细胞周期素A表达与胃癌预后关系的研究

林建贤， 张俊榕， 谢建伟， 李　平， 郑朝辉， 黄昌明

细胞周期素A表达与胃癌预后关系的研究

林建贤， 张俊榕， 谢建伟， 李平， 郑朝辉， 黄昌明

摘要:目的探讨细胞周期素A(Cyclin A)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤预后的关系。方法回顾性分析125例行胃癌根治术患者的临床病理资料，采用免疫组织化学方法检测组织中Cyclin A的表达情况，对比Cyclin A阳性表达与阴性表达患者临床病理资料的差异，并对患者的预后进行单因素、多因素分析。结果Cyclin A阳性表达者78例，阴性表达者47例。与阴性组比较，阳性组病理分化类型较差、肿瘤直径较大、浸润深度深、淋巴结转移多、TNM分期晚，差别均具有统计学意义(P<0.05)。阳性组患者术后5年生存率为30.8%，明显低于阴性组的72.3%。单因素分析显示，肿瘤大小、Lauren分型、分化类型、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期和Cyclin A表达与患者预后相关。多因素Cox回归分析显示，浸润深度、淋巴结转移和TNM分期是患者预后的独立影响因素。结论Cyclin A阳性表达的胃癌患者，肿瘤恶性度较高，病期较晚，预后较差；Cyclin A可以作为预后判断的辅助指标。

关键词:胃肿瘤； 免疫组织化学； 细胞周期蛋白类/生物合成； 预后

作者单位: 福建医科大学 附属协和医院胃外科，福州350001

细胞周期素A(Cyclin A)参与DNA的合成和复制的调控，是细胞周期必不可少的部分。Cyclin A的过度表达可以引起细胞异常增殖，甚至导致肿瘤的发生、发展[1]。研究表明，Cyclin A在结直肠癌、食管癌、乳腺癌等多种肿瘤中都存在表达异常的情况，与肿瘤大小、分化程度和预后等相关[2-4]。本研究观察Cyclin A在胃癌中的表达情况，探讨其表达的病理学因素及对胃癌患者预后的影响，报道如下。

1对象与方法

1.1对象收集2009年1-12月就诊的胃癌患者125例，男性90例，女性35例，年龄(61.2±10.6)岁(39～88岁)。按UICC-TNM标准(2010)：早期胃癌18例，进展期胃癌107例[5]。根据Lauren分型：肠型61例，弥漫型47例，混合型17例。肿瘤部位：贲门胃底部36例，胃体部22例，幽门部67例。全组术前均无化疗、放疗史。全部病例手术方式及术后病理组织学均按日本胃癌协会《胃癌处理规约》规定施行[6]，其中全胃切除术70例，远端胃大部切除术55例；D1淋巴结清扫16例，D2淋巴结清扫109例。

1.2方法

1.2.1免疫组织化学方法样本以10%中性福尔马林液固定，常规石蜡包埋，切片厚度5 μm。采用Envision两步法，试验步骤按试剂盒说明进行。鼠抗人Cyclin A单克隆抗体(美国Santa Cruz公司)。切片IHC染色后，在普通光学显微镜下观察，细胞核内着棕黄色为阳性染色。20倍镜下，染色最强区域内至少5个视野中≥5%的细胞核着色为阳性表达[7-8]。

1.2.2随访术后随访由专人进行，采用门诊、上门、信件及电话随访等方式进行。除死亡病例外，余术后随访时间均>5年。记录的生存时间为手术时间至末次随访时间,或死亡时间，或随访数据库截止的时间(如失访、死于其他疾病等)。

2结果

2.1Cyclin A 在胃癌组织中的表达Cyclin A表达于细胞核，阳性表达78例(62.4%)，阴性表达47例(37.6%)，具体见图1。

2.2Cyclin A表达与胃癌临床病理参数的关系阳性组与阴性组在Lauren分型、肿瘤大小、分化类型、浸润深度、TNM分期和淋巴结转移方面的差别均具有统计学意义(P<0.01)；而在年龄、性别、肿瘤部位、体质量指数和脉管浸润方面差别均无统计学意义(P>0.05，表1)。

A：正常胃上皮细胞；B：低分化胃癌细胞；C：中分化胃癌细胞；D：高分化胃癌细胞.图1　正常胃上皮细胞和不同分化类型胃癌细胞Cyclin A染色(Envision　×400)Fig 1　Expression of cyclin A in normal gastric epithelial cell and different types of gastric cancer cells(Envision　×400)

Tab 1Relationship between the expression of Cyclin A and clinicopathologic features for gastric cancer

临床病理参数阳性组阴性组n7847年龄/岁61.7±10.460.5±10.9性别 男53(67.9)37(78.7) 女25(32.1)10(21.3)肿瘤部位 上部22(28.2)14(29.8) 中部12(15.4)10(21.3) 下部44(56.4)23(48.9)体质量指数/(kg·m-2)21.7±3.022.4±3.2Lauren分型☆ 肠型28(35.9)33(70.2) 弥漫型39(50.0)8(17.0) 混合型11(14.1)6(12.8)d肿瘤/cm☆5.9±2.44.2±1.9分化类型☆ 分化型35(44.9)38(80.9) 未分化型43(55.1)9(19.1)脉管浸润 是6(7.7)3(6.4) 否72(92.3)44(93.6)浸润深度☆ T13(3.8)15(31.9) T27(9.0)7(14.9) T30(0)1(2.1) T4a68(87.2)24(51.1)淋巴结转移☆ N013(16.7)22(46.8) N112(15.4)8(17.0) N214(17.9)5(10.6) N339(50.0)12(25.5)TNM分期☆ Ⅰ6(7.7)20(42.6) Ⅱ8(10.3)9(19.1) Ⅲ63(80.8)18(38.3)

表中数据除例数、年龄、体质量指数和肿瘤直径外，余数据为n(%).2组间比较，☆：P<0.01.

2.3随访结果全组患者122例(97.6%)获得随访，随访时间3～72月。术后5年生存率阳性组为30.8%，阴性组为72.3%，2组差别具有统计学意义(P<0.05，图2)。

图2　Cyclin A表达与胃癌患者预后Kaplan-Meier生存曲线Fig 2　Kaplan-Meier method of overall survival rates in patients with gastric cancer

2.4临床病理因素影响患者预后的单因素分析肿瘤大小(P=0.004)及Lauren分型、分化类型、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和Cyclin A表达与否(均为P<0.001)与患者预后密切相关(表2)。

2.5影响患者预后的多因素分析将肿瘤大小、Lauren分型、分化类型、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期和Cyclin A表达用Cox比例风险模型进行多因素预后分析显示，肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期(P<0.05)是影响患者预后的独立危险因素(表3)。

3讨论

胃癌是我国主要恶性肿瘤之一，死亡率高居前列，福建省就是胃癌的高发地区之一[9]。迄今为止，胃癌的病因和发病机制尚未完全阐明，肿瘤的转移和扩散是其预后不良的主要原因。尽管胃癌的综合治疗措施不断发展完善，但仍未能获得满意效果。细胞周期的控制点是细胞周期循序进展的关键部位，决定着DNA复制和细胞分裂的起始与完成。在大多数肿瘤细胞中都存在着某种或多种细胞周期调控因子的失衡，或多种癌基因、抑癌基因发生突变，最终导致细胞周期的紊乱、细胞的不正常生长和增生，乃至肿瘤的发生[10]。

表2全组胃癌患者预后单因素分析

Tab 2Univariate analysis of variables associated with survival in patients with gastric cancer

临床病理因素n5年生存率(%)性别 男9050.0 女3537.1年龄/岁 ≤605848.3 >606744.8d肿瘤/cm☆ ≤57755.8 >54831.2肿瘤部位 胃上部3661.1 胃中部2254.5 胃下部6735.8Lauren分型☆ 肠型6162.3 弥漫型4723.4 混合型1752.9分化类型☆ 分化型7361.6 未分化型5225.0脉管浸润 是933.3 否11647.4浸润深度☆ T118100 T21464.3 T31100 T4a9232.6淋巴结转移☆ N03585.7 N12065.0 N21936.8 N35115.7TNM分期☆ Ⅰ2696.2 Ⅱ1758.8 Ⅲ8228.0CyclinA表达☆ 阳性7830.8 阴性4772.3

同指标内比较，☆：P<0.01.

Cyclin A由432个氨基酸组成，是细胞周期G2/M期限制点重要的正性调控因子，于G1晚期合成，在S期逐渐增加，并在G2/M期达到高峰，于M中晚期降解，参与DNA合成、复制，促进细胞进入有丝分裂，它的正常表达是保证细胞S期、G2/M期进程顺利完成的主要因子。早期Paterlini等的研究发现，血液系统肿瘤Cyclin A mRNA和蛋白质的表达水平与细胞处于S期和G2/M期的比例正相关，认为它可以作为肿瘤增殖的指标之一[11]。随后研究发现，Cyclin A基因扩增及蛋白的过表达与人类许多肿瘤密切相关，肿瘤组织中Cyclin A的表达水平明显高于非肿瘤组织[12]。Baldini等对乳腺癌的研究发现，45.3%的乳腺癌患者存在Cyclin A过表达，且Cyclin A过表达的肿瘤患者无病生存期明显短于Cyclin A低表达的患者[2]。Nozoe等的研究则显示，Cyclin A在结直肠癌的肿瘤组织中过表达是预后不良的独立危险因素[3]。Sugai等报道，在胃型和混合型胃癌中，Cyclin A的表达量明显高于肠型患者，且其表达量与预后呈负相关[13]。本研究结果显示，在胃癌组织中Cyclin A阳性表达率较高(62.4%)，且Cyclin A阳性表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关，说明Cyclin A阳性表达患者肿瘤恶性度较高，病期较晚，提示Cyclin A的过度表达可以引起细胞增殖，促进胃肿瘤的发生、发展。

目前Cyclin A与肿瘤患者预后的关系尚存争议。在食管癌、非小细胞肺癌等恶性肿瘤中，Cyclin A都被当作是影响预后的一个关键因素，Cyclin A高表达的患者，5年生存率低，预后较差[14-15]。Mrena等的研究显示，55%胃癌标本中免疫组织化学Cyclin A呈高表达，其与高龄、病期较晚、胃上部癌和肠型密切相关，预后分析显示，Cyclin A高表达者预后较差，是影响患者预后的独立危险因素之一[8]。复习文献发现，对比不同Cox比例风险模型多因素分析结果较为困难，因为不同的报道往往包括不同的参数及病例组别等。在本研究中，虽然Cyclin A的阳性表达患者预后明显低于阴性表达患者，差别具有统计学意义，但是多因素分析显示，Cyclin A并非本组患者预后的独立危险因素。但这并不说明Cyclin A这个变量不重要，而是表明其可能是影响预后的间接因素。本研究发现，Cyclin A阳性表达率较高，且阳性表达患者肿瘤分化程度较差，肿瘤病期较晚，预后亦较差，其与胃癌患者发生、发展的机制尚需进一步研究探索。

表3　影响患者预后的多因素分析

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(编辑：何佳凤)

Relationship between the Expression of Cyclin A and

Prognosis in Patients with Gastric Cancer

LIN Jianxian, ZHANG Junrong, XIE Jianwei, LI Ping, ZHENG Chaohui, HUANG Changming

Department of Gastric Surgery, Fujian Medical University Union Hospital, Fuzhou 350001, China

ABSTRACT:ObjectiveTo investigate the expression of Cyclin A in gastric cancer and to assess the correlation of Cyclin A to prognosis of patients gastric cancer.Methods125 cases of gastric cancer patients at Fujian Medical University Union Hospital were analyzed retrospectively.We examined the expression of Cyclin A by immunohistochemistry.The survival rate was calculated by the Kaplan-Meier

method, the Log-rank test and Cox’s proportional hazards regression model using SPSS 16.0.ResultsThere were 78 patients (62.4%) with the positive expression level of Cyclin A in gastric cancer.Compared with the negative group, cases in the positive group have poor pathologic types, larger tumor, and more advanced cancer.The 5-year survival rate in patients with positive and negative Cyclin A expression was 30.8% and 72.3%, respectively, with the difference being statistically significant (P<0.05).Univariate survival analysis showed that the tumor size, Lauren types, pathologic types, depth of tumor invasion, lymph node metastasis, TNM stage, and Cyclin A were associated with the prognosis.Multivariate analysis demonstrated that depth of tumor invasion, lymph node metastasis, and TNM stage were independent risk factors for the prognosis (P<0.05).ConclusionPatients with positive expression of Cyclin A are prone to poor pathologic changes andadvanced cancer, leading to worse outcomes.Cyclin A may be identified as a biomarker for predicting the prognosis of gastric cancer.

KEY WORDS:stomach neoplasms; immunohistochemistry; cyclins/biosynthesis; prognosis

通讯作者:黄昌明. Email:hcmlr2002@163.com

作者简介:林建贤(1984-)，男，主治医师，医学硕士

基金项目:国家自然科学基金(81441123)；国家临床重点专科建设基金([2012]649)；福建省卫生计生委青年科研课题(2014-1-48)

收稿日期:2015-06-23

中图分类号:R341； R341.31； R349.12； R735.2； R977.6

文献标志码:A

文章编号:1672-4194(2015)05-0284-05