复发性流产患者蜕膜和绒毛组织中TNF-α、水通道蛋白1的表达变化及意义

复发性流产患者蜕膜和绒毛组织中TNF-α、水通道蛋白1的表达变化及意义

郭君丽，郭君红

(宝鸡市妇幼保健院,陕西宝鸡721000)

摘要：目的观察复发性流产(RSA)患者蜕膜和绒毛组织中TNF-α、水通道蛋白(AQP)1的表达变化，并探讨其意义。方法采用免疫组化法对60例RSA患者(RSA组)和20例正常早孕人工流产者(对照组)蜕膜及绒毛组织中的TNF-α、AQP1进行检测。结果RSA组、对照组蜕膜组织TNF-α阳性表达率分别为80%(48/60)、60.0%(12/20)，AQP1阳性表达率分别为42%(25/60)、55%(11/20)，两组两指标相比，P均>0.05。RSA组、对照组绒毛组织中TNF-α阳性表达率分别为75%(45/60)、15%(3/20),AQP1阳性表达率分别为20%(12/60)、25%(15/20)，两组两指标相比，P均<0.05。RSA组绒毛组织中TNF-α与AQP1的表达呈负相关(r=-0.385、P<0.05)。结论 RSA患者绒毛组织中TNF-α表达增加、AQP1表达减少，而且两者的表达水平呈负相关关系；TNF-α、AQP1可能共同参与了RSA的发病过程。

关键词：妊娠；病理性妊娠；流产；自然流产；复发性流产；肿瘤坏死因子α；水通道蛋白

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.017

中图分类号：R714.21文献标志码：B

收稿日期：(2015-06-29)

复发性流产(RSA)是指患者与同一性伴侣连续发生2次或2次以上的自然流产，发生率为1%～2%。RSA病因复杂，已知病因有染色体异常、生殖道感染、内生殖器官解剖畸形、内分泌失调、免疫因素、理化环境因素等，仍有约50%的患者病因不明。随着生殖免疫学的飞速发展，已逐渐发现不明原因的自然流产80%与免疫因素相关[1]，特别是Th1/Th2型细胞因子表达失衡学说的出现，为RSA的免疫学发病机制研究提供了理论依据。本研究对RSA患者蜕膜和绒毛组织中TNF-α、水通道蛋白(AQP)1的表达变化进行了观察，探讨其在RSA发病中的作用。

1资料与方法

1.1临床资料2012年7月～2014年12月宝鸡市妇幼保健院收治的出现流产症状、临床确诊已经发生难免流产或胚胎停育的RSA患者60例(RSA组)，年龄22～40岁，孕周6～10周；其中流产2次者36例、≥3次者24例；本组夫妇染色体核型、生殖道、内分泌、TORCH[T为弓形虫，O为其他(主要指梅毒螺旋体)，R为风疹病毒，C为巨细胞病毒，H为生殖道疱疹病毒]、内生殖器结构及抗核抗体检查均无异常。选择同期就诊要求终止妊娠的正常早孕妇女20例作为对照组，年龄28～42岁，孕周6～10周；本组既往无自然流产、死胎、死产史，无染色体、生殖器解剖、内分泌等方面的异常，无自身免疫性疾病史，本次妊娠期间无服药史、病毒感染史及有害有毒物质接触史，无先兆流产症状；B超检查提示宫内妊娠，胚胎原始心管搏动。两组均排除全身疾病或感染性疾病，两组年龄及孕周有可比性(P均>0.05)。两组均接受常规人工流产手术。

1.2蜕膜及绒毛组织中TNF-α、AQP1检测方法两组于人工流产手术中收集无菌新鲜蜕膜和绒毛组织，立即置10%的中性甲醛溶液中固定，梯度乙醇脱水，常规石蜡包埋，连续切片(厚4 μm)。切片HE染色，分别观察蜕膜和绒毛组织形态。采用免疫组化SP法检测蜕膜和绒毛组织中的TNF-α、AQP1，用PBS代替一抗作阴性对照，按试剂盒说明书操作。每例的组织切片随机选取10个高倍视野进行结果判定。按染色强度及阳性细胞所占百分比计分：细胞无色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分;阳性细胞百分比<5%为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、>50%为3分；上述两分值相乘，乘积等于0判为阴性、1～3为弱阳性(+)、4～5为中度阳性(++)、≥6为强阳性(+++)，+、++、+++均为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS13.0统计软件。计数资料比较用χ2检验，相关性分析用Spearman相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组蜕膜组织中TNF-α、AQP1的表达比较两组蜕膜组织中均有TNF-α和AQP1表达，TNF-α主要表达于蜕膜间质细胞胞质，AQP1主要表达于蜕膜腺体细胞胞膜。RSA组、对照组蜕膜组织TNF-α阳性表达率分别为80%(48/60)、60.0%(12/20)，AQP1阳性表达率分别为42%(25/60)、55%(11/20)，两组两指标相比，P均>0.05。

2.2两组绒毛组织中TNF-α、AQP1的表达比较两组绒毛组织中均有TNF-α和AQP1的表达，均表达于细胞滋养细胞和合体滋养细胞胞质。RSA组、对照组绒毛组织中TNF-α阳性表达率分别为75%(45/60)、15%(3/20)，AQP1阳性表达率分别为20%(12/60)、25%(15/20)，两组两指标相比，P均<0.05。

2.3RSA组患者绒毛组织中TNF-α和AQP1表达的相关性 60例RSA患者绒毛组织中TNF-α和AQP1均呈阳性表达者5例、均呈阴性表达者8例，二者的表达呈负相关(r=-0.385，P<0.05)。

2.4RSA组绒毛组织中TNF-α和AQP1表达与复发性流产次数的关系RSA组流产2次者36例，其绒毛组织中TNF-α阳性25例、阴性11例，AQP-1阳性6例、阴性30例；流产≥3次者24例，其绒毛组织中TNF-α阳性20例、阴性4例，AQP-1阳性9例、阴性15例；不同流产次数者绒毛组织中TNF-α和AQP1的阳性表达相比，P均>0.05。

3讨论

生殖免疫学认为胚胎对母体来说是一种同种异体移植物，被母体免疫系统识别并产生免疫应答。蜕膜和绒毛膜是孕早期母体与胚胎直接接触的部分，母胎界面细胞因子对胚胎的免疫耐受起着重要的调节作用[2]，这些细胞因子主要由滋养细胞产生，具体表现为早期妊娠排斥与耐受的平衡，特别是辅助T细胞(Th)在妊娠免疫中发挥重要作用。根据分泌的细胞因子类型不同Th分为Th1和Th2两个亚群；Th1主要介导细胞免疫应答，产生胚胎排斥作用；Th2主要介导体液免疫反应，形成免疫耐受保护，使胚胎不受母体免疫系统的排斥[3]。两种免疫应答均受错综复杂的Th1/Th2细胞因子网络调控。正常妊娠时Th1/Th2细胞因子平衡以向Th2为主的模式偏移，一旦平衡向Th1细胞因子偏移，即Th1型细胞因子水平升高，将发挥免疫杀伤作用，可能导致RSA的发生[4]。

TNF-α主要由免疫系统中的抗原呈递细胞如单核-巨噬细胞、Th1细胞等产生，是Th1型细胞因子。生理情况下，适量的TNF-α可调节滋养细胞的正常增殖、分化和凋亡，促进能量代谢及胚胎发育[5]，提高孕激素及绒毛膜促性腺激素的合成，刺激细胞滋养层生成尿激酶型血浆素原激活剂,有利于蜕膜细胞外基质降解及胎盘植入，对正常妊娠的维持有重要作用[6]。本研究发现，RSA患者绒毛组织TNF-α表达水平明显高于对照组，与孙岩等[7]的研究结果相似。这一结果提示RSA患者母胎界面高表达TNF-α，可促进滋养细胞凋亡，阻碍绒毛生长，导致蜕膜坏死，阻止孕卵正常发育。陈广莉等[8]研究发现，RSA患者血清中TNF-α水平较正常妊娠者高，也证实TNF-α在RSA中发挥了作用。高浓度的TNF-α可能通过多种途径导致流产：TNF-α与滋养细胞中的相应受体结合，激活Th1型免疫反应，释放出大量有害细胞因子，干扰内分泌网络，导致子宫内环境的稳态破坏，使胚胎发育受阻，胎儿死亡；另一方面，可能是TNF-α本身对血管内皮细胞有直接毒性作用，限制滋养细胞的生长发育，影响胚胎的营养供给及吸收，导致胚胎死亡。

AQP是一组新的疏水性跨膜蛋白，具有调节细胞内外渗透压平衡及血管形成等重要作用，广泛存在于哺乳动物生殖系统，迄今已发现13种，AQP1为其中一种。Mann等[9]研究发现，AQP1在人胎膜中有表达，并定位于羊膜上皮细胞和绒毛膜的滋养细胞，孕早期AQP1主要表达于绒毛膜组织中[10]。AQP1通过增强血管的渗透性和组织间隙的压力，促进内膜细胞外移、迁徙，并可抑制细胞凋亡及促进新生血管生成。本研究发现，RSA患者绒毛膜组织中AQP1表达明显低于正常妊娠者。IL-10是Th2细胞因子，诱导母胎免疫耐受，对正常妊娠起保护作用[11]。王忠慧等[12]认为肺损伤时，IL-10与AQP1之间可通过炎症介质的级联激活，相互间呈不同程度正反馈调控。因此，AQP1可能通过间接方式作用于Th2细胞因子平衡系统，进而维持正常妊娠。

本研究还发现，RSA组患者绒毛组织中TNF-α和AQP1的表达呈负相关，可能与绒毛组织缺血缺氧时TNF-α等促炎因子大量释放，下调AQP1基因表达有关。包呈梅等[13]研究拟胆碱药卡巴胆碱对口服补液烫伤大鼠小肠组织中TNF-α及AQP1表达关系时发现，肠内葡萄糖-电解质液+肠内卡巴胆碱组、肠内卡巴胆碱组及单纯烫伤组AQP1表达量与TNF-α表达量呈负相关。但TNF-α和AQP1相互作用的具体机制尚不清楚，有待进一步研究。

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