中药白土苓中苏铁素的含量测定*

刘国华，杨爱岗，梅丽娟，海丽娜，秦文杰，张卫东，李明花

(1. 山西中医学院研究生部，山西 太原030024； 2. 第二军医大学药学院，上海 200433；3.北京振东光明药物研究院，北京 100120； 4.山西振东制药股份有限公司，山西 长治047100)

·药学研究·

中药白土苓中苏铁素的含量测定*

刘国华1，杨爱岗2，梅丽娟2，海丽娜3，秦文杰3，张卫东2，李明花4

(1. 山西中医学院研究生部，山西 太原030024； 2. 第二军医大学药学院，上海 200433；3.北京振东光明药物研究院，北京 100120； 4.山西振东制药股份有限公司，山西 长治047100)

目的: 对白土苓药材中甲基氧化偶氮类成分苏铁素的含量进行测定。方法:采用反相高效液相法对目标成分进行含量测定，具体的色谱条件：C18色谱柱，流动相为甲醇-1 mL/L甲酸水溶液(2∶98)，检测波长为215 nm，流速为0.6 mL/min。结果:苏铁素在0. 033 2～ 0. 166 0 μg呈良好的线性关系(r=0. 999 9)，白土苓药材中的苏铁素平均含量为0.177 mg/g， RSD 1.05%(n=9)，平均回收率为102.38%。结论: 测定了白土苓中苏铁素的含量，为白土苓药材的定量控制提供了简便、可靠的测试方法。

白土苓；短柱肖菝葜；苏铁素；高效液相色谱法；含量测定

中药白土苓为百合科植物短柱肖菝葜、华肖菝葜或肖菝葜的干燥块茎，主要分布在贵州、云南、四川、广西和湖北等地，尤以短柱肖菝葜HeterosmilaxyunnanensisGagnep.为常用[1,2]。现代药理学研究表明，白土苓具有抗炎镇痛、调节免疫、抑菌解毒、抗肿瘤等作用[3]。从白土苓中分离得到挥发油、三萜及皂苷类、蒽醌、酚酸类、黄酮，及其苷类等多种化合物[4]。有报道采用HPLC等方法从白土苓及复方苦参注射液中检测出偶氮糖苷类化合物大泽明素[5-6]。偶氮糖苷苏铁素(Cycasin)口服可诱发肝癌和肾癌，腹腔注射又具有抗癌作用，表现为与给药途径有关的双重性毒性[7-8]。为对药材进行有效的质量控制，本实验采用HPLC法对白土苓中苏铁素进行含量测定。

1 药品、试剂与仪器

白土苓药材于2013年7月份分别采自于贵州安顺的平坝区、紫云县，以及贵州黄平县，经中国中医科学院中药研究所张思巨研究员鉴定为百合科植物短柱肖菝葜(HeterosmilaxyunnanensisGagnep.)的块茎。方法学研究采用的白土苓药材采自贵州安顺的平坝区。苏铁素对照品，自制，纯度>99.0%，批号20140701；色谱纯甲醇， Fisher Chemical有限公司，批号144250；纯净水为自制，其余试剂均为分析纯。Agilent 1100 系列高效液相色谱仪，美国安捷伦公司产品；BP211D 型电子分析天平，德国Sartorius公司产品；SK1200H型超声波清洗器，上海科导超声仪器公司产品。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

Agilent HC-C18色谱柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm )，流动相为甲醇-1 mL/L甲酸水溶液(2∶98)，检测波长215 nm，流速0.6 mL/min, 柱温室温，进样量为10 μL。结果图1。

A. 对照品；B. 药材供试品；1为苏铁素

2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末(过四号筛) 约2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加入50 mL蒸馏水，称定质量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz) 15 min，放冷后再以同等功率超声15 min，室温冷却，加水补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

苏铁素对照品精密称取3.32 mg，置于100 mL的量瓶中，加水80 mL，超声5 min使溶解, 放置至室温，加水稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含0.033 2 mg的苏铁素对照品溶液。

2.4 线性关系考察

精密吸取2.3项下对照品溶液1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5.0 mL，分别置于10mL的容量瓶中，加水定容至刻度摇匀，按照之前所述的色谱条件，分别取10 μL进样测定，根据实验结果，绘制标准曲线。以进样量(X)为横坐标，峰面积平均积分值(Y)为纵坐标，得回归方程为Y=2 030X+1.97 (r=0.999 9)。结果表明：苏铁素在0.033 2～0.166 0 μg的区间呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取2.3项下对照品溶液4.0 mL，置10 mL的容量瓶中，加水定容至刻度摇匀，取10 μL进样测定，连续进样6次，以峰面积计算，结果苏铁素峰面积的RSD值为0.78%(n=6)。结果表明：仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一个批次的白土苓药材粉末(过四号筛)6份，按2.2项方法制备供试品溶液并检测，测得的平均含量为0.177 mg/g，RSD值为 1.35% 。结果表明：该方法的重复性良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取新鲜配制的供试品溶液，分别在0，2，4，6，12，24 h 进样，根据实验结果计算，显示RSD值为0.58%。结果表明：供试品溶液中的稳定性良好。

2.8 加样回收率实验

精密称取已知含量的白土苓药材粉末(与重复性试验同一批) 9 份，各1 g，每3份平行，置于25 mL容量瓶中。1～3号中精密加入2.3项下对照品溶液4 mL，4～6 号中精密加入上述对照品溶液5 mL，7～9号样品中精密加入上述对照品溶液6 mL，加水定容至刻度，按2.2项下方法进行制备并测试，计算回收率，测得平均回收率为102.38%，RSD值为1.05% 。结果见表1。结果表明：该方法回收率良好。

表1 苏铁素加样回收率实验结果

2.9 样品测定

对分别采自贵州平坝、紫云和黄平的白土苓药材样品，按2.2项下方法进行制备并测试，3批样品中苏铁素的含量分别为0.177, 0.175和0.179 mg/g，综合3批样品的数据，确定白土苓药材中苏铁素的平均含量为0.177 mg/g。

3 讨 论

在对白土苓药材的苏铁素进行测试方法研究时，药材的粉碎粒度、提取方式(冷浸、超声以及回流)、提取溶剂(500 mL/L乙醇溶液、10 mL/L乙酸溶液和水),以及提取时间等实验参数也都进行了考察，最终确定了论文中供试品溶液的制备方法。HPLC流动相研究中，考察了乙腈-2 mL/L磷酸溶液(7∶193) 、甲醇-水(2∶98)、甲醇-1 mL/L甲酸溶液(2∶98)3 种流动相系统,结果表明:甲醇-1 mL/L甲酸溶液(2∶98)流动相能达到基线分离，且保留时间适宜，从而确定其为流动相。

该分析方法具有操作简便，稳定性和精密度高等特点，可作为白土苓药材中苏铁素含量测试的一种分析手段。

[1]中国植物志编委会.中国植物志： 第15 卷[M].北京:北京科学出版社，1978:212.

[2]湖南植物志编委会.湖南植物志：第3卷[M].长沙：湖南科学技术出版社，2010.

[3]秦文杰，王钢力，林瑞超.短柱肖菝葜化学成分的研究[J].中草药, 2007, 38(10):1466-1468.

[4]乔蕾.中药白土茯苓质量控制方法研究[D].沈阳:沈阳药科大学，2007.

[5]马悦.复方苦参注射液化学成分及质量控制研究[D].北京：中国中医科学院，2012.

[6]李进冉，张思巨，李琳，等.白土苓中大泽明素与总黄酮的含量测定[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(8):68-71.

[7]GL Laqueur, M Spatz.Toxicology of Cycasin [J].Cancer Research, 1968,28(11):2262-2267.

[8]Fumio Yagi, Kenjiro Tadera, Akira Kobayash.Simultaneous determination of azoxyglycosides by high performance liquid chromatography and their contents in growing leaves of Japanese cycad [J].Agricultural & Biological Chemistry，1983, 47(1): 137-139.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)11-0069-03

R284.4

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.11.33

李明花，执业药师，研发总经理，硕士生导师，1035448060@qq.com

科技部十一五重大新药创制专项“超五亿岩舒的大品种技术改造”(2008ZX09202-009)；中国博士后科学基金资助项目(2015M572741)

2015-08-22；

2015-09-18