高效液相色谱法测定地黄和胃口服液葛根素含量

宋志勇

(河北省玉田县中医医院制剂科，河北 玉田 064100)

地黄和胃口服液由黄芪、熟地黄、玄参、沙参、葛根等13味中药制成，具有益气滋阴、清热和胃的作用。临床上主要用于阴虚燥热、湿浊内生之口干、烦渴多饮、纳差、脘腹不适、周身乏力、小便频数、量多及大便干结等糖尿病并发症。根据地黄和胃口服液处方及制法的特点，研究参考2010年版《中华人民共和国药典》［1］葛根中葛根素含量测定方法及有关文献报道［2］，采用高效液相色谱法测定地黄和胃口服液中葛根素的含量，方法简便，结果准确，结果如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SpECTRA SYSTEM P1000高效液相色谱泵;Spectra SERIES UV100型紫外分光检测器;N2000色谱工作站。

1.2 药材与试剂 葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批号110752－200912);地黄和胃口服液(河北省玉田县中医医院生产，冀药制字Z20110090，批号20130809);试验中所用化学试剂为分析纯和色谱纯。

2 方法及结果

2.1 色谱条件 色谱柱:大连 ODS柱(5 μm，200 mm×4.6 mm)，柱效按葛根素峰计算，理论板数不得低于4 000。流动相:甲醇－水(25∶75)。测定波长:250 nm。柱温为室温。

2.2 对照品溶液制备及测定 精密称取葛根素对照品16.87 mg，置50 mL容量瓶内，加25%甲醇使溶解，并加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 mL，置50 mL量瓶内，加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每mL含葛根素67.48 μg)。取10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。葛根素对照品色谱图见图1。

图1 葛根素对照品色谱图

2.3 供试品溶液制备及测定 精密量取地黄和胃口服液2 mL，置100 mL量瓶中，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。地黄和胃口服液供试品色谱图见图2。

图2 地黄和胃口服液供试品色谱图

2.4 阴性对照品溶液干扰情况 按地黄和胃口服液的制法制取缺葛根阴性对照品，按2.3项下制备方法制成葛根阴性对照溶液。取10 μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。通过色谱图可以看出，阴性图谱中在与葛根素对照品图谱相应的位置上无色谱峰，阴性无干扰。地黄和胃口服液葛根阴性对照品色谱图见图3。

图3 地黄和胃口服液葛根阴性对照品色谱图

2.5 线性关系考察 精密称取葛根素对照品16.87 mg，置50 mL容量瓶内，加25%甲醇使溶解，并加25%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密吸取此储备液 1、2、3、5、10、15 mL，置50 mL量瓶内，加25%甲醇稀释至刻度，得葛根素的浓度分别为:6.748、13.496、20.244、33.740、67.480、101.220 μg/mL;分别精密吸取上述溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，以浓度(μg/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，方程为 Y=357 693X+340 132，r=0.999 9，由此可知，葛根素在6.748～101.220 μg/mL范围内呈良好的线性关系。见表1。

表1 线性关系考察结果

2.6 精密度试验 精密吸取2.2项下对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定葛根素峰面积，计算相对标准偏差(RSD)。结果显示，对照品溶液峰面积RSD=0.4%，测定结果表明仪器精密度良好。见表2。

表2 精密度试验结果

2.7 对照品溶液稳定性试验 将2.2项下对照品溶液于5 ℃左右存放24 h，分别于 1、2、3、4、6、8、12、24 h各进样1次，考察样品24 h内的稳定性。结果显示，对照品葛根素RSD=0.9%，表明对照品溶液24 h内基本稳定。结果见表3。

表3 对照品溶液稳定性试验结果

2.8 重复性试验 对2.3项下供试品溶液，重复试验6次，得葛根素平均含量2.19 mg/mL，RSD=1.3%，＜2%。说明方法重现性良好。见表4。

表4 重复性试验结果

2.9 稳定性考察 对2.3项下供试品溶液分别间隔一定时间测定1次，共考察12 h。结果显示，供试品溶液至少在12 h内稳定。见表5。

表5 稳定性考察结果

2.10 回收率试验 精密量取已知含量(含葛根素2.19 mg/mL)的样品，精密加入一定量的葛根素对照品，按2.5项下样品所述方法测定，按下式计算回收率，回收率=［(测出葛根素的量－样品中含葛根素的量)/添加葛根素的量］×100%。结果显示，平均回收率100.23%，RSD=0.5%(n=9)。说明方法简便，结果准确。结果见表6。

表6 葛根素回收率试验结果

3 讨论

本试验参考相关文献［3－4］，比较了甲醇－水，乙腈－水，等各种流动相及不同比例，结果发现甲醇－水(25∶75)作为流动相，葛根素与其他杂质峰之间能得到较好的分离，由样品色谱图可以看出，在本色谱条件下，其他组分对葛根素无干扰，可以做为地黄和胃口服液中葛根素的含量测定方法，用以控制地黄和胃口服液的质量。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:312.

［2］ 黄樱华，黄月纯，王祝彬，等.葛根骨康宁颗粒中的葛根素的含量测定研究［J］.中国药师，2010，15(2):186－188.

［3］ 王宛，王建明.HPLC法测定颈通茶中葛根素和芍药苷的含量［J］.中国中医药科技，2010，17(6):529－530.

［4］ 杨芳.RP－HPLC测定益脑复健胶囊中葛根素的含量［J］.中国医药导报，2009，6(20):43－44.