微柱凝胶法诊断新生儿溶血病实验研究

郑家新

微柱凝胶法诊断新生儿溶血病实验研究

郑家新

目的 探讨微柱凝胶法诊断新生儿溶血病的方法及准确度。方法 选取出生的80例疑似溶血病HDN新生儿分别采取MGCT和TCT检测红细胞抗体，比较两种方法准确性以及MGCT3种方法检查结果阳性率差异。结果 本组80例疑似HDN新生儿，经综合分析确诊65例。MGCT检测Se、Sp、Ac、+PV及-PV均显著高于TCT检测，差异有统计学意义(P＜0.05)；MGCT3种方法中IAT和放散试验阳性率均显著高于DAT，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 MGCT诊断HDN敏感度和特异性较强，准确率较高，操作简单，临床应用和推广价值较高。

MGCT；TCT；HDN

新生儿溶血病(HDN)在临床上较为常见，属于红细胞破坏性贫血，能够通过新生儿血清中红细胞抗体检测进行诊断。临床上检测新生儿血清红细胞抗体的传统方法是抗人球蛋白试验(TCT)，但操作较为复杂，结果准确率不能令人满意[1]。江西省景德镇市妇幼保健院自2008年起开始采用微柱凝胶法抗人球蛋白试验(MGCT)，本文选取80例疑似HDN新生儿作为研究对象，探讨微柱凝胶法诊断新生儿溶血病的方法及准确度，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择本院2011年3月～2013年3月出生的新生儿中疑似HDN的80例足月新生儿作为研究对象。其中男51例，女29例，患者日龄24h～7d，平均日龄(4.26±2.48)d。

1.2 方法 新生儿均采取MGCT和TCT检测红细胞抗体。红细胞盐水悬浊液配制：使用生理盐水洗涤新生儿红细胞3次，配成5%红细胞盐水悬浊液备用[2]。

1.2.1 MGCT (1)直接抗人球蛋白试验(DAT)：取红细胞盐水悬浊液10μL加入至1孔抗IgG卡，离心10min后凝集红细胞停留在胶表面或胶中判定为阳性。

(2)间接抗人球蛋白试验(IAT)：取新生儿血清40μL，分别加入8孔抗IgG卡前3孔，并依次加入5%A、B、O试剂红细胞悬液进行观察。

(3)放散试验：使用生理盐水洗涤红细胞3次，加入2份抗A和抗B分型血清充分混合后离心，除去上清液，洗涤3次后加入1/2容积的生理盐水，置入56℃的水浴充分放散抗体。于8孔抗IgG卡后3孔分别加入40μL放散液及5%A、B、O试剂红细胞悬液，使用MGCT配套离心机离心5min后观察[3]。

1.2.2 TCT (1) DAT：取1滴配制好的红细胞盐水悬浊液加入1支洁净试管中，滴入1滴抗人球蛋白血清后摇匀，离心1min后出现凝集为阳性。

(2) IAT：取3支洁净试管，均滴加2滴新生儿血清，逐一滴加1滴5%A、B、O型红细胞盐水悬液。致敏后出现凝集判定为存在相应抗体；若不致敏，洗涤3次加入1滴抗IgG的抗人球蛋白血清，离心后出现凝集为阳性。

(3)放散试验：放散液配制与MGCT相同，取放散液离心后用2%A型和B型试剂红细胞鉴定抗体[4]。

1.3 HDN诊断标准 (1)临床诊断：母婴血型配伍不合；有分娩原因不明的黄疸、水肿儿或贫血史；新生儿娩出后出现肝脾肿大、贫血或黄疸，出生后2～4d黄疸达到高峰，血清胆红素＞205μmol/L。(2)实验室诊断：新生儿直接抗人球蛋白试验、间接抗人球蛋白试验及放散试验中1项或1项以上为阳性[5]。

比较MGCT和TCT敏感度(Se)、特异性(Sp)、准确度(Ac)、阳性预测值(+PV)及阴性预测值(-PV)。

1.4 统计学方法 所有研究数据均使用SPSS21.0处理，计量资料采用“x±s”表示，计数资料采用率（%）表示，分别行t检验和配对χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种方法Se、Sp、Ac、+PV及-PV比较 本组80例疑似HDN新生儿，经综合分析确诊65例。MGCT检测Se、Sp、Ac、+PV及-PV阳性率分别为92.30%、86.67%、91.25%、96.77%、72.22%均显著高于TCT组80.00%、80.00%、78.75%、92.86%、45.83%，差异有统计学意义(χ2=8.672、5.778、9.306、4.325、13.654，均P＜0.05)。

2.2 不同检查方法结果阳性率的对比 IAT和放散试验阳性率分别为53.75%、60.00%均显著高于DAT 25.00%，差异有统计学意义(χ2=13.682、15.339，均P＜0.05)。

3 讨论

临床研究表明红细胞表面多种抗原系统均可引发HDN，以ABO系统和Rh系统最为常见[6-8]。临床检测HDN的常用方法有DAT、IAT以及放散试验等，其中DAT用于检测红细胞是否已经受到不完全抗体致敏，IAT用于检验抗体及其类型，放散试验用于鉴别红细胞上抗原的种类[9]。

由本研究可以看出，传统的TCT操作步骤较为复杂，操作过程中易受到诸多因素的影响，会出现不同程度的偏差。MGCT是一种新型血清检验方法，在微柱凝胶介质中可促进红细胞抗原结合相应抗体，离心凝集的红细胞被筛状凝胶介质阻挡在分子筛内，有效筛除未结合的红细胞[10]。另外，抗人球蛋白、血型抗体直接加入凝胶，无需另操作加入，因而使操作步骤得到了简化，避免了多种人为因素的干扰和误差发生，结果能够形成统一的标准，减少了主观因素的影响。

曾德理采用MGT检测新生儿ABO溶血病的同时，选择抗人球蛋白试管（TAT）作对照。结果显示，121例作Coombs试验对照：MGT检测阳性31例，TAT检测阳性18例；游离抗体试验：MGT阳性61例，TAT阳性为55例；抗体释放试验共有126例作对照：MGT阳性为74例，TAT阳性为59例[11]。该项研究表明，在检测新生儿ABO溶血病方面，MGT阳性检出率高于传统TAT，具有更高的敏感性及特异性。本研究结果显示MGCT敏感度、特异性以及准确率均显著高于TCT(P＜0.05)，假阳性率较低，具有显著临床优势。与上述研究结论具有相似性，总体来看，MGCT较传统TCT诊断HDN更加快捷和准确，临床应用和推广价值较高。

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[2] 王宇宏，刘冰.用微柱凝胶法诊断新生儿溶血病的实验研究[J].中国实验诊断学，2011，15(12)：2018-2020.

[3] 任飞翔,孙素梅.两种方法检测新生儿溶血病“三项试验”的效果比较[J].中国基层医药,2015,8(10)：1493-1495.

[4] 李雪，高宏敏.微柱凝胶法在新生儿溶血病诊断中的应用[J].临床医学，2011，31(1)：93-94.

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[6] 孙小纯,张振林,林伟强，等.微柱凝胶法与凝聚胺法在新生儿ABO溶血病交叉配血试验中的应用效果比较[J].中国基层医药, 2013,20(21)：3299-3300.

[7] 王宇宏，刘冰.用微柱凝胶法诊断新生儿溶血病的实验研究[J].中国实验诊断学,2011，15(12)：2018-2020.

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[10] 曾德理,曾惠琼.新生儿微柱凝胶法交叉配血不合原因分析及处理[J].广西医学,2010,32(7)：839-840.

[11] 曾德理.检测新生儿ABO溶血病的两种方法比较[J].中外健康文摘,2011,8(18)：43-44.

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.35.031

江西 335000 江西省景德镇市妇幼保健院 （郑家新）