红根消肿止痛有效部位筛选研究*

王丽娜，栾晓文

(1.云南省中医中药研究院，云南 昆明 650223；2.成都军区昆明总医院，云南 昆明 650032)



红根消肿止痛有效部位筛选研究*

王丽娜1，栾晓文2△

(1.云南省中医中药研究院，云南 昆明 650223；2.成都军区昆明总医院，云南 昆明 650032)

目的 本课题拟对红根进行消肿止痛有效部位的筛选研究，确定其有效部位。方法 本课题着重进行不同浓度乙醇及水对红根的提取，将提取液进行定性分析，总固体测定，动物实验等筛选出红根消肿止痛有效部位。结果 红根的30%醇提液～90%醇提液具有较好的止痛效果，30%、50%的乙醇溶液有一定的降低小鼠耳肿胀作用。结论 红根30%醇提液取液的有效成分最多，消肿止痛作用明显。

红根;有效部位;消肿止痛

红根是天南星科天南星属植物红根南星(AnsaemacalcareumH.Li.)系云南苗族民间医生普遍用于治疗腮腺炎、乳腺炎、疔疮、痈疽、无名肿毒、毒蛇咬伤等地方传统习用药材，已列入云南省药材标准。目前文献资料仅有对红根进行过生药鉴定及红根药材质量标准研究报道，而对红根作用有效部位的筛选研究未见报道。本课题拟对红根进行消肿止痛有效部位的筛选研究，确定其有效部位。

1 用渗漉法提取红根

1.1 由于红根中含有黏液质，将红根粉碎成过2号筛的粗粉难以用水和低浓度乙醇渗漉提取。因此，将红根敲碎，过10号筛，备用。

1.2 实验方法 称取5份红根根茎粗粉，各100.0 g，分别用纯化水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇100.0 mL润湿(放置1h)。然后装筒，加溶剂(分别添加300.0 mL溶剂)，排气，浸渍(24 h)，渗漉，收集渗漉液备用。

1.3 渗漉液收集情况 见表1。

表1 不同剂量提取物比较

2 红根化学成分预试验

2.1 水渗漉液预试验 鉴别项目为氨基酸、多肽、蛋白、糖、多糖类、皂苷、鞣质、有机酸、生物碱类，参照药典检测标准，分别加入鉴别试液，结论为红根水渗漉液含有糖、多糖类、有机酸、可能含有皂苷及生物碱类。

2.2 乙醇渗漉液预试验

2.2.1 90%乙醇渗漏液 鉴别项目为黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素、内酯类、强心苷类、植物甾醇、三萜类、生物碱、挥发油及油脂，分别加入鉴别试液，结论为红根90%乙醇漉液含有黄酮类、酚类、大量生物碱、可能含有三萜。

2.2.2 70%乙醇渗漉液 鉴别项目为黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素、内酯类、强心苷类、植物甾醇、三萜类、生物碱、挥发油及油脂，分别加入鉴别试液，结论为红根70%乙醇漉液含有黄酮类、生物碱、可能含有三萜及植物甾醇。

2.2.3 50%乙醇渗漉液 鉴别项目为黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素、内酯类、强心苷类、植物甾醇、三萜类、生物碱、挥发油及油脂，分别加入鉴别试液，结论为红根70%乙醇漉液含有黄酮类、生物碱、可能含有三萜及植物甾醇。

2.2.4 30%乙醇渗漉液 鉴别项目为黄酮类、蒽醌类、酚类、香豆素、内酯类、强心苷类、植物甾醇、三萜类、生物碱、挥发油及油脂，分别加入鉴别试液，结论为红根70%乙醇漉液含有黄酮类、生物碱、可能含有三萜及植物甾醇。

3 5种不同溶剂的红根提取液总固体测定

分别量取以上5种提取液25.0 mL，置已衡重的蒸发皿中，在水浴上蒸干，于105℃的烘箱中烘烤5 h，取出，置干燥器中。冷却30 min后，称重。见表2。

表2 不同溶剂的红根取液总固体测定

4 动物实验

4.1 实验药材与动物 实验药材：红根根茎(云南省文山州西畴县把独乡)。实验动物：近交系雄性小鼠，体重18-22 g。KM小鼠，SPF级，许可证号：SOXK(滇)2011-0004，每组10只。

4.2 实验环境 云南中医中药研究所动物实验屏障系统，系统内温度20-26℃，湿度40-60%。

4.3 鼠饲料、垫料及饮用水 鼠饲料由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司提供，饲料生产许可证号：鼠垫料为玉米芯垫料，由苏州双狮实验动物饲料科技有限公司苏州竹灵贸易有限公司提供。饮用水自制。

4.4 试剂 无水乙醇 AR级(天津市致远化学试剂有限公司)，二甲苯 AR级(天津市风船化学试剂科技有限公司)，云南白药酊(云南白药集团)，纯化水。

4.5 实验仪器与器材 电热恒温水浴锅(北京市永光明医疗仪器厂)，SQP电子天平、BP310S分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司)，XZC-A型压痛仪(山东省医学科学院设备供应维修站)，手术剪、直径9 mm的打孔器，优普系列超纯水制造系统UHP-IV-20T(成都超纯水科技有限公司)等。

4.6 有效部位的提取 采用溶剂提取法。根据溶剂与溶质相似相溶原理，所选择的溶剂穿透入药材粉末的细胞膜，溶解溶质形成细胞内外溶质浓度差，将溶质渗出细胞膜，达到提取有效成分的目的。

分别称取100 g红根药材粉于5个烧杯中，各加入提取溶剂100 mL润湿1 h，然后分别装入5个渗漉筒中，在各加入提取溶剂300 mL，排出渗漉筒内的空气，浸润24 h[4]。浸润后，开始渗漉24 h，得到红根选用不同浓度(30、50、70、90%)的乙醇及水的不同提取物。

4.7 实验方案4.7.1 小鼠压痛实验 取20-25 g小鼠，雌雄各半，设置空白对照组、阳性对照组和水提液组、30%醇提组、50%醇提组、70%醇提组、90%醇提组。每组10只小鼠，测定其基础痛阈值并记录。尾巴外敷给药5天，30 min后，测定给药后的痛阈值，前后两次痛阈值差对比空白对照组和阳性对照组的痛阈值差，从而确定不同浓度的乙醇及水的不同提取物的止痛效果。

XZC-A型压痛仪工作原理：给小鼠尾巴施加连续递增的压力，使其产生疼痛。当压力达到小鼠的痛阈时，被装在固定器的小鼠会发出叫声，听到叫声时可判断达到痛阈，停止施压，并将此时压力值(痛阈)记录下来。取给药前间隔5 min测3次所得数值的均数为基础痛阈值[5]。

4.7.2 小鼠耳廓肿胀实验 小鼠耳廓肿胀实验设置空白对照组、阳性对照组和水提液组、30%醇提组、50%醇提组、70%醇提组、90%醇提组。每组10只，每天耳廓外用给药1次，连续给药5天，末次给药后30 min后各鼠以0.02 mL二甲苯涂搽右耳两面，2 h后脱颈处死，(处死前称重)沿耳廓基线剪下两耳，以8 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片称重，计算肿胀度(两耳重量差)及肿胀抑制率[6]。

肿胀度=右耳片重量-左耳片重量

实验原理：二甲苯是一化学刺激剂，对皮肤黏膜有刺激作用，可致急性炎症，涂布小鼠耳廓有明显的致炎作用，可使小鼠耳廓肿胀，若药物可以抑制这种致炎剂引起的耳重增加即可了解药物的抗炎消肿作用[5]。

4.7.3 实验结果 见表3-4。

表3 小鼠压痛实验

注：与空白组比较，*P<0.05；与空白组比较，**P<0.01

表4 抗二甲苯引起小鼠耳肿胀实验

注：与空白组比较,*P<0.05；与空白组比较,**P<0.01。

由实验组对比空白组和阳性组，阳性组涂擦云南白药酊，实验组分别为红根的水和30%、50%、70%、90%醇提液。由以上二表的统计结果初步分析表明，止痛作用强弱依次是：阳性组、30%醇提组、50%醇提组、70%醇提组、90%醇提组、水提液组。消肿作用强弱依次是阳性组、30%醇提组、50%醇提组。止痛消肿作用明显的是阳性组、30%醇提组、50%醇提组。

5 总结与讨论

通过红根的消肿止痛作用有效部位的研究实验，得出红根的30%醇提液-90%醇提液具有较好的止痛效果，30%、50%的乙醇溶液有一定的降低小鼠耳肿胀作用，初步确定红根提液的消肿止痛有效部位。通过实验分析表明30%的乙醇溶液提取的有效成分最多，消肿止痛作用明显。本课题的完成为提高红根止痛消肿的疗效，降低毒副作用，进一步研究开发新制剂提供依据。

[1]国家中医药管理局编委会.中华本草[M].上海：上海科技出版社，1997.

[2]全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，1996.

[3]云南中草药整理组.云南中草药[M].昆明：云南人民出版社，2011.

[4]匡学海.中药化学[M].北京：中国中医药出版社，2011.

[5]张大方，金若英.药理与中药药理实验(2版)[M].上海：上海科学技术出版社，2006.

[6]曹斌，刘元，宋志钊，等，消肿止痛酊的药效学研究[J].中国实验方剂学，2009.

云南省科技厅应用基础研究计划项目：红根消肿止痛作用有效部位筛选研究(NO：2011FZ235)< class="content">作者简介：王丽娜(1980.9-)，女，云南，药师，研究方向：主要从事中药研究。

王丽娜(1980.9-)，女，云南，药师，研究方向：主要从事中药研究。

△通信作者：栾晓文(1961-)，女，研究方向：中医中药临床研究。E-mail：1295048072@qq.com.

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