胃癌组织miRNA-433的表达情况及其影响因素分析

沈淑蓉

(温州市中西医结合医院，浙江 温州 325000)

胃癌组织miRNA-433的表达情况及其影响因素分析

沈淑蓉

(温州市中西医结合医院，浙江 温州 325000)

目的:分析荧光定量PCR法检测胃癌血清中miRNA-433的表达情况，探讨miRNA-433在胃癌检测中的意义。方法:设计miRNA-433和U6茎环逆转录引物和PCR扩增引物，以U6为内参利用实时荧光定量PCR检测正常对照组、胃窦溃疡组、胃窦炎性息肉组及胃癌组的miRNA-433表达情况，并将术前与术后的miRNA-433表达情况进行对比分析。结果:胃癌组患者的miRNA-433表达水平明显均高于正常对照组、胃窦溃疡组及胃窦炎性息肉组，具有显著性差异(P＜0.05)。结论:荧光定量PCR具有特异性强、灵敏度高等优点，可以运用于检测胃癌的早期诊断和分期，具有广阔的应用前景，值得进一步推广。

荧光定量PCR法;血清miRNA-433;表达情况;应用效果

胃癌属于一种恶性肿瘤，常发生于胃黏膜上皮细胞，其发病率高，给患者的生命健康造成很大的威胁。胃癌的早期诊断的标准为胃镜及病理学诊断，现今，血清肿瘤标记物(如癌胚抗原)也逐渐开始应用于检测肿瘤，但其对胃癌诊断的敏感性和特异性相对较低［1-2］。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种普遍存在于多种细胞生物中的内源性、非编码小RNA分子，长19-22个核苷酸，约占基因总数的2%［3］。本研究就荧光定量PCR法在胃癌血清miRNA-433检测中的应用效果报道如下［1］。

一、材料与方法

(一)材料。

1.标本收集。2010年10月-2012年10月我院收治106例患者。其中30例未经放化疗的胃癌患者，其中男17例，女13例，年龄42-67岁，平均年龄为(53.8±8.7)岁;正常人员30例，年龄41-64岁，平均年龄为(51.8±13.5)岁;胃窦溃疡患者27例，年龄40-66岁，平均年龄为(53.2±14.3)岁;胃窦炎性息肉患者19例，年龄43-63岁，平均年龄为(52.6± 15.7)岁。

2.主要试剂和仪器。Trizol试剂;miRNA-433荧光定量PCR试剂盒;逆转录所需的dNTPs及逆转录酶、100bp DNAL adder Marker;ABI Prism7000荧光定量PCR仪;Biophotometer生物分光光度计。

(二)方法。

1.总RNA提取。采用Trizo法分别提取胃癌组织、正常组织、胃窦溃疡组织、胃窦炎性息肉及其癌旁组织的总RNA，Biophotometer生物分光光度计检测RNA质量和浓度，1.2%的甲醛变性凝胶电泳［2］。

2.实时荧光定量PCR检测血清中miRNA-433含量。以RNA为模板，分别以miRNA-433和U6反转录引物行逆转录反应，反转录条件为42℃ 60min，85℃ 5s，获得小鼠肝脏组织的miRNA-433和U6 cDNA。分别以miRNA-433和U6 cDNA为模板，以miRNA-433和U6的特异性引物实时荧光定量PCR，反应参数为95℃10min预变性，95℃15s，60℃30s荧光检测1次，共40个循环。

(三)统计学分析。

经方差分析发现miRNA-433基因相对表达量不满足正态分布和方差齐性条件，故只能以M(P25，P75)表示，采用SPSS 17.0软件进行，并利用Mann-Whitney U检验进行组间比较。当P＜0.05为有统计学意义。

二、结 果

胃癌组、胃窦溃疡组、胃窦炎性息肉组及正常对照组的miRNA-433相对表达量分别为1.99(0.96，2.51)、1.25 (0.97，2.36)、1.31(1.13，2.66)及0.03(0.02，0.05)。胃癌组患者的miRNA-433表达水平明显均高于正常对照组、胃窦溃疡组及胃窦炎性息肉组［4］，具有显著性差异(P＜0.05) (见附表)。

三、讨 论

本次实验采用荧光定量PCR法检测胃患者血清中的miRNA-433表达情况，设计具有茎环结构的逆转录引物和用miRNA荧光标记的特异分子探针进行实时荧光定量PCR。通过熔解曲线的分析结果可以看出基本没有引物二聚体的形成，证明了反应具有特异性。结果显示胃癌组患者的miRNA-433表达水平明显均高于正常对照组、胃窦溃疡组及胃窦炎性息肉组(P＜0.05)，而正常对照组、胃窦溃疡组及胃窦炎性息肉组之间相比较则无显著性差异(P＞0.05);术前miRNA-433表达水平明显均高于术后，具有显著性差异(P＜0.05)。这与相关报道一致。综上所述，荧光定量PCR法可以较为精确显现出胃癌患者血清中miRNA-433的表达水平，进而为胃癌的早期诊断提供参照指标，具有广阔的应用前景。

附表 荧光定量PCR检测miRNA-433在各组血清中的表达情况比较

［1］王君辅，李红浪，谢 勇，等.循环microRNA在胃癌诊断及预后预测中应用的研究进展［J］.广东医学，2012，33(24):3828-3831.

［2］张晟春，王 燕，张兴毅，等.两种荧光定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织中微小RNA-21的应用分析［J］.中国全科医学，2013，16(20):624-628.

［3］马文静，李 鲁，吕国栋，等.SYBR green实时荧光定量PCR检测微小RNA 21的方法建立及在食管鳞癌中的应用［J］.生物技术，2010，20(1):45-48.

［4］陈文璟，温旺荣.SYBR green I荧光定量PCR检测宫颈癌血清中miR-21的表达［J］.临床检验杂志，2011，29(7):523-525.

R735

A

1002-1701(2015)07-0126-02

2014-10

沈淑蓉，女，硕士，副主任医师，研究方向:肿瘤生物学行为研究。

温州市科技局课题，胃癌淋巴转移特异性血清microRNA的筛选与鉴定(编号Y20110136)。

10.3969/j.issn.1002-1701.2015.07.066