HLC-723G8全自动糖化血红蛋白分析仪常见干扰因素分析

杨开洪，梁知锐，曾庆栈

(阳江市中医医院检验科，广东 阳 江529500)

糖化血红蛋白(HbA1c)可以反映过去8~10周的平均血糖水平，因此是评价糖尿病患者血糖控制情况一项良好的指标。HLC-723G8是日本东曹株式会社(TOSOH CORPORATION)生产的一款简单快捷、高性能的糖化血红蛋白分析仪，它采用离子交换高效液相色谱法(HPLC)原理，利用其电荷差异通过阳离子交换住对血红蛋白类物质进行分离，对HbA1c等血红蛋白各成分以一个样本1分钟的高速，按共计6个组分进行分离测定，它利用3种不同盐浓度的缓冲液进行梯度洗脱的方法进行分离，最后根据血红蛋白各成分比例获得HbA1c的比例。离子交换HPLC一直以来以其良好的准确性、稳定性在临床上得到广泛的应用，并被认为是测定HbA1c的国际标准化方法[1,2]。尽管如此，在HLC-723G8的日常使用中，常会有一些因素导致HbA1c测定结果不可靠或者根本无法测出。本文就影响HLC-723G8测定HbA1c的常见干扰因素进行分析探讨，供同行参考。

1 变异血红蛋白

1.1 地中海贫血标本 2014年9月，本实验室检测到1例HbA1c结果为0.0%的患者，同时血常规结果发现其血红蛋白浓度、平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白含量均降低，基因检测确诊为地中海贫血，用亲和层析法(NycoCardR)复查，标准化后HbA1c结果为5.6%[3]，因此怀疑为地中海贫血样本对HLC-723G8测定结果影响所致。索明环等[4]采用阳离子交换HPLC检测3例地中海贫血患者均获得异常的HbA1c图谱，3例结果均为异常。谢裕达等[5]在进行地中海贫血孕妇妊娠糖尿病筛查时也发现HbA1c值受地中海贫血影响较大。地中海贫血是一组遗传性溶血性贫血疾病，它是由于基因缺陷导致血红蛋白α链或者β链存在突变或者缺失[6]，血红蛋白各成分表面的电荷量产生继发性改变，从而使离子交换色谱分离时间提前或者延迟，此时HbA1c常不能单独形成分离峰，因此其检测结果为0.0%。

1.2 高血红蛋白F(HbF)标本 研究表明当样本HbF浓度<8.75%时，离子交换HPLC法的测定结果与理论值无差异；当样本HbF浓度为17.50%～23.00%时，其测定结果要明显低于HbA1c理论值；当HbF浓度达35.0%～70.0%时，离子交换HPLC法根本无法检测出HbA1c[7]。张艳芳等[8]报道2例遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症患者测定HbA1c时，其中1例血红蛋白电泳检测结果HbF占100%，而其采用离子交换HPLC测定HbA1c时未检测出结果，表明HbF对HbA1c检测产生了严重干扰。张静等[9]在综述HbA1c检测的影响因素时也表示HbF、HbS会对其检测产生一定的误差。HbF是由α链和γ链构成的胎儿性Hb，新生儿参考区间约31%～96%。新生儿脐带血中含有大量HbF，大约占血红蛋白总量的70%～90%，它的等电点和HbA1c比较接近，在检测过程中HbA1c峰大部分叠加在HbF峰中，导致HbA1c值显著偏低或根本检测不出。

1.3 血红蛋白 D(HbD)、血红蛋白 C(HbC)、血红蛋白S(HbS)异常升高的标本 东曹(上海)生物科技有限公司的 《HLC-723G8产品介绍》中指出：⑴当HbD、HbS、HbC 以杂合形式存在(如 HbAS)时，采用HLC-723G8全自动糖化血红蛋白分析仪变异模式进行测定不影响测定结果。⑵当HbD、HbS、HbC以纯合形式或者双杂合形式存在时(如HbSS、HbSC)，HbA1c测定则无法运行。⑶其他变异血红蛋白的影响：血红蛋白E(HbE)病是地中海贫血中一种特殊类型，检测HbA1c时特别需要注意HbE会在HbA1c峰前出现一个小峰。

2 尿毒症患者标本

尿毒症患者由于肾功能严重受损常继发肾性贫血，患者体内有过多的尿素(BUN)等含氮代谢废物及毒物在体内蓄积，尿素在体内可自发地分离形成氨和氰酸盐，氰酸盐经质子化作用后形成异氰酸，血红蛋白链端的缬氨酸可与异氰酸发生特异性的结合反应，形成稳定的氨基甲酰血红蛋白(CarHb)，其含量常以氨基甲酰缬氨酸(CV)表示。近来发现氮质血症与氨基甲酰血红蛋白关系密切，而受到许多学者的重视[10,11]。氨基甲酰血红蛋白与HbA1c一样在溶液中都带较强正电荷，所以在采用基于电荷分离原理的分析方法中(如电泳、离子交换层析法)，HbA1c测定结果易受氨基甲酰血红蛋白的影响，导致HbA1c结果偏高[12,13]。

3 高乙醇标本

当血浆乙醇浓度大于25mg/dl时会对离子交换HPLC法测定HbA1c产生一定的干扰。乙醇可促进氧与血红蛋白特异性结合，进而改变血红蛋白的分子构象，影响血红蛋白的携氧能力。血红蛋白拉曼光谱的结果表明：当乙醇浓度大于25mg/dl时，随着乙醇浓度的增加，血液中氧合血红蛋白占总血红蛋白的比例随之增加，血红蛋白释氧能力减弱，当乙醇浓度为500mg/dl时，氧合血红蛋白达到最多[14]。离子交换HPLC法测定HbA1c是通过计算HbA1c占总血红蛋白的比值，随着乙醇浓度的增加氧合血红蛋白的含量增加，HbA1c所占的比例逐渐变少，所以不能真正反映个体HbA1c的水平，导致测定结果的不准确。此外，HbA1c的生成与红细胞生存时间有关，而酗酒可引起红细胞寿命降低并能干扰红细胞的生成，缩短红细胞寿命会降低HbA1c水平[15,16]，因此乙醇也可间接降低HbA1c水平。

4 严重脂浊标本

东曹(上海)生物科技有限公司的《HLC-723G8产品介绍》中指出，当血液浊度大于2500Formazin浊度单位时，离子交换HPLC法测定HbA1c值也会产生干扰。脂浊产生的原因包括原发性高脂血症、继发性高脂血症、餐后以及输注脂肪乳后等，脂浊标本是由于血液中甘油三脂等含量过高导致血液外观呈脂白色浑浊。各种脂蛋白因所带电荷的不同，在用离子HPLC法检测时也会对其进行分离，所以当严重脂浊标本各种脂蛋白含量达到一定值时 (浊度大于2500Formazin)，在离子HPLC法测定HbA1c时含量不同的脂蛋白也会同时进行分离并在图谱相应位置叠加，影响电泳图谱中血红蛋白各成分的含量，从而对HbA1c测定结果产生不定向干扰。

HLC-723G8全自动糖化血红蛋白分析仪具有精密度高、相关性好、携带污染小、测试速度快、操作简便等优点而被广泛使用于临床[17]，但由于其采用离子交换HPLC法，凡是影响该方法的因素均会对仪器产生一定的影响，实际使用中不能完全排除特殊标本对检测结果的影响，只有充分了解仪器性能、总结分析影响其测定结果的各种样本干扰因素，才能获得可靠的分析结果。

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