2型糖尿病患者尿足细胞标志蛋白的检测意义

史恒川 刘俊恒 朱建一

2型糖尿病患者尿足细胞标志蛋白的检测意义

史恒川 刘俊恒 朱建一

目的 探讨老年2型糖尿病不同肾病分期患者尿足细胞标志蛋白(PCX)的变化及其临床意义。 方法 测定136例老年2型糖尿病患者和50例健康体检者(对照组)尿PCX、尿白蛋白(UALB)、血清肌酐(CREA)、尿素(UREA)水平,按UALB水平将2型糖尿病患者分为3组:尿蛋白正常组、微量白蛋白尿组、临床白蛋白尿组,将各组间检测数据进行分析比较。 结果 尿蛋白正常组、微量白蛋白尿组、临床白蛋白尿组尿PCX水平均明显高于对照组(P<0.01)。各个组间PCX水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.01),PCX水平随着蛋白尿程度的增加而升高(r=0.58,P<0.01)。 结论 检测尿PCX有利于DM患者肾损害的早期诊断和病变程度的评估。

2型糖尿病; 肾病; 足细胞标志蛋白; 白蛋白尿

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(DM)最严重的并发症之一,这是一种以肾脏微血管损害为主的肾小球病变。足细胞是组成肾小球滤过膜的主要成分,其足突顶端表面有一层富含唾液酸的糖蛋白,是最为特异的足细胞标志蛋白(podocalyxin,PCX),参与维持肾小球的正常结构和滤过屏障。足细胞损伤是肾病最早期的病理改变,其损伤和脱落是肾小球滤过屏障发生改变并产生蛋白尿的重要因素[1],伴随着足细胞的损伤,患者尿液中PCX(UPCX)的水平也发生变化。本文通过对2型糖尿病(T2DM)患者UPCX的检测,探讨其在T2DM患者早期肾损害诊断中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选取2014年1～11月本院内分泌科住院及门诊就诊的T2DM患者136例,均符合1999年世界卫生组织(WHO)的糖尿病诊断标准。排除各种感染性疾病、原发性肾炎、关节炎、系统性红斑狼疮等其他免疫炎性疾病、严重心脑血管疾病和肝脏疾病,1月内服用免疫抑制剂等药物患者。136例DM患者根据其尿白蛋白/肌酐比值(the ratio urinary albumin to creatinine, ACR)分为3组:尿蛋白正常组:ACR<30 mg/g,共46例,年龄52～87岁,平均(62.9±10.8)岁,男24例,女22例;微量白蛋白尿组:30 mg/g≤ACR≤300 mg/g,共47例,年龄54～89岁,平均(63.3±9.4)岁,男24例,女23例;临床白蛋白尿组:ACR>300 mg/g,43例,年龄53～90岁,平均(68.1±15.3)岁,男21例,女22例。同期选择来我院健康体检者50例作为对照组,年龄56～82岁,平均(62.1±15.9)岁,男26例,女24例。体检均排除心、肝、肾等重要脏器疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 临床资料收集:记录各组中所有研究对象的性别、年龄、病程、身高、体质量,计算体质量指数(BMI)。

1.2.2 检测指标：留取患者晨起清洁中段尿，1500 r/min离心20 min，弃去上清，留取尿沉渣200 μl，-20 ℃冰箱保存备用。PCX检测采用ELISA法，用GENESIS RPM 150全自动酶免疫系统检测。检测试剂盒购自上海越研生物科技有限公司。参照试剂盒说明书操作，使用标准品绘制标准曲线，然后对照标准曲线计算PCX的水平。同时收集受检者的晨尿用于检测尿微量白蛋白(UALB)，为了减少受检者尿量收集对测定结果的影响，UALB的浓度采用除以尿肌酐(UCr)的结果来表示。UALB采用免疫比浊法，UCr采用酶法，在德国拜耳DCA-2000分析仪上进行检测；同时受检者清晨取空腹静脉血，分离血清后用于检测血清肌酐(CREA)、尿素(UREA)。CREA、UREA在Roche Modular P800模块式全自动生化仪上完成检测，试剂为法国Roche公司产品。

2 结果

2.1 DM各组与对照组临床资料比较 DM各组与对照组在性别、年龄、BMI等指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。微量蛋白尿组和临床白蛋白尿组病程与尿蛋白正常组相比较,差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 DM各组与对照组间临床资料比较

注:与正常蛋白尿组比较,**P<0.01

2.2 DM各组与对照组检测指标比较 尿蛋白正常组、微量白蛋白尿组、临床白蛋白尿组UREA、UPCX水平均明显高于对照组(P<0.01);与尿蛋白正常组相比,微量白蛋白尿组、临床白蛋白尿组CREA、UREA、UPCX水平也明显增高(P<0.01或P<0.05);临床白蛋白尿组CREA、UREA、UPCX水平也明显高于尿蛋白正常组和微量白蛋白尿组(P<0.01);见表2。

表2 DM各组与对照组肌酐、尿PCX及ALB水平比较

注:与对照组比较,**P<0.01;与尿蛋白正常组比较,△P<0.05,△△P<0.01;与微量白蛋白尿组比较,##P<0.01

2.3 尿PCX的相关性分析 尿PCX与尿ALB呈显著正相关(r=0.58,P<0.01),随着尿蛋白排泄的增加,尿沉渣中PCX的浓度也明显上升。

3 讨论

3.1 DN是DM最严重的并发症之一,是引起肾衰竭的重要原因,也是DM病人主要的死亡原因之一。临床上约有40%的DM患者在发病10年后出现DN。早期的诊断和治疗能明显改善DN的预后,延缓肾脏损伤发展至末期,降低病死率。UALB、超敏C反应蛋白(hs-CRP)等指标在DN预测中有一定的意义[2],但易受人为因素身体状态及药物等因素影响[3],不能真实反映早期肾脏受损情况。

3.2 足细胞是高度特化的肾小球脏层上皮细胞,是组成肾小球滤过膜的主要成分,位于肾小球基底膜外侧,也是阻止大分子滤过的最后屏障。PCX是肾小球足细胞足突顶端膜区的主要跨膜蛋白之一,也是足细胞表面特异性标志蛋白分子之一,在足细胞成熟过程中固定于足细胞顶膜[4],只表达于足细胞而不表达于其他的尿道上皮细胞。PCX作为肾小球主要带负电荷的蛋白分子,可以防止突起之间黏连，维持裂孔膜结构和肾小球滤过膜电荷屏障。近年的研究发现,足细胞是各种肾小球炎症及非炎症损伤的靶位[5],当肾脏损伤时,足细胞形态开始发生改变,与血管基底膜剥离,随尿液排出[6]。本研究结果显示,DM患者各组尿沉渣中PCX水平显著高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01),表明DM患者在发生肾脏损伤时,尿PCX水平明显增高,说明DM患者肾小球损伤的活动性[7]。有研究表明在肾小球足细胞从基底膜脱落之前,尿中PCX水平就已经升高[8],因此PCX可用作早期肾脏损伤的监测指标。本试验也发现DM患者处于正常蛋白尿期时,尿沉渣中PCX的浓度已明显上升,提示可以通过检测尿PCX的浓度来监测早期糖尿病肾脏损伤。

3.3 足细胞脱落后,裸露的血管基底膜无法维持毛细血管袢血压与肾小囊内静水压之间正常的压力平衡,导致毛细血管扩张,直至与肾小囊壁层细胞发生黏连。同时,在正常生理情况下血浆白蛋白分子几乎不会通过肾小球滤过屏障,而足细胞脱落后将导致肾小球滤过屏障发生改变,使得白蛋白更容易滤过,形成蛋白尿。因此检测尿PCX还可以间接反映肾小球滤过膜的损伤[9]。本研究也显示了尿PCX的表达水平随着尿白蛋白排泄率的增加而显著增加,尿PCX水平与尿白蛋白排泄水平呈显著正相关(r=0.58,P<0.01),说明DN患者随着肾脏损伤的不断进展,大量的肾小球足细胞损伤脱落,导致肾小球滤过屏障失去生理作用,患者尿液中ALB与PCX水平也明显增高,因此检测尿PCX水平可用于DN患者肾损伤程度的评估。

综上所述,PCX作为肾小球足细胞表面标志性蛋白,在DM患者早期尿沉渣中就会出现水平升高,因此检测尿沉渣中PCX有利于诊断早期微小病变和局灶性节段性肾小球硬化[10],评估DN患者肾脏损伤程度,对于DN的早期防治具有重要的临床意义。

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The expression of urine podocalyxin in patients with type 2 diabetes mellitus and its clinical significance

SHIHeng-chuan,LIUJun-heng,ZHUJian-yi.DepartmentofClinicalLaboratory,JiangsuProvinceGeriatricHospital,Nanjing210024,China

Objective To observe the changes and clinical significace of the urinary excretion of podocalyxin (PCX) in elderly type 2 diabetes mellitus (T2DM) patients with different diabetic nephropathy(DN) stages. Methods 136 elderly patients with T2DM and 50 healthy controls(control groups)were selected. Serum levels of creatinine (CREA) and urea (UREA) and urinary PCX, urinary albumin (UALB) were examined. All T2DM patients were divided into three subgroups according to urinary albumin (UALB): normal albuminuria group, microalbuminuria group and clinical albuminuria group. The urinary excretion of PCX and relative clinical data were compared between the four groups. Results Compared with the control group, the level of PCX was significantly increased in each elderly T2DM subgroup(P<0.01). The levels of PCX in different T2DM subgroups were statistically different(P<0.01). Correlation analysis showed that PCX was positively correlated with proteinuria (r=0.58,P<0.01). Conclusions The detection of urinary PCX is helpful in the early diagnosis of renal injury of T2DM and assessing the degree of renal impairment.

type 2 diabetes mellitus; nephrosis; podocalyxin; albuminuria

210024江苏省南京市，江苏省老年医院检验科

R 587.1

A

10.3969/j.issn.1003-9198.2015.10.020

2014-09-25)