紫草油组小鼠背部则表现出红斑颜色变淡，水肿减轻，抓痕和血痂变少情况。

2.2 免疫脏器系数改变

模型组与空白组相比较，模型组的胸腺系数与脾脏系数均小于空白组，差异有统计学意义(P<0.05)。复方紫草油组、阳性药(999皮炎平)组与模型组相比较，胸腺系数与脾脏系数均小于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)。在实验中，麻油组作为溶剂对照组与模型组相比较，麻油组脾脏系数与胸腺系数均接近于模型组，差异无统计学意义(P>0.05)。实验数据见表1。

2.3 复方紫草油对慢性皮炎—湿疹小鼠血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ水平的影响

模型组与空白组相比较，血清中IL-2、IFN-γ水平明显降低，IL-4、IL-6的水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。复方紫草油组与模型组相比较，升高了血清中IL-2、IFN-γ的水平，降低了血清中IL-4、IL-6的水平，差异有统计学意义(P<0.05)。999皮炎平组与模型组相比较，升高了血清中IL-2、IFN-γ的水平，差异有统计学意义(P<0.05)。IL-4、IL-6值差异无统计学意义(P>0.05)。麻油组作为溶剂对照组与模型组相比较，各指标比较差异无统计学意义(P>0.05)，表明麻油作为溶剂对湿疹模型没有治疗作用。实验数据见表2。

表1 各组脾脏、胸腺系数比较 (±s，%)

注：与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，▲P<0.05。

表2 复方紫草油对小鼠湿疹模型血清细胞因子的影响 (±s，n=10)

注： 与空白组比较*P<0.05；与模型组比较，▲P<0.05。

3 讨论

湿疹是由内外多种复杂因素引起的一种常见的炎症性、过敏性皮肤病。研究表明T淋巴细胞异常在湿疹的发病过程中占有重要的地位，尤其是T辅助淋巴细胞(Th1/Th2)的动态失衡引起的细胞因子分泌紊乱，在湿疹炎症的发生发展过程中起着十分重要的作用[5]。实验结果显示，湿疹患者血和皮损中平衡失调的Th1/Th2细胞亚群中Th2细胞功能亢进，Th2细胞所表达或分泌的IL-4水平升高，而Th1细胞所表达或分泌的IL-2、IFN-γ的水平降低[6]。本研究湿疹模型的病理表现与人类湿疹相类似，测定血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平，和正常组相比较，具有显著性差异，并且与相关文献报道一致[7-8]，表明成功建立了小鼠湿疹模型。给药后发现，复方紫草油能降低免疫器官的比重系数，能有效缓解湿疹引起的肿胀、红斑等症状，对损害的皮肤进行修复，并能升高血清中IL-2、 IFN-γ的水平，降低血清中IL-4、IL-6的水平。这些结果表明复方紫草油对小鼠慢性湿疹有治疗作用，且其作用机制可能是通过调节血清中IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ的水平，使失衡的T辅助淋巴细胞(Th1 /Th2)重新恢复平衡而实现的，其调节Th1和Th2平衡的具体机制有待更深入的研究。

[1] FOLKMAN J.Angiogenesis in cancer，vascular，rheumatoid and other disease[J].Nature Medicine，1995(1):27-31.

[2] 李传应，王 春，魏伟.白芍总苷对小鼠慢性皮炎—湿疹的治疗作用及其部分机制[J].中国药理学通报，2008，24(10):1366-1369.

[3] 杨 慧，白希林，李特.复方紫草油的制备及临床观察[J].亚太传统医药，2008，4(12):68-69.

[4] 孙明立，魏敏杰，金万宝，等.两种变应性接触性皮炎动物模型的建立及比较[J].中国实验动物学报，2008，12(2): 132.

[5] 陆丽明，程楷涛.湿疹发生机理的研究进展[J].亚太传统医药，2007，3(9):76.

[6] MOSMANN T R,SAD S.The expanding universe of T-cell subsets:Thl, Th2 and more[J].Immunology Today,1996,17(3):138-146.

[7] 张开明，李秉煦，唱文鹃，等.变应性疾病患者血清IL-4,sCD23的研究[J].中华皮肤科杂志，1998,31(6):357-359.

[8] 邬成霖，罗维丹，寇霄，等.中药复方除湿汤治疗慢性湿疹的实验研究[J].中国中西医结合皮肤性病学杂志，2004，3(4):220-222.

(责任编辑：宋勇刚)

The Pharmacodynamics of Compound Zicao Oil

Liu Xiaodan, Liu Yuqiang ,Pang Xue, Cai Qian*

(College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian116600，China)

Objective:To investigate the effect of compound Zicao Oil on the model of chronic eczema and to explore the potential mechanism.Methods:Chronic eczema models were induced by 2,4-dinitrochlorobenzene(DNCB)and then they were divided into three groups that were treated with the medicine of compound Zicao Oil、Mometasone Furoate Gel、Sesame Oil.After giving medicine, the contents of interleukin-2, interlenkin-4, interleukin-6, interferin ( IFN-γ) in serum and the parameters of spleen and thymus were detemined.Results:Compound Zicao Oil can improve the symptom of chronic eczema, increase the contents of interleukin-2, interferin ( IFN-γ) and decrease the contents of interlenkin-4, interleukin-6 in serum and reduce the parameters of spleen and thymus.Conclusion:Compound Zicao Oil can treat chronic eczema effectively.The mechanism of treating chronic eczema maybe related to adjust the dynamic of T helper cells.

Eczema;Compound Zicao Oil;Cytokines

2015-06-30

刘小丹(1990-)，女，辽宁中医药大学硕士研究生，研究方向为中药化学和中药炮制学。

才谦(1972-)，女，辽宁中医药大学教授，研究方向为中药化学和中药炮制学。E-mail：caiqianmail@sina.com

R285.5

A

1673-2197(2015)23-0009-02

10.11954/ytctyy.201523004