马樱花醇提物药理作用研究及急性毒性试验*

赵春梅 ，刘发梅，周铭涛，杨和金，黄加文，苏 梅

(云南省药物研究所，云南白药集团创新研发中心，云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明650111)



马樱花醇提物药理作用研究及急性毒性试验*

赵春梅 ，刘发梅，周铭涛，杨和金，黄加文，苏 梅

(云南省药物研究所，云南白药集团创新研发中心，云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南 昆明650111)

目的 观察马樱花醇提物的药理作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭体法、小鼠二甲苯耳廓肿胀和小鼠剪尾法及玻片法止血实验，以及急性毒性试验。结果 马樱花醇提物能减少醋酸所致的小鼠扭体反应次数，降低二甲苯所致小鼠耳廓肿胀度，促进小鼠剪尾止血时间，促进小鼠凝血时间。小鼠LD50为20.23 g/kg·bw(相当于生药43.88 g/kg·bw)。结论 提示马樱花醇提物具有明显的镇痛、抗炎、止血作用，且具有一定毒性。

马樱花；镇痛；抗炎；止血

马樱花(RhododendrondelavayiFranch.)为马樱杜鹃的花，隶属杜鹃花科杜鹃花属。常绿灌木至乔木；树皮粗厚，呈灰棕色，叶长圆状披针形，背面密被灰白色至淡褐色海绵状薄绒毛。花簇生于枝顶，呈伞形花序式的总状花序，深玫瑰红色；花可入药。原产滇、黔、桂等省区，缅甸也有分布。

马樱花不仅是道美食，而且具有清热解毒、凉血止血的功效，具有和血、治月经不调、闭经、跌打损伤、风湿痛、吐血等药性作用。对马樱花的药理作用研究极少，因此，本文对马樱花的乙醇提取物进行了药理研究，探讨其在镇痛、抗炎、止血方面的药理作用，为将来开发应用马樱花提供实验依据，现将实验结果报道如下。

1 实验材料

1.1 药物 马樱花醇提取物，由云南省药物研究所提供，70%乙醇提取3次，减压回收，干燥。提取率为46.1%。使用时用纯水配制。药效试验给药剂量以急性毒性试验结果为依据确定。阿司匹林肠溶片，100mg/片，BayerScheringPharma生产，批号：BJ10778；云南白药，云南白药集团股份有限公司，批号：ZAA1323；冰醋酸，天津市天达净化材料精细化工厂，批号：020112；二甲苯，广东省化学试剂工程技术研究开发中心，批号：20090831。

1.2 动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g，由广东省医学实验动物中心提供。许可证号：SCXK(粤)2013-0002。小鼠分性别饲养于空调实验室内，室温(25±2)℃，相对湿度40～70%，喂颗粒标准饲料，自由饮水和摄食。

2 方法

2.1 镇痛试验 取小鼠48只，雌雄各半，随机分为4组，组别及剂量如表1，按照表1剂量ig给药，每日1次，连续8天。末次给药后45min，ip0.6%冰醋酸0.1mL/10g/只，立即记录15min内的扭体反应(小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张，臀部抬起反应为准)次数，并计算其抑制率。实验结果如下：

表1 马樱花醇提取物对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

注：与空白对照组比，*P<0.05，***P<0.001

马樱花醇提取物以5.0g/kg，10.0g/kg(相当于生药10.84g/kg，21.69g/kg)的剂量连续灌胃给药8天，2组均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，抑制率分别为：46.78%、46.07%，尤以10.0g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出镇痛作用。

2.2 抗炎试验 选用小鼠48只，按体重随机分为4组，每组雌雄各6只，分组及给药情况见表2。各组均预先每日灌胃给药1次，连续9天，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20mL/kg体重。末次给药后30min，各组小鼠于右耳两面均匀涂抹二甲苯0.05mL，左耳不涂为对照。致炎后1h脱颈椎处死动物，用直径6mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，取耳片称重，以两耳片重量之差作为肿胀度。实验结果见表2。

表2 马樱花醇提取物对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

注：与空白对照组比，**P<0.01，***P<0.001

马樱花醇提取物以5.0g/kg，10.0g/kg(相当于生药10.84g/kg，21.69g/kg)的剂量连续灌胃给药9天，2组均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，抑制率分别为：31.04%、37.96%，尤以5.0g/kg，10.0g/kg剂量组作用明显，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出抗炎作用。

2.3 止血试验(剪尾法) 取小鼠48只，体重(20±2)g，雌雄各半，随机分为4组，按照剂量ig给药，每日1次，连续4天。末次给药后45min，将小鼠四肢固定在操作台上用剪刀将小鼠尾尖剪断2mm，待血液溢出时，用秒表开始计时，每隔30s用滤纸吸去血滴直至血液不再溢出为止，计算止血时间，进行统计学检验。实验结果见表3。

表3 马樱花醇提物对剪尾法所致小鼠止血时间的影响

注：与空白对照组比，**P<0.01，***P<0.001

马樱花醇提物以2.50g/kg，5.00g/kg(相当于生药5.42g/kg，10.84g/kg)的剂量连续灌胃给药4天，2组均能不同程度促进小鼠剪尾止血时间，促进率分别为：13.93%、45.77%，尤以5.00g/kg作用显著，与空白对照组相比较具有显著性差异。显示出止血作用。

2.4 止血试验(玻片法) 选用18～22g小鼠48只，按体重随机分为4组，每组雌雄各6只，各组均预先每日灌胃给药1次，连续5天，对照组灌服等容量纯水，各组灌胃容积均为20mL/kg体重。末次给药45min后毛细管眼眶取血，滴于载波片，血滴直径约5mm，立即用秒表记时。每隔30s用清洁的7号注射针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止即为凝血时间。结果见表4。

表4 马樱花醇提物对玻片法所致小鼠凝血时间的影响

注：与空白对照组比，***P<0.001

马樱花醇提物以2.50g/kg，5.00g/kg(相当于生药5.42g/kg，10.84g/kg)的剂量连续灌胃给药5天，2组均能不同程度缩短小鼠摘眼球凝血时间，促进率分别为：56.41%、53.85%，尤以2.50g/kg，5.00g/kg作用显著，与空白对照组相比较具有显著性差异(P<0.001，P<0.001)。显示出止血作用。

2.5 小鼠急性毒性实验

2.5.1 正式实验 给予供试品前动物禁食不禁水约5h50min～6h30min。将合格的动物称重，按性别和体重分群，淘汰体重偏差较大的动物，再随机分为7组，即溶媒对照组和不同给药供试品组，每组10只，雌雄各5只。

根据预试验结果，将马樱花醇提物28.00g/kg·bw作为起始剂量，以 0.9的组距向下增加5个剂量组，即25.20g/kg·bw、22.68g/kg·bw、20.41g/kg·bw、18.38g/kg·bw、16.54g/kg·bw马樱花醇提物剂量组，另设溶媒对照组，溶媒对照组同法给予纯水。

2.5.2 试验结果与分析

2.5.2.1 毒性反应 小鼠灌胃给予供试品马樱花醇提物后，在4h内出现毒性反应，在4h内出现毒性反应，主要表现为惊厥、抽搐、运动失调。至给药第3天恢复。死亡动物解剖观察，多数动物出现肺充血现象。给药组动物的毒性反应见表5。

表5 马樱花醇提物小鼠灌胃给药急性毒性试验急性毒性症状及动物死亡情况

5.2 死亡情况 给药当天连续观察4h动物死亡情况，以后每天观察1次，连续14d，28.00g/kg·bw剂量组给药当日出现动物死亡，给药当日死亡6只动物，给药第2天死亡4只动物，共死亡10只动物；25.20g/kg·bw剂量组给药当天死亡5只动物，第2天死亡3只动物，共死亡8只动物；22.68g/kg·bw马樱花醇提物剂量组给药当天死亡3只动物，第2天死亡4只动物，共死亡7只动物；20.41g/kg·bw剂量组给药当天死亡1只动物，第2天死亡4只动物，共死亡5只动物；18.38g/kg·bw剂量组给药第2天死亡3只动物，共死亡3只动物；16.54g/kg·bw剂量组给药当天未出现动物死亡，第2天死亡2只动物，共死亡2只动物；动物死亡时间及死亡数显示出随剂量的降低而减慢和减少，显示出剂量-反应关系。

5.3 体重 试验期间，于给药第3、7、14d对各剂量组存活动物称重，存活小鼠体重均持续增长。

5.4 解剖观察 观察14天结束后脱颈椎处死的动物进行大体解剖观察，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔，各组织和器官的体积、颜色、质地等，马樱花醇提物各剂量组、溶媒对照组各小鼠器官均无肉眼所见异常。

2.5.3 评价与结论 在本实验条件下，对马樱花醇提物不同剂量进行24h内小鼠单次灌胃给药急性毒性试验，可见动物于4h内出现毒性反应，在4h内出现毒性反应，主要表现为惊厥、抽搐、运动失调。至给药第3天恢复。死亡动物解剖观察，多数动物出现肺充血现象。中毒症状和动物死亡数显示出剂量-反应关系。试验结束对存活动物进行大体解剖观察，各组动物脏器、器官的体积、颜色、质地等均未见明显异常。马樱花醇提物24h内小鼠灌胃给药LD50为20.23g/kg·bw(相当于生药43.88g/kg·bw)，95%可信限为25.18～37.80g/kg·bw(相当于生药54.62～82.00g/kg·bw)。提示毒性作用可能涉及中枢神经、神经肌肉及自主神经。

3 讨论与小结

马樱花是云南民间常用药。具有清热解毒、凉血止血的功效，马樱花药理作用的活性成分及其作用机制研究较少。为了探讨和开发马樱花的药用价值，本文对其进行了镇痛、抗炎、止血药理作用的实验研究。结果表明，急性毒性实验显示，马樱花醇提物24h内小鼠灌胃给药LD50为20.23g/kg·bw(相当于生药43.88g/kg·bw)，表明其具有一定毒性。马樱花能抑制醋酸所致小鼠扭体性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀，可显著缩短小鼠止血、凝血时间，说明马樱花具有镇痛作用、抗炎作用、止血作用。本实验结果为马樱花将来产品研发和临床应用提供了科学依据。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会，中华本草[M].第十六卷，上海：上海科学技术出版社，1999：27.

30种云南常用有毒民族药材的安全性、药效学及生药学研究(NO：2012CG003)。< class="content">作者简介：赵春梅(1973-)，女，云南昆明市人，副高级工程师，从事药理研究。

赵春梅(1973-)，女，云南昆明市人，副高级工程师，从事药理研究。

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1007-2349(2015)09-0052-03

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