线粒体SNP分型用于法医DNA检验1例

阙庭志，朱如心，赵珍敏（司法部司法鉴定科学技术研究所 上海市法医学重点实验室，上海 200063）

线粒体SNP分型用于法医DNA检验1例

阙庭志，朱如心，赵珍敏
（司法部司法鉴定科学技术研究所 上海市法医学重点实验室，上海 200063）

关键词：法医遗传学；线粒体；单核苷酸多态性

1　案例

1.1简要案情

某地发生一起命案，为了核实死者身份，需要对一块高度降解的人体骨头和疑似死者母亲的血样进行DNA检验，判断他们是否存在血缘关系。

1.2鉴定过程

接受委托后，本鉴定中心采用Chelex-100法提取血样基因组DNA，采用硅珠法提取骨头基因组DNA，采用GoldeneyeTMDNA身份鉴定系统20A试剂盒［基点认知技术（北京）有限公司］对常染色体上19个STR基因座进行复合PCR扩增，人体骨头未获得STR分型结果，考虑到核DNA降解严重，采用检测线粒体SNP的策略来评估被检骨头和疑似母亲的线粒体SNP分型结果是否符合母系遗传规律。采用Expressmarker mtDNA-SNP 60荧光检测试剂盒（无锡中德美联生物技术有限公司）检测线粒体60个SNP位点，以上扩增在9700型PCR扩增仪（美国AB公司）上完成，扩增体系和条件均严格按照使用说明书操作，扩增产物在3130XL型遗传分析仪（美国AB公司）上进行毛细管电泳，用GeneMapper ID v3.2软件进行基因分型。

结果表明，被检骨头和疑似母亲的60个SNP位点基因分型一致，不排除二者具有血缘关系。

2　讨论

一般情况下进行亲缘关系鉴定，特别是亲子鉴定，首选常染色体上的核DNA进行STR分型，因为该检验可提供最大限度的遗传信息。但是当检材已经发生了严重降解时，依托核DNA的常染色体STR和SNP分析就显得收效甚微，这个时候从多拷贝的线粒体入手往往可以获得有效的遗传信息。mtDNA是人体细胞内唯一的核外基因组，约含有16569个碱基对，为一条双链闭合环状的DNA分子。由于其具有母系遗传、高突变率、高拷贝数、几乎不发生重组等特点，在微量、降解、腐败检材以及母系亲缘关系认定等方面具有重要应用价值［1-2］。

本案例中的人体骨头已经发生高度降解，常染色体上的遗传标记已经不能发挥作用，考虑到对照样本为骨头身源者疑似母亲，因此进行mtDNA的检验就显得十分必要。但是由于降解严重，传统的线粒体测序方法是对控制区中的HVⅠ以及HVⅡ区进行直接测序，然而步骤繁琐费时，对DNA模板要求较高，有时需重复测序，且区段有限，影响个人识别率，此外也需要较大的扩增片段，成功率难以保证。本案例采用了市场上新推出的Expressmarker mtDNA-SNP 60荧光检测试剂盒，该试剂盒是根据mtDNA进化树，结合中国人群遗传特点，精选出60个多态性高、回复突变率低、分型能力强的SNP位点，采用特异性引物对这些位点进行检测，扩增片段很小，适合降解检材的分型。检验结果表明，被检骨头和疑似母亲在60个SNP位点的基因分型一致，从而为本案的解决提供了重要的遗传信息和技术支持。

参考文献：

［1］Budowle B，Wilson MR，DiZinno JA，et al.Mitochondrial DNA regions HVⅠand HVⅡ population data［J］. Forensic Sci Int，1999，103（1）：23-35.

［2］Parson W，Bandelt HJ.Extended guidelines for mtDNA typing of population data in forensic science［J］.Forensic Sci Int Genet，2007，1（1）：13-19.

（本文编辑：李成涛）

中图分类号：DF795.2

文献标志码：B

doi：10.3969/j.issn.1004-5619.2015.05.029

文章编号：1004-5619（2015）05-0414-01

收稿日期：（2015-07-31）

基金项目：国家自然科学基金资助项目（81302620）；国家“十二五”科技支撑计划项目（2012BAK16B01）

作者简介：阙庭志（1963—），男，上海人，副主任法医师，主要从事法医物证学研究；E-mail：quetz@ssfjd.cn