前列通窍胶囊对前列腺增生大鼠模型的影响*

张春和，李焱风，赵 凡，陈天波，杨毅坚，张富刚

(云南省中医医院/云南中医学院第一附属医院，云南 昆明 650021)



前列通窍胶囊对前列腺增生大鼠模型的影响*

张春和，李焱风，赵 凡，陈天波，杨毅坚，张富刚

(云南省中医医院/云南中医学院第一附属医院，云南 昆明 650021)

目的 探讨前列通窍胶囊对前列腺增生(BPH)大鼠模型的影响，初步探讨其作用机制。方法 将60只大鼠随机取10只作为空白组，其余50只大鼠采用去势、皮下注射丙酸睾酮法造成前列腺增生模型。将常规造模成功的50只大鼠随机分为模型组、癃闭舒胶囊对照组和前列通窍胶囊低、中、高剂量组，每组10只。空白组、模型组给予蒸馏水，其他各组分别予以相应药品混悬液灌胃给药，给药30天后处死大鼠，称取前列腺湿重并计算前列腺指数，测定前列腺组织中睾酮(T)、雌二醇(E2)的含量及表皮生长因子(EGF)的水平，测定前列腺的腺体密度并用光镜观察前列腺组织病理学改变。结果 与模型组相比，前列通窍胶囊各剂量组均可一定程度降低前列腺增生模型大鼠前列腺湿重及前列腺指数，高、中剂量组可显著降低大鼠前列腺的腺体密度(P<0.01)，均可显著降低T、EGF水平(P<0.01)，但对E2的影响不明显。结论 前列通窍胶囊对前列腺湿重及前列腺的腺体密度均有一定影响，能显著降低前列腺组织中T、EGF水平，揭示了前列通窍胶囊治疗BPH的部分作用机制。

前列通窍胶囊；前列腺增生；动物模型；性激素；表皮生长因子

前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia，BPH)是一种复杂的、由多种因素造成的影响绝大多数老年男性生活质量的常见疾病。从所报道的文献看，中成药治疗BPH的临床疗效大多较好，无明显毒副作用，且服用方便，可长期服用。BPH具有肾虚瘀阻的病机特点[1-2]，前列通窍胶囊(由黄芪、水蛭、菟丝子、肉桂、乌药、益智仁、怀牛膝组成)是云南省中医医院制剂室生产的院内制剂，具有益气补肾、祛瘀通窍、助膀胱气化之功效。本研究通过观察前列通窍胶囊对BPH模型大鼠前列腺组织中性激素、EGF水平及前列腺重量和腺体密度的影响来探讨其部分作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物 雄性SD大鼠60只，清洁级，体重(280±20)g，8月龄，由昆明医科大学实验动物中心提供。实验动物生产许可证：SCXK(滇)2007-0008。发证单位：云南省科学技术厅。

1.2 实验药品 ①前列通窍胶囊：由黄芪、水蛭、菟丝子、肉桂、乌药、益智仁、怀牛膝组成，规格：0.38 g/粒，云南省中医医院制剂室生产(批号：滇2010L-ZJ0001。临用时配成含成药0.038 g/mL的混悬液，其中前列通窍胶囊低剂量组浓度为含成药0.038 g/mL(正常剂量)、中剂量组浓度为含成药0.076 g/mL(正常剂量的2倍)、高剂量组浓度为含成药0.152 g/mL(正常剂量的4倍)。②癃闭舒胶囊：规格：0.3 g/粒，石家庄科迪药业有限公司生产。批号010601。临用时配成含成药0.03 g/mL的混悬液。③丙酸睾丸酮注射液：规格25mg/1mL，由天津金耀氨基酸有限公司生产。④睾酮(T)测定试剂盒：北京北方生物技术研究所，批号20090221；雌二醇(E2)测定试剂盒：北京北方生物技术研究所，批号20090419；表皮生长因子(EGF)试剂盒：上海森雄科技实业有限公司，批号20090415。

1.3 BPH模型制备(参照卫生部《新药(西药)临床前研究指导原则汇编》造模) 将雄性SD大鼠普通饲养1周以适应环境，并经普通观察无异常后，用盐酸氯胺酮注射液100 mg/kg对雄性SD大鼠进行腹腔麻醉，麻醉成功后，将大鼠固定于手术台上，皮肤常规消毒，无菌条件下经阴囊摘除双侧睾丸，结扎残端以确保止血，缝合皮肤。观察1周后，每只大鼠按体重皮下注射丙酸睾丸酮3.5 mg/kg，1次/d，连续给药30天，造成前列腺增生动物模型。

1.4 分组及给药 将60只大鼠随机取10只作为空白对照组，做假手术；其余大鼠造前列腺增生模型。将常规造模的50只大鼠随机分为5组，每组10只：A、模型组；B、癃闭舒胶囊对照组；C、前列通窍胶囊低剂量组；D、前列通窍胶囊中剂量组；E、前列通窍胶囊高剂量组。

给药方法：A组按1 mL/100 g体重给予生理盐水灌胃，B组按l mL/100 g体重给予癃闭舒混悬液灌胃，C、D、E组按1 mL/100 g体重分别给予低、中、高浓度前列通窍胶囊混悬液灌胃，每日1次，连续30天。30天后，一并处死，取前列腺组织待测。

1.5 检测指标

1.5.1 前列腺湿重及前列腺指数 于末次给药后2 h(禁食不禁水12 h)，大鼠分别称重，迅速取前列腺称其前列腺湿重，计算前列腺指数(前列腺指数=前列腺湿重g/鼠体重g)。

1.5.2 检测T、E2、EGF水平 将前列腺分成两部分，称前列腺左侧叶300 mg，加入1 mL冰生理盐水，4℃匀浆，以3000 rpm离心15 min，取前列腺组织匀浆上清液测定前列腺组织中E2、T、EGF水平。

1.5.3 测定前列腺的腺体密度及组织形态学观察 取右侧前列腺组织固定于10%福尔马林溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组前列腺组织形态变化。测定前列腺的腺体密度：采用通用立体计量学测定方法，应用测试格点分析法，计算腺体上的交叉点数与参照系中的交叉点数的百分比，为前列腺的腺体密度，每个脏器测定3次。

2 结果

2.1 对前列腺增生模型大鼠前列腺重、前列腺指数及腺体密度的影响 与空白组比，模型组大鼠前列腺湿重、前列腺指数及腺体密度都显著增加(P<0.01)，说明模型组大鼠前列腺明显增生，模型复制成功。与模型组比，高、中剂量前列通窍胶囊组和癃闭舒组均可显著降低前列腺增生模型大鼠前列腺湿重、前列腺指数及前列腺腺体的体密度(P<0.01)，前列通窍胶囊低剂量组可显著降低大鼠前列腺湿重(P<0.01)，可明显降低前列腺指数(P<0.05)。见表1。

表1 前列通窍胶囊对大鼠前列腺增生模型前列腺湿重、前列腺指数及腺体密度的影响

注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01。

2.2 对前列腺增生大鼠模型前列腺组织中T、E2及EGF的影响 与空白组比，模型组大鼠前列腺匀浆中T、EGF水平显著升高(P<0.01)。与模型组比，高、中、低剂量前列通窍胶囊组和癃闭舒组均可显著降低模型大鼠前列腺匀浆中T、EGF水平(P<0.01)，实验各组对前列腺组织匀浆中E2水平的影响不明显。见表2。

表2 前列通窍胶囊对大鼠前列腺增生模型前列腺匀浆中T、E2及EGF水平的影响

注：与空白组比较，**P<0.01；与模型组比较，△△P<0.01。

2.3 各组前列腺组织形态的观察 空白组镜下见腺体排列紧密，腺体间可见明显的间质，腺腔无扩张，腺上皮单层柱状；模型组镜下见腺体明显增生，腺腔呈囊状扩张，大小不一，多数腺上皮乳头状增生明显突向腔内，间质水肿、瘀血；癃闭舒组镜下见前列腺腺体增生程度较模型组有一定改善；前列通窍胶囊高剂量组镜下见前列腺腺体有一定增生，少数腺腔呈囊状扩张，局部腺上皮呈乳头状向腔内突出，较模型组有很大改善；前列通窍胶囊中、低剂量组镜下见前列腺腺体增生，较模型组有一定改善。

3 讨论

前列腺增生症是老年男性的常见病，属于中医“癃闭”范畴，肾虚瘀阻是其主要病机[1-2]，辨证重在“瘀”，治疗突出“通”，临床多从“补肾活血”立法。前列通窍胶囊为云南省中医医院的院内制剂，组方中以黄芪、水蛭为君药，老年气虚当补气，以黄芪为首选，该药性甘温，入肺、脾二经，为补气之要药，《本草逢源》谓黄芪尚能“补肾中之气不足”，由于肾阳是以肾中精气为其物质基础，肾阳虚实质上是肾中精气不足的表现形式，故以黄芪为君药颇切合本病肾阳虚弱的病机。水蛭为通经消癥、破血祛瘀的要药，可软化增生之前列腺，还有较好的解痉作用，可解除前列腺肿大压迫尿道括约肌之痉挛。菟丝子、肉桂为臣药，菟丝子味甘性温，既能补肾阳肾阴，又有固精缩尿之效；肉桂温肾助阳，振奋阳气，少量可助膀胱气化，在补气益血方适加肉桂，能鼓舞气血生长。乌药、益智仁为佐药，乌药辛温香窜，入肺胃脾肝肾膀胱经，辛开温通，上走于肺，中调脾胃，下达肝肾膀胱，有顺气开通之功，上走肺则宣肺气以通调，下达膀胱则温暖膀胱而司开合调气化，故而用于膀胱冷结，小便频数最宜；益智仁性温味辛，入脾胃经，有固精缩尿的功效，用于肾虚遗尿，小便频数，遗精白浊。牛膝为使药，牛膝性味甘苦酸，入肝肾经，既具有活血祛瘀，又具有补肝肾、通淋涩的作用，还可导诸药下行，直达病所。以上药物相辅相成，使得证治相合，诸药合用共奏益气补肾、祛瘀通窍之功效，从而达到良好的治疗效果。

该研究采用去势加皮下注射丙酸睾酮法造大鼠前列腺增生模型，是一种在外源性雄激素作用下使动物产生前列腺增生的造模方法，排除自身雄激素的影响，重复率较高。在前列腺增生的相关机制中，性激素平衡失调的内分泌学说受到公认。睾酮(T)是人体内主要的雄激素，在 5ɑ-还原酶作用下变为双氢睾酮(DHT)，前列腺内的DHT 浓度增加可导致腺体增生[3]。同时雄激素主要通过间质，上皮相互作用模式刺激前列腺上皮组织的增生，也可直接促进间质组织的增生[4]。EGF 是较早被分离鉴定一种生长因子，其含量的变化直接反应了前列腺组织上皮的生长情况。同时，对前列腺湿重以及其腺体密度的观察，可直观反应前列腺的增生情况。

该实验结果表明，前列通窍胶囊可降低前列腺增生模型大鼠的前列腺湿重及前列腺指数，降低睾酮及表皮生长因子水平，同时可一定程度抑制前列腺组织增生，此研究揭示了前列通窍胶囊治疗BPH的部分作用机制，研究结果为临床应用前列通窍胶囊治疗BPH提供了一定的理论依据。

[1]张春和，杨会志.中医古籍对癃闭证候学规律的认识与探讨[J].云南中医学院学报，2011，34(4)：55-57.

[2]张春和，李焱风，秦国政，等.540例良性前列腺增生症患者中医证候分布规律研究[J].中医杂志，2012，53(1)：45-47.

[3]刘绍龑，白明，纪晓宁，等.益母草总碱对大鼠前列腺增生模型的影响[J].中国实验方剂学杂志，2011，17(21)：177-180.

[4]曾瑾，赵军宁，邓治文，等.复方金钱草胶囊对丙酸睾酮致大鼠前列腺增生的作用[J].中药药理与临床，2012，28(2)：139-142.

Effect ofQianlieTongqiaoCapsuleon Benign Prostate Hyperplasia Rat Models

ZHANG Chun-he, LI Yan-feng, ZHAO Fan, CHEN Tian-bo, YANG Yi-jian, ZHANG Fu-gang

(1.YunnanProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Kunming650021,Yunnan;

2.TheFirstAffiliatedHospitalofYunnanUniversityofTraditionalChineseMedicine,Kunming650021,Yunnan)

Objective: To study the effect ofQianlieTongqiaoCapsuleon benign prostate hyperplasia rat models (BPH) and to explore its mechanism. Methods: 60 rats were randomly assigned to take 10 as a control group, and the remaining 50 rats were castrated, causing BPH models by subcutaneous injection of testosterone propionate. The conventional 50 successful modeled rats were randomly divided into a model group, aRongbishucapsule control group and low, medium and high dose groups ofQianlieTongqiaoCapsule, 10 mice per group. The non-drug group and the model group were given distilled water while the other groups were given intragastric administration with corresponding drugs. The rats were sacrificed after 30 days to take their prostate to weigh their wet weight and calculate their index, to measure their testosterone (T), estradiol (E2) and epidermal growth factor (EGF) level in prostate tissue as well as the density of prostate gland. The light microscope was used to observe their pathological changes. Results: Compared with the model group, each group with different doses ofQianlieTongqiaoCapsulecould reduce the prostate wet weight and prostate index of prostatic hyperplasia rat to some extent. The high dose group could significantly reduce the density of the rat prostate gland (P<0.01 ) and T, EGF levels (P<0.01), but no obvious effect on the E2. Conclusion:QianlieTongqiaoCapsulehas a certain influence on the prostate wet weight and prostate gland density and can significantly reduce prostate tissue T, EGF level. The study reveals some mechanism ofQianlieTongqiaoCapsulefor BPH treatment.

QianlieTongqiaoCapsule, prostate hyperplasia, animal model, hormone, epidermal growth factor

国家自然科学基金项目(No：81160443)；云南省应用基础研究计划项目(No：2011FB145)< class="content">作者简介：张春和(1968-)，男，四川，医学博士，硕士生导师，从事泌尿外科、男科专业。E-mail：zhangchunhe0426@126.com

张春和(1968-)，男，四川，医学博士，硕士生导师，从事泌尿外科、男科专业。E-mail：zhangchunhe0426@126.com

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1007-2349(2015)09-0058-03

2015-07-21)