穿心莲内酯油水分布系数和溶解度的测定*
2015-03-22龙凯花王春柳臧巧真焦文文
龙凯花 王春柳 臧巧真 唐 涛 焦文文 李 晔●
陕西中医学院(咸阳712046)
·方药纵横·
穿心莲内酯油水分布系数和溶解度的测定*
龙凯花 王春柳△臧巧真 唐 涛 焦文文▲李 晔△●
陕西中医学院(咸阳712046)
目的：测定穿心莲内酯的油水分布系数(P)和溶解度，为体内吸收及新剂型研究提供参考。方法：采用高压液相色谱法测定穿心莲内酯的浓度，以饱和法测定穿心莲内酯的溶解度，采用摇瓶法测定穿心莲内酯的油水分布数。结果：穿心莲内酯溶解度较大的乳化剂为Labrasol、吐温80、RH40，助乳化剂为Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相为Maisine 35-1；穿心莲内酯油水分布系数为(35.6399±0.2953)，lgP为(1.5520±0.0036)。结论：穿心莲内酯为亲脂性化合物，该实验结果可为穿心莲内酯进一步的研究提供依据。
穿心莲内酯为爵床科植物穿心莲的主要有效成分，为二萜类内酯化合物，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效[1]，被誉为天然抗生素药物。
平衡溶解度与表观油水分配系数是新剂型研发中2个重要的理化性质参数，影响药物胃肠道吸收性能，是药效发挥的物质基础[2]。因此，对溶解度与油水分配系数的研究，有助于预测药物在体内的溶解、吸收、分布与转运特点，了解药物经胃肠道与黏膜的吸收情况[3]。本试验测定穿心莲内酯的油水分配系数及在不同新型制剂辅料中的溶解度，可为穿心莲内酯的新剂型开发、工艺设计、体内吸收代谢及生物利用度评价等研究提供参考。
1 仪器与试药 Agilent 1260(四元泵G1311B；自动进样器G1329B；柱温箱G1316A；二极管阵列检测器G4212B；LAB open 色谱数据工作站)；Sartorius BP211D 型十万分之一电子分析天平(德国赛多利斯天平有限公司)；超纯水系统(Millipore，法国)；KQ-250DE型超声波清洗器(昆山超声波仪器有限公司)；SHA-C恒温振荡器(常州国华电器有限公司)；TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂)。
穿心莲内酯原料药(西安天一生物科技有限公司，质量分数≥98.0%，批号:TYM140216)；穿心莲内酯对照品(中国食品药品检定研究院，质量分数> 98.7%，批号:110797-201108)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果 2.1 溶液的制备 水溶液饱和的正辛醇及正辛醇饱和的水溶液：将正辛醇和水等比例混合后，在振荡器上振荡24 h，使其相互饱和，静置分层后，两相分离，分别保存备用。对照品溶液的配制：称取穿心莲内酯2.55 mg 置10 mL 容量瓶中，加入甲醇使溶解并稀释至刻度，即得。用甲醇溶液作空白对照溶液。供试品溶液的配制：称取1mg的穿心莲内酯原料药，用甲醇定容于10mL的容量瓶中，得供试品溶液。
2.2 穿心莲内酯HPLC-DAD测定方法的建立
时间/min Agilent ZORBAX Extend-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(40∶60)，等度洗脱。检测波长：225.0 nm。柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，进样量：10 μL。记录30 min色谱图，见图1。
A 穿心莲内酯对照品溶液；B 穿心莲内酯原料药溶液
2.3 方法学考察 2.3.1 线性关系考察:分别精密吸取对照品混标溶液储备液0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以穿心莲内酯质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得穿心莲内酯回归方程为Y=20.394X-5.3577(R=0.9999)，线性范围为1.275～255 μg·mL-1。
2.3.2 精密度试验:精密吸取对照品溶液10μL，重复进样6次，结果穿心莲内酯峰面积的RSD分别为0.73%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 重复性试验:精密称取同一批穿心莲内酯原料药6份，按2.1项下方法制备供试品溶液，按2.2.2项下色谱条件连续测定6次，结果穿心莲内酯平均质量浓度为0.9955 mg·g-1，即纯度为99.55%，RSD为1.51%，表明该方法重复性良好，穿心莲内酯原料药纯度符合要求。
2.3.4 稳定性试验:取同一样品，按2.1项下方法制备供试品溶液，放置0、2、4、6、8、12和24 h分别进样10 μL后测定，穿心莲内酯的峰面积RSD为0.7829%，表明供试品溶液在24 h以内稳定。
2.3.5 加样回收试验:准确称取已知含量的穿心莲内酯样品适量，加入定量的穿心莲内酯对照品溶液，按2.1项下方法制备供试品溶液，按2.2.2项下色谱条件测定，计算平均加样回收率。穿心莲内酯的加样率分别为100.25 %，见表1。
表1 穿心莲内酯加样回收率结果(n=6)
称样量(mg)样品中含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0．450．44800．50150．9576101．560．520．51770．50151．010498．190．560．55750．50151．0698102．080．450．44800．50150．9529100．630．460．45790．50150．943496．750．470．46790．50150．9811102．27100．252．2676
2.4 穿心莲内酯在自微乳制剂不同辅料中溶解度的测定 取过量的穿心莲内酯分别加入到装有适量的不同新剂型辅料的具塞试管中，搅拌均匀后密封超声30 min，使药物均匀分布，于37 ℃恒温振荡24 h，平衡后，4000 r·min-1离心15 min，取上清液100 μL置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，HPLC法测定溶解度。可知穿心莲内酯在不同新剂型辅料中的溶解度，见表2。
表2 穿心莲内酯在不同介质中的溶解度
种类名称溶解度(mg/mL)名称溶解度(mg/mL)油相EO0．1256±0．08Maisine35⁃10．4498±0．03GTCC0．2661±0．05油酸0．2512±0．04LabrafilM1944CS0．2828±0．01IPM0．1017±0．06乳化剂吐温802．4737±0．28Labrasol3．9448±0．09EL⁃351．4717±0．04F68⁃△RH401．8201±0．59TopcithinSB⁃△PlurololeiqueCC4970．4883±0．14HS⁃155．1599±0．19助乳化剂1，2⁃丙二醇8．7291±0．21PEG⁃4006．9987±0．15乙醇8．5590±0．19TranscutolHP13．400±0．77
注：△“-”：不溶
2.5 穿心莲内酯油水分配系数的测定 2.5.1 油水分配振摇时间的确定:精密称取穿心莲内酯3.0 mg，置10 mL 量瓶中，加入水溶液饱和的正辛醇使溶解并稀释至刻度。从中精密吸取8.0 mL 至25 mL 具塞三角瓶中，加入8.0 mL 正辛醇饱和的水溶液，盖紧塞子，置于振荡器上振荡，分别于振荡0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h后取出，静置30 min，分离出水相，油相经0.45 μm 微孔滤膜过滤，注入液相色谱仪。结果见图2。结果表明，振荡3 h 后，体系基本已达平衡，故选择振摇时间为3 h。
图2 穿心莲内酯在不同振摇时间的油水分配系数
2.5.2 油水分布系数的测定:37℃条件下，穿心莲内酯的不同油水比例下油水分布系数测定结果见表3。计算公式为：P=C油相/C水相=CO/CW。
表3 穿心莲内酯的油/水分布系数(37 ℃)
比例(O/W)C油相(μg/mL)C水相(μg/mL)PlgP1∶1111．57543．129535．65721．55211∶2112．59023．131135．95881．55581∶3113．16063．169135．73281．55311∶9113．82763．229235．25091．5472
3 讨 论 3.1 溶解度 通过对穿心莲内酯在常用的新剂型辅料中溶解度的考察，筛选出溶解度较大的乳化剂为Labrasol、吐温80、RH40，助乳化剂为Transcutol HP、1,2-丙二醇、乙醇，油相为Maisine 35-1，可为穿心莲内酯的新剂型开发等研究提供参考。
3.2 平衡溶解度 采用不同油-水比例测得穿心莲内酯油水分布系数RSD为0.828%，lgP的RSD为0.232%，结果表明，不同油-水比例对油水分布系数的测定影响较小。穿心莲内酯的油水分布系数为(35.6399±0.2953)，lgP为(1.5520±0.0036)，说明药物脂溶性较高。据文献[5]报道，药物最佳lgP值为-1.0 [1] 刘 意,龙晓英,何 琳,等.穿心莲内酯微乳的制备及含量测定[J].中成药, 2010, 32(8):1424-1426. [2] 康虞玲,张 娜, 张立娜,等. 葛根黄豆苷元的溶解度及油水分配系数的研究[J]．中华中医药杂志,2010,25(3):446-448． [3] 陆 彬．药物新剂型和新技术[M]．第2 版．北京:人民卫生出版社, 2005:384． (收稿2014-10-11；修回2014-11-09) * 陕西省科学技术研究发展计划项目(编号2011ZX09401-308-6) 穿心莲内酯 溶解度 油水分布系数 色谱法,高压液相 R94 A 10.3969/j.issn.1000-7369.2015.03.045 △陕西省中医药研究院(西安 710003) ▲西安培华学院(西安 710065) ●通讯作者
