锡叶藤的化学成分

周兴栋， 余绍福， 程 淼， 邹惠亮， 刘百联， 张 英， 周光雄

(暨南大学药学院中药及天然药物研究所，广东广州510632)

锡叶藤 Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland 为五桠果科(Dilleniaceae)锡叶藤属植物，属常绿木质藤本，在我国主要分布于广东、广西、海南、云南等热带及亚热带地区，生长在低海拔山地的疏林和灌木丛中［1］.其主要以根、叶为药用部位［2］，是广西壮族民间常用的药材［3］.锡叶藤有收敛止泻、固精、消肿止痛等功能，用于腹泻、便血、痢疾、肝脾肿大、子宫脱垂、白带、遗精、风湿性关节炎［4］.锡叶藤的乙醇提取物有较强抗心血管疾病和抗病毒活性［5］.目前有关锡叶藤的研究非常少，主要集中在植物形态和生药材鉴定方面.为了深入探索锡叶藤的化学成分，促进锡叶藤的药用开发，我们在前期研究报道了其中柠檬素等11个黄酮或多酚类等11个化合物［6］的基础上，继续对其体积分数为95%乙醇提取物进行了成分的分离纯化和鉴定研究，得到了原花色素A2、香草酸等一系列酚酸、三萜和甾体类化合物.

1 仪器与材料

Avance III 300 MHz核磁共振仪(德国Bruker公司);LCQ Advantage MAX质谱仪(美国Finnign公司);Agilent 1200型高效液相分析色谱仪(美国Agilent公司);Agilent 1200型高效液相半制备色谱仪(美国Agilent公司);Welch Material XB-C18分析色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);Welch Material XBC18半制备色谱柱(10 mm ×250 mm，5 μm);EYELA(N-1000)旋转蒸发仪(日本东京理化器械株式会社);凝胶Sephadex LH-20(美国Pharmacia公司);薄层色谱硅胶预涂板(HSAF 254，200 mm×200 mm，烟台市化学工业研究所);ODS(50 μm，日本YMC公司);柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂);色谱纯甲醇溶剂(山东禹王有限公司);分析纯溶剂(天津大茂化学试剂公司);氘代试剂(美国CIL公司).

实验所用药材锡叶藤(地上部分)于2013年6月采自广东省从化流溪河区域，经暨南大学药学院生药学教研室周光雄教授鉴定为五桠果科锡叶藤属锡叶藤［Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland］，该植物标本(No.2013XYT004)保存于暨南大学药学院生药学教研室中药标本室.

2 提取与分离

将干燥的锡叶藤55 kg粉碎，用体积分数为95%乙醇加热(85℃)回流提取3次.提取液减压浓缩后得到的浸膏加水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚萃取物110 g，乙酸乙酯萃取物460 g，正丁醇萃取液旋蒸至近干，加体积分数为95%乙醇保存.

取乙酸乙酯层430 g进行硅胶柱层析，经氯仿－甲醇(v氯仿∶v甲醇=100∶0→0∶100)梯度洗脱，得到20个组分(组分A～T).各组分再通过硅胶柱层析、凝胶柱层析、HPLC制备及重结晶等分离方法，共分离得到13个化合物.其中，组分A、E、F的分离方法相同，先进行硅胶柱层析，石油醚－乙酸乙酯梯度洗脱，再经反复凝胶柱层析得到化合物.从组分A(1 g)中分离得到化合物11(6 mg);从组分E(3 g)中分离得到化合物2(50 mg)、3(5 mg)和12(11 mg);从组分F(10 g)中得到化合物4(7 mg)和9(21 mg).组分I(7 g)先进行硅胶柱层析，氯仿－丙酮梯度洗脱，再经凝胶柱层析、HPLC制备(分离条件:210 nm，流速6 mL/min，体积分数为35%色谱甲醇－水等度洗脱)，得到化合物5(11 mg)和10(8 mg).组分K(10 g)先进行硅胶柱层析，氯仿－丙酮梯度洗脱，重结晶得到化合物13(58 mg)，母液经HPLC制备(分离条件:210 nm，流速6 mL/min，体积分数为20%色谱甲醇－水等度洗脱)得到化合物7(13 mg)和8(12 mg).组分N(7 g)先进行硅胶柱层析，氯仿－甲醇梯度洗脱，再经凝胶柱层析，得到化合物6(44 mg).组分O(10 g)先进行ODS层析，再经凝胶层析，分离得到化合物1(23 mg).

3 结构鉴定

化合物1白色针晶(甲醇)，ESI-MS m/z 599［M+Na］+.结合核磁数据，确定其分子量为576.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.16(1H，d，J=2.0 Hz，H-12')，7.14(1H，d，J=2.1 Hz，H-12)，7.03(1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-16')，6.98(1H，dd，J=8.0，2.1 Hz，H-16)，6.83(1H，d，J=1.5 Hz，H-15')，6.80(1H，d，J=1.7 Hz，H-15)，6.10(1H，s，H-6')，6.07(1H，d，J=2.3 Hz，H-8)，6.01(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，4.41(1H，d，J=3.4 Hz，H-4)，4.27～4.21(1H，m，H-3')，4.06(1H，d，J=3.4 Hz，H-3)，2.95(1H，dd，J=17.2，4.9 Hz，Ha-4')，2.76(1H，dd，J=17.2，2.4 Hz，Hb-4');13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:100.3(C-2)，68.2(C-3)，29.4(C-4)，104.4(C-5)，157.2(C-6)，98.4(C-7)，158.3(C-8)，96.8(C-9)，154.4(C-10)，132.6(C-11)，115.8(C-12)，146.4(C-13)，145.8(C-14)，116.2(C-15)，120.5(C-16)，81.9(C-2')，67.1(C-3')，30.1(C-4')，102.6(C-5')，156.8(C-6')，96.6(C-7')，152.5(C-8')，107.4(C-9')，152.3(C-10')，131.4(C-11')，115.8(C-12')，146.9(C-13')，146.1(C-14')，116.1(C-15')，119.9(C-16').以上数据与文献［7］报道一致，故鉴定化合物1为原花色素A2.

化合物2白色针晶(甲醇)，ESI-MS m/z 167［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为168.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.57(1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-2)，7.54(1H，s，H-6)，6.84(1H，d，J=8.7 Hz，H-5)，3.87(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:123.1(C-1)，113.7(C-2)，152.7(C-3)，148.7(C-4)，115.9(C-5)，125.4(C-6)，170.3(C-7)，56.4(3-OCH3).以上数据与文献［8］报道一致，故鉴定化合物2为香草酸.

化合物3白色针晶(甲醇)，ESI-MS m/z 197［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为198.1HNMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.32(2H，s，H-2，6)，3.88(6H，s，3，5-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:121.9(C-1)，108.2(C-2，6)，148.8(C-3，5)，141.5(C-4)，170.4(C-7)，56.9(3，5-OCH3).以上数据与文献［9］报道一致，故鉴定化合物3为丁草酸.

化合物4白色粉末，ESI-MS m/z 193［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为 194.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.59(1H，d，J=15.9 Hz，H-7)，7.18(1H，d，J=1.9 Hz，H-2)，7.06(1H，dd，J=8.2，1.9 Hz，H-6)，6.81(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，6.31(1H，d，J=15.9 Hz，H-8)，3.89(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:128.0(C-1)，111.8(C-2)，149.5(C-3)，150.6(C-4)，116.6(C-5)，124.1(C-6)，147.1(C-7)，116.1(C-8)，171.2(C-9)，56.6(3-OCH3).以上数据与文献［10］报道一致，故鉴定化合物4为阿魏酸.

化合物5白色粉末，ESI-MS m/z 163［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为 164.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.58(1H，d，J=15.8 Hz，H-7)，7.44(2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6)，6.80(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，6.29(1H，d，J=15.8 Hz，H-8);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:171.2(C-9)，161.3(C-4)，146.8(C-7)，131.2(C-2，6)，127.4(C-1)，117.0(C-3，5)，115.8(C-8).以上数据与文献［11］报道一致，故鉴定化合物5为对香豆酸.

化合物6白色粉末，ESI-MS m/z 169［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为 170.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.06(2H，s);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.2(C-1)，110.4(C-2，6)，146.5(C-3，5)，139.7(C-4)，170.7(C-7).以上数据与文献［12］报道一致，故鉴定化合物6为没食子酸.

化合物7白色粉末，ESI-MS m/z 183［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为184.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.04(1H，s，H-2)，7.04(1H，s，H-6)，3.81(3H，s，7-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:121.6(C-1)，110.2(C-2)，146.7(C-3)，139.9(C-4)，146.7(C-5)，110.2(C-6)，169.2(C-7)，52.4(7-OCH3).以上数据与文献［13］报道一致，故鉴定化合物7为没食子酸甲酯.

化合物8白色粉末，ESI-MS m/z 183［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为 184.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.18(1H，s，H-2)，7.20(1H，s，H-6)，3.85(3H，s，3-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.0(C-1)，112.3(C-2)，146.2(C-3)，140.5(C-4)，149.1(C-5)，106.3(C-6)，170.4(C-7)，56.7(3-OCH3).以上数据与文献［14］报道一致，故鉴定化合物8为3-甲氧基没食子酸甲酯.

化合物9白色针状结晶(甲醇)，ESI-MS m/z 167［M-H］－.结合核磁数据，确定其分子量为168.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:7.42(1H，s，H-2)，6.80(1H，d，J=7.6 Hz，H-5)，7.40(1H，dd，J=7.6，2.1 Hz，H-6)，3.82(3H，s，7-OCH3);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:122.7(C-1)，117.5(C-2)，146.3(C-3)，151.8(C-4)，116.0(C-5)，123.8(C-6)，169.0(C-7)，52.4(7-OCH3).以上数据与文献［15］报道一致，故鉴定化合物9为原儿茶酸甲酯.

化合物 10白色粉末，ESI-MS m/z 167［MH］－.结合核磁数据，确定其分子量为168.1H-NMR(CD3OD，300 MHz)δ:5.80(2H，s，H-3，5)，2.59(3H，s，H-8);13C-NMR(CD3OD，75 MHz)δ:105.7(C-1)，166.0(C-2)，95.7(C-3)，166.4(C-4)，95.7(C-5)，166.0(C-6)，204.8(C-7)，32.9(C-8).以上数据与文献［16］报道一致，故鉴定化合物10为根皮苯乙酮.

化合物 11白色粉末，ESI-MS m/z 409［MOH］+.结合核磁数据，确定其分子量为 416.1HNMR(CDCl3，300 MHz)主要特征信号1H-NMR(CDCl3，300 MHz)主要特征信号 δ:3.16(1H，dd，J=10.9，5.3 Hz，H-3)，2.35(1H，td，J=11.0，5.6 Hz，H-19)，0.73(3H，s，H-23)，0.76(3H，s，H-24)，0.80(3H，s，H-25)，0.92(3H，s，H-26)，0.94(3H，s，H-27)，1.00(3H，s，H-28)，4.66(1H，s，Ha-29)，4.54(1H，s，Hb-29)，1.65(3H，s，H-30);13C-NMR(CDCl3，75 MHz)δ:38.9(C-1)，27.6(C-2)，79.2(C-3)，39.1(C-4)，55.5(C-5)，18.5(C-6)，34.5(C-7)，41.0(C-8)，50.6(C-9)，37.4(C-10)，21.1(C-11)，25.3(C-12)，38.2(C-13)，43.0(C-14)，27.6(C-15)，35.8(C-16)，43.2(C-17)，48.2(C-18)，48.5(C-19)，151.2(C-20)，30.0(C-21)，40.2(C-22)，28.2(C-23)，15.6(C-24)，16.3(C-25)，16.2(C-26)，14.8(C-27)，18.2(C-28)，109.5(C-29)，19.5(C-30).以上数据与文献［17］报道一致，故鉴定化合物11为羽扇豆醇.

化合物 12白色粉末，ESI-MS m/z 455［MH］－.结合核磁数据，确定其分子量为456.1H-NMR(C5D5N，300 MHz)主要特征信号δ:4.96(1H，d，J=2.1 Hz，Ha-29)，4.79(1H，s，Hb-29)，3.56(1H，td，J=11.2，4.3 Hz，H-19)，3.47(1H，t，J=7.8 Hz，H-3)，2.76(1H，td，J=11.9，3.2 Hz，H-13)，2.65(1H，dt，J=12.5，3.3 Hz，Ha-16)，1.94(1H，s，Ha-12)，1.90(1H，s，Ha-1)，1.88～1.82(2H，m，H-2)，1.81(3H，s，H-30)，1.76(1H，d，J=11.4 Hz，H-18)，1.67(1H，dt，J=12.6，2.8 Hz，Hb-1)，1.24(3H，s，H-23)，1.08(3H，s，H-27)，1.07(3H，s，H-26)，1.03(3H，s，H-24)，0.83(3H，s，H-25);13C-NMR(C5D5N，75 MHz)δ:179.2(C-28)，151.7(C-20)，110.3(C-29)，78.5(C-3)，57.0(C-17)，56.2(C-5)，51.3(C-9)，50.1(C-18)，48.1(C-19)，43.2(C-14)，41.4(C-8)，39.9(C-4)，39.6(C-1)，38.9(C-13)，37.9(C-22)，37.8(C-10)，35.1(C-7)，33.2(C-16)，31.5(C-15)，30.6(C-21)，29.0(C-23)，28.7(C-2)，26.4(C-12)，21.5(C-11)，19.8(C-30)，19.1(C-6)，16.8(C-24)，16.8(C-25)，16.7(C-26)，15.2(C-27).以上数据与文献［18］报道一致，故鉴定化合物12为桦木酸.

化合物13白色粉末，经薄层层析后喷香草醛－浓硫酸反应，加热时显紫红色.正离子ESI-MS给出m/z 599.6［M+Na］+峰和1175.7［2M+Na］+峰，提示化合物分子量为576.与β-胡萝卜苷标准品的薄层色谱比较，在多种溶剂系统中，其Rf值和显色均与标准品一致.故鉴定该化合物为β-胡萝卜苷.

4 结果与讨论

锡叶藤乙醇提取物的乙酸乙酯部位经过硅胶、ODS、sephadex LH-20等柱层析色谱技术，从中分离得到13个化合物.其中，黄酮类1个:原花色素A2(1);8个酚酸及其酯类:香草酸(2)、丁香酸(3)、阿魏酸(4)、对香豆酸(5)、没食子酸(6)、没食子酸甲酯(7)、3-甲氧基没食子酸(8)、原儿茶酸甲酯(9);2个三萜类:羽扇豆醇(11)、桦木酸(12);1个甾体类:β-胡萝卜苷(13);1个其他类:根皮苯乙酮(10).除桦木酸(12)和β-胡萝卜苷(13)外，其他均为首次从该种植物中分离得到.

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