不同复方中药提取液止泻效果的研究

2015-04-18张邑帆朱买勋翟少钦陈春林张素辉曹国文

中国兽医杂志 2015年12期

关键词：番泻叶沙门白痢

张邑帆，朱买勋，郑华，翟少钦，陈春林，张素辉，曹国文

（重庆市畜牧科学院，重庆荣昌402460）

不同复方中药提取液止泻效果的研究

张邑帆，朱买勋，郑华，翟少钦，陈春林，张素辉，曹国文

（重庆市畜牧科学院，重庆荣昌402460）

为筛选一种高效、安全、经济的针对畜禽腹泻病的复方中药，依据中兽医辨证拟定5个止痢复方，通过测定对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌的抑菌作用，筛选效果较好的复方中药，再设高、中、低剂量组，采用灌服番泻叶的方式导致小鼠腹泻，以杨树花口服液作为阳性对照，观察复方对腹泻小鼠的止泻作用；检测碳末在小肠内推进率反应药物对小肠蠕动的影响，小鼠耳廓肿胀度反应药物抑制肿胀效果。结果显示，方5的抑菌效果优于其他4个复方，且效果与药液浓度成正比。止泻4 h内阳性对照、高、中剂量组小鼠腹泻率分别为40%、40%、60%，与空白组（腹泻率为100%）相比较差异均为极显著（P＜0.01）；高、中剂量组碳末在肠道内的推进距离缩短，与空白组相比较差异极显著（P＜0.01）；中剂量组小鼠耳廓肿胀率降低，与空白组相比较差异显著（P＜0.05）。表明方5能较好地抑制鸡白痢沙门菌和大肠杆菌，改善动物小肠蠕动，增强抗炎效果。

止泻；肠推进；抗炎

畜禽腹泻病是严重威胁现代畜禽养殖业的主要疾病之一，畜禽发生腹泻性疾病，不仅影响其生长发育，还容易引起死亡，严重阻碍我国畜禽业的发展。目前针对畜禽腹泻病主要是使用抗生素进行防治，但长期使用或者不合理用药物不仅导致了耐药菌株的出现，还致使畜产品的药物残留，危害人类健康。中药活性物不仅具有抗菌、增强机体免疫机能、提高动物抗应激和抗炎能力，还富含营养物质，能改善动物生产性能，且毒副作用小、不易产生耐药性，利用中药防治畜禽疾病已成为近年来研究的热点［1-3］。本试验依据中兽医辨证理论自拟5个复方中药，通过对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌得抑菌作用筛选效果较好的复方，并以小鼠为试验动物，研究该复方对番泻叶所致小鼠腹泻的止泻效果及其对小鼠肠道蠕动和抗炎效果，为抗腹泻中药的研究和临床应用提供参考。

1 材料

1.1 试验动物清洁级昆明系小鼠150只，体重

26±2 g，雌雄各半，购自重庆实岽生物技术有限公司。实验动物许可证号：SCXK-（军）2012-0003，编号：0020969。

1.2 试验中药止痢复方1：由黄连、秦皮、石榴皮等组成，简称方1；止痢复方2：由黄连、乌梅、苍术等组成，简称方2；止痢复方3：由黄连、乌梅、辣蓼等组成，简称方3；止痢复方4：由黄连、木香、秦皮等组成，简称方4；止痢复方5：由黄连、三颗针、乌梅等组成，简称方5。各复方药液浓度均为1 m L含生药1 g，由重庆市畜牧科学院兽医研究所中兽药研发课题组提供。对照药物为杨树花口服液，重庆永健生物技术有限责任公司，批号：20140101。番泻叶煎剂：将番泻叶剪碎，浸泡30 min，煎煮5 min，浓缩至1 mL含生药1 g，灭菌，4℃保存，备用。

1.3 菌株鸡白痢沙门菌（Salmonella pullorum），购自中国兽医微生物菌种保藏中心，菌株编号CVCC534；大肠杆菌（Escherichia coli），购自中国兽医微生物菌种保藏中心，菌株编号CVCC83907。

2 试验方法

2.1 复方中药最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的测定参照文献［4］，对5个复方中药进行MIC及MBC的测定以评价其体外抗大肠杆菌和沙门菌的作用效果，每个试验重复3次。

2.2 复方中药对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌体外抑菌试验试验采用牛津杯法，取0.1mL浓度为106～107CFU/mL菌液均匀涂布于固体培养基上。每个平板中放置3个牛津杯，分别取高、中、低3个剂量组的药液200μL，每个复方对每种菌重复试验3次。分别在培养12 h和24 h时测量抑菌圈，判断药物敏感性。判定标准：≥20 mm为极敏；15～19mm为高敏；10～14mm为中敏；10 mm以下为低敏［4］。

2.3 复方中药对番泻叶所致小鼠腹泻的止泻作用根据抑菌试验选择止泻效果最佳的复方，设高、中、低剂量组，每组小鼠分别按照10 g/kg、5 g/kg、2.5 g/kg体重的剂量进行灌胃，1次/d，连续3 d，灌杨树花口服液作为阳性对照，灌生理盐水作为空白对照。末次给药30min后按0.4mL/只的剂量灌胃番泻叶，各鼠单独放于铺有滤纸的鼠笼内，每隔1 h更换1次，共观察6 h，记录小鼠的总便数和湿粪数，统计2 h、4 h、6 h内的腹泻率和稀便率，重复试验2次。腹泻率=腹泻的动物数/该组动物总数×100%；稀便率=每只动物所排的湿粪数/总便数。

2.4 复方中药对番泻叶所致的小鼠小肠推进试验选取小鼠50只，同2.3试验进行分组和灌药。末次给药30 min后分别按0.5 m L/只灌胃碳末阿拉伯胶混悬液，30 min后脱颈处死小鼠，解检，剪取上自幽门、下至回盲部的肠管，不加牵引地平铺于平台上，观察记录各组推进情况，每个试验重复2次。

2.5 复方中药对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验

选取小鼠50只，同2.3试验进行分组和灌药。末次给药30 min后各组小鼠右耳双面涂二甲苯0.1mL/只，1h后脱颈处死，剪取小鼠左、右耳片，称重，计算小鼠耳廓肿胀率及抑肿胀率。肿胀率=（右耳片重量-左耳片重量）/左耳片重量× 100%；抑制率=（空白组耳片肿胀度-给药组耳片重量肿胀度）/空白组耳片肿胀度×100%。

2.6 试验数据处理采用SPSS18.0软件LSD法进行方差分析，以0.05或0.01作为显著性差异标志。

3 结果

3.1 复方中药对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌的MIC、MBC测定从表1可知，方5的抑菌、杀菌作用效果较好，对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌的MIC和MBC值均为31.25mg/L。

表1 复方中药对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌的MIC、MBC测定（单位：mg/L）

3.2 复方中药对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌体外抑菌效果从表2可知，抑菌12 h后，5个复方中药高剂量组药物对大肠杆菌和鸡白痢沙门菌极敏；中剂量时，方1对大肠杆菌失去了抑菌效果，只有方3、方5对其仍处于极敏，与其他组相比较差异极显著（P＜0.01）；抑菌24 h后，只有方5的高、中、低剂量组能同时对大肠杆菌和鸡白痢沙门菌有抑菌效果，因此方5为抑菌效果较好的复方中药。

3.3 方5对番泻叶所致的小鼠腹泻的作用从表3可知，在2 h内，阳性对照、高剂量组腹泻率降为0，中剂量组降为20%，随着时间的延长，腹泻率逐渐升高；稀便率也随时间延长逐渐升高，阳性对照、高、中剂量组的稀便率与其对应时间段空白组的稀便率相比较差异极显著（P＜0.01），而低剂量组与空白组相比较差异不显著（P＞0.05）。

表2 不同复方中药对鸡白痢沙门菌和大肠杆菌体外抑菌效果（单位：mm）

表3 方5对番泻叶致泻小鼠腹泻的影响（n=10）

3.4 方5对番泻叶所致的小鼠小肠推进试验从表4可知，阳性对照、方5高、中剂量组能显著减慢小肠推进速度，缩短碳末在肠道内的推进距离，与空白组比较，差异极显著（P＜0.01）。

表4 方5对小鼠小肠推进的影响（n=10）

3.5 方5对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀试验从表5可知，高、低剂量抑制耳廓肿胀效果不明显，阳性对照、中剂量组能显著抑制耳廓肿胀，与空白组比较，差异显著（P＜0.05）。

组别剂量（g/kg）肿胀率/%抑肿率/%

表5 方5对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响（n=10）

4 讨论

试验采用番泻叶复制小鼠腹泻模型，其致泻作用主要是其有效成分蒽醌类能刺激小鼠肠合成并释放前列腺素（PG），促进结肠的水和电解质净分泌，刺激主动Cl-分泌，加速大肠内容物输送及泻下作用［5］。试验小鼠灌服番泻叶后，出现严重的腹泻现象，证明了番泻叶致小鼠腹泻模型建立成功。

依据现代药理研究，中药黄连和三颗针富含小檗碱、黄连素，乌梅有多种挥发性物质、有机酸和黄酮类物质，在体外对沙门菌、大肠杆菌、绿脓假单胞菌、金黄色葡萄球菌以及临床分离的多种肠球菌有抑杀作用；乌梅、秦皮、石榴皮具有涩肠止痢的功效；苍术、木香能调节小肠运动，降低小肠紧张性和节律性收缩，还有抗炎、镇痛的作用［6-7］。试验按照中兽医辨证拟定的5个复方中药，都有抑菌和调节胃肠运动的功效，结果显示方5效果较好，分析其原因可能是方5中黄连和三颗针含有小檗碱和黄连素，能加大对细菌的抑杀作用，同时辅以乌梅，其富含多种营养物质，滋养动物机体，提高免疫功能，增强止痢效果。

动物机体在长期的泻痢之后，胃肠道将会并发炎症，在治疗动物腹泻的同时需要改善胃肠道功能，降低胃肠蠕动能力，进行消炎处理。炎症是机体组织对各种致炎因子引起损伤所发生的防御反应，炎症过程中血管内皮细胞自身的损伤引起组织液和部分血液外渗等而致泻，发生的越严重，腹泻也越严重，说明止泻与抗炎是密不可分的，要得到较好的止泻效果必须进行抗炎［8-9］。试验中方5组中的小鼠在灌服中药后能显著抑制小鼠耳廓肿胀，说明该药有一定的抗炎作用；且小肠内碳末推进距离缩短，能有效地减慢小肠的蠕动能力，证实该药有较好的止泻效果。