尿激酶型纤溶酶原激活剂和糖原合成酶激酶-3β磷酸化在胃癌组织中的表达及临床意义

浦　勇

江南大学附属无锡市第四人民医院,江苏省无锡市　214000

论著

尿激酶型纤溶酶原激活剂和糖原合成酶激酶-3β磷酸化在胃癌组织中的表达及临床意义

浦勇

江南大学附属无锡市第四人民医院,江苏省无锡市214000

摘要目的：探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)和糖原合成酶激酶-3β磷酸化(Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β，P-GSK3β)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法：选取39例胃癌组织样本、31例萎缩性胃炎组织样本及25例癌旁正常组织样本。采用免疫组化法检测组织中uPA与P-GSK3β阳性表达。分析uPA与P-GSK3β表达与胃癌临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中 uPA与P-GSK3β阳性表达率显著高于癌旁正常胃组织及萎缩性胃炎组织，组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)；癌旁正常胃组织及萎缩性胃炎组织的uPA与P-GSK3β阳性表达率比较无统计学差异(P>0.05)。胃癌组织中uPA和P-GSK3β阳性表达与患者性别、年龄无关(P>0.05)，与临床TNM分期、病理分级及是否伴发淋巴结转移有关(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示，胃癌组织中uPA和P-GSK3β阳性表达呈正相关(P<0.05)。结论：uPA与P-GSK3β在胃癌组织中呈高表达，并与胃癌临床分期、病理分级及淋巴结转移密切相关。

关键词尿激酶型纤溶酶原激活剂糖原合成酶激酶-3β磷酸化胃癌

The Expression and Clinical Significance of Urokinase-type Plasminogen Activator and Phosphorylation-glycogen Synthase Kinase 3β on Gastric Cancer Tissue

PU Yong.AffiliatedWuxiFourthPeople’sHospitalofJiangnanUniversity,WuxiCity，JiangsuProvince214000

ABSTRACT Objective:To evaluate the expression and clinical significance of urokinase-type plasminogen activator and phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β on gastric cancer tissue.Methods:Selected 39 tissue samples of gastric cancer, 31 tissue samples of atrophic gastritis, and 25 tissue samples of carcinoma side normal tissue.Immunohistochemistry was used to examine the positive expression of uPA and P-GSK3β.Analyzed the relationship between gastric cancer pathological features and expression of uPA and P-GSK3β.Results:The positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue was significantly higher than atrophic gastritis tissue and carcinoma side normal tissue, the difference showed statistically significant(P<0.05).The positive expression of uPA and P-GSK3β of atrophic gastritis tissue and carcinoma side normal tissue were no statistically different(P>0.05).The positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue were no correlated with age and gender(P>0.05),but were closely correlated with the TNM,differentiation and lymph nodes metastasis(P<0.05). Spearman analysis showed that, the positive expression of uPA and P-GSK3β of gastric cancer tissue had positive correlation(P<0.05).Conclusion:The uPA and P-GSK3β highly expression in gastric cancer tissues, and closely relat to the clinical stage, pathological grading and lymph node metastasis.

KEY WORDS Urokinase-type plasminogen activator,Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β,Gastric cancer

恶性肿瘤的发生和发展与多种促癌基因和抑癌基因表达异常密切相关。尿激酶型纤溶酶原激活剂(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)是一种丝氨酸蛋白酶，其介导的纤维蛋白溶解系统与恶性肿瘤细胞的增殖及侵袭有关[1]。糖原合成酶激酶-3β 磷酸化(Phosphorylation-glycogen synthase kinase 3β，P-GSK3β)是GSK3β经N端或C端磷酸化得到的产物，具有促进恶性肿瘤浸润、转移的作用[2]。uPA与P-GSK3β在大肠癌[3]、卵巢癌[4]及子宫内膜癌[5]等多种癌组织中呈强表达阳性已得到证实，但其在胃癌组织中的表达情况尚未明确。本研究通过检测癌旁正常胃组织、萎缩性胃炎组织及胃癌组织中uPA与P-GSK3β表达情况，分析uPA与P-GSK3β表达与胃癌临床病理特征的关系，探讨二者在胃癌发生、发展中的作用，以期为临床诊疗提供科学依据。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年1月-2015年1月我院收治的胃癌患者组织样本共39例为研究对象。患者取样前均未接受放化疗治疗。39例患者中，男24例，女15例；年龄38~77岁，平均年龄(62.8±9.5)岁；病理分级：高分化4例，中分化10例，低分化10例，未分化15例；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期7例，Ⅲ期13例，Ⅳ期14例；淋巴结转移：有28例，无11例。取同期经病理确诊为萎缩性胃炎的胃组织标本31例。取癌旁(距肿瘤边缘>5cm)正常组织标本25例为正常对照。

1.2试剂uPA与P-GSK3β抗体购于Santa公司；DAB染色试剂盒与S-P免疫组织化学染色试剂盒购于南京建成生物有限公司。

1.3免疫组化按S-P免疫组织化学染色试剂盒说明书进行免疫组化操作，检测胃组织中uPA与P-GSK3β阳性表达。组织切片以3%H2O2室温孵育10min，抗原热修复，依次加入一抗、二抗及辣根过氧化物酶，DAB显色，苏木精染色，梯度乙醇依次脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察阳性表达。取已知切片为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。

1.4结果判定以细胞质内出现棕黄色颗粒定义为uPA和P-GSK3β阳性表达。按细胞质内染色强度计分：0分：细胞质内无显色；1分：细胞质内出现浅黄色颗粒；2分：细胞质内出现棕黄色颗粒；3分：细胞质内出现棕褐色颗粒。按阳性细胞比例计分(200倍视野下，计数1 000个细胞)：0分：阳性细胞<10%；1分：阳性细胞比例为10%~30%；2分：阳性细胞比例为31%~60%；3分：阳性细胞比例≥61%；染色强度计分乘以阳性细胞比例计分，所得分值为0分判定为阴性，所得分值≥1分判定为阳性。所有切片均由2位资深病理医师逐一观察、评分。

1.5统计学方法采用SPSS19.0统计软件，uPA和P-GSK3β阳性表达率用百分数(%)表示，组间比较用χ2检验，uPA与P-GSK3β阳性表达率相关性分析用Spearman相关分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1uPA与P-GSK3β在癌旁正常胃组织、萎缩性胃炎及胃癌组织中的表达胃癌组织中 uPA与P-GSK3β阳性表达率显著高于癌旁正常胃组织及萎缩性胃炎组织，组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)；癌旁正常胃组织及萎缩性胃炎组织的uPA与P-GSK3β阳性表达率比较无统计学差异(P>0.05)，见表1。

表1　uPA与P-GSK3β在正常胃组织、萎缩性胃炎

注：与正常胃组织比较，*P<0.05；与萎缩性胃炎比较，#P<0.05。

2.2uPA和P-GSK3β与胃癌组织病理特征的关系在胃癌组织中，uPA和P-GSK3β阳性表达与患者性别、年龄无关(P>0.05)；与临床病理分期、病理分级及是否伴发淋巴结转移有关(P<0.05)，见表2。

表2　uPA和P-GSK3β与胃癌组织病理特征的关系

2.3uPA和P-GSK3β表达的相关性分析Spearman相关分析结果显示，胃癌组织中uPA和P-GSK3β阳性表达呈正相关(r=0.379,P=0.001)。

3讨论

侵袭和转移是恶性肿瘤最重要的生物学特征，肿瘤细胞所分泌的多种蛋白水解酶可通过水解细胞外基质和基底膜为肿瘤细胞侵袭和转移提供先决条件[6]。uPA作为丝氨酸蛋白酶，表达定位于细胞胞浆中，可与细胞表面受体相结合，激活纤维蛋白酶，从而参与机体多种生理病理过程[7]。uPA在组织中的过表达，可通过直接或间接作用降解细胞外基质，从而为肿瘤细胞浸润和转移提供病理基础[8]。本研究显示，胃癌组织中uPA阳性表达率最高，其次为萎缩性胃炎及癌旁正常组织，提示uPA参与胃癌的发生与发展，并对胃组织癌变过程起促进作用。本研究发现uPA阳性表达与临床病理分期、病理分级及是否伴发淋巴结转移有关，其结果与左玉如等[9]研究结果一致。病理分期越高、组织分化程度越低的胃癌组织，其uPA阳性表达率越高，提示uPA与肿瘤浸润能力及分化程度密切相关，分析其原因可能与uPA的酶活性有关。此外，伴发淋巴结转移者的胃癌组织uPA阳性表达也显著增高，提示uPA在胃癌细胞侵袭和转移中发挥了一定作用[10,11]。

GSK3β是多功能丝氨酸/苏氨酸激酶GSK3的一个亚型，在人体内多数组织、细胞内均有广泛表达，其活性由不同位点的磷酸化状态调节，当发生磷酸化时GSK3β活性则大大降低[12]。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase，MAPK)家族中的p38MAPK可通过使GSK3β的C端或N端磷酸化，使GSK3β失活，导致Wnt通路中的管家基因β-catenin稳定性发生改变，抑制肿瘤细胞间粘附能力，增强肿瘤细胞-基质间粘附能力，进而促进恶性肿瘤细胞增殖与侵袭[13]。故认为，磷酸化后的GSK3β，即P-GSK3β可能对恶性肿瘤的发生与发展起到促进作用[14]。本研究显示，P-GSK3β在癌旁正常胃组织中并不表达，在萎缩性胃炎中弱表达，在胃癌组织中呈高表达。此外，P-GSK3β阳性表达与胃癌临床病理分期、病理分级及是否伴发淋巴结转移有关，提示P-GSK3β与胃癌的浸润、分化及转移能力密切相关[15]。

本研究证实，胃癌组织中uPA与P-GSK3β表达呈明显正相关，其机制可能为MAPK通路中p38活化导致多种转录因子磷酸化，引起uPA基因转录增强，而uPA与P-GSK3β可能通过p38发生交互作用，共同促进胃癌进展。

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(编辑雅文)

收稿日期2015-07-14

中图分类号：R735.2

文献标识码：A

文章编号：1001-7585(2015)23-3180-03