催情散质量标准研究

张旭，李树纲，张蕾，巨福星

(甘肃省兽药饲料监察所， 兰州 730030)



催情散质量标准研究

张旭，李树纲，张蕾，巨福星*

(甘肃省兽药饲料监察所， 兰州 730030)

为提高和完善催情散的质量标准，增加了方中君药淫羊藿的薄层鉴别方法，并采用HPLC法测定淫羊藿苷含量。薄层色谱斑点清晰，阴性无干扰。淫羊藿苷对照品浓度在0.0510～0.2550 mg/mL (r=0.9992，n=5)范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率为99.24%，RSD为0.29%。该方法简便、准确、重现性好、精密度高，可作为催情散的质量控制方法。

催情散；质量标准；薄层鉴别；含量测定；高效液相色谱

催情散收载于《中华人民共和国兽药典》2010年版二部，由淫羊藿、阳起石(酒淬)、当归、香附、益母草、菟丝子六味中药加工制成的中兽药散剂[1]。具有补肾壮阳、催情促孕的功效，临床常用于母猪不发情，家畜劳伤乏情等症[2]，研究表明能增强种公畜性机能和精子活力，显著提高配种质量[3]。且成本较低，使用方便，经济效益可观，具有很好的推广和应用前景。目前催情散的质量标准较为简单，仅有各药味的显微鉴别，无有效成分的薄层鉴别项和含量测定项，因此现有标准已不能有效控制目前市场上催情散的质量。为了更好的控制药品质量，本实验对其质量标准进行了研究，增加了淫羊藿的薄层鉴别，并采用 HPLC法测定了淫羊藿苷的含量，经方法学考察，均符合有关规定，为进一步完善催情散的质量标准提供了试验基础。

1 材料

1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱，配DAD检测器， METTLER AE240电子天平，BX8200HP超声波清洗器；硅胶H板(青岛海洋化工有限公司)。

1.2 试剂与药材 淫羊藿对照药材(121632-201101)、淫羊藿苷对照品(110737-200415)，中国食品药品检定研究院提供；催情散(批号：150610、150616、150623)，中国农业科学院中兽医研究所药厂提供；阴性样品(自制)。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法及结果

2.1 淫羊藿的薄层鉴别 取催情散粉末3.2 g，加乙醇20 mL，温浸超声15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿对照药材0.4 g，同法制成对照药材溶液。再取缺淫羊藿的阴性对照样品，同供试品方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上， 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干。喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下(365 nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰(图1)。

1．阴性对照溶液；2．淫羊藿苷对照品；3．淫羊藿对照药材；4．供试品(批号150610)；5．供试品(批号150616)；6．供试品(批号150623)图1 催情散中淫羊藿的薄层鉴别图

2.2 含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷0.5 mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取上述储备溶液3 mL置10 mL量瓶中，用甲醇定容，摇匀，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取催情散1.6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，称定重量，超声处理1 h，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺淫羊藿阴性对照样品同法制备得阴性对照溶液。

2.2.4 色谱条件 选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6 mm × 150 mm, 5 μm)；以乙腈-水(30∶70)为流动相；检测波长270 nm；流速1.0 mL/min；柱温30 ℃；进样10 μL，理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500。

2.2.5 专属性考察 分别取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，在2.2.4色谱条件下进样，结果见图2～图4。供试品色谱中，呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰。阴性样品色谱中，未呈现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰，试验结果表明阴性样品无干扰，该方法具有专属性。

图2 阴性对照溶液色谱图

图3 供试品溶液色谱图

图4 淫羊藿苷对照品溶液(0.1530 mg/mL)色谱图

2.2.6 线性关系考察 分别精密吸取淫羊藿苷对照品储备液1、2、3、10、5 mL分别置10、10、10、25、10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得各浓度对照品溶液。按2.2.4项色谱条件测定，记录峰面积，以对照品的浓度为横坐标(x)，以峰面积积分值为纵坐标(y)，绘制标准曲线，回归方程为y=14378x-13.1，r=0.9992，结果表明淫羊藿苷对照品浓度在0.0510～0.2550 mg/mL范围内呈现良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 精密吸取浓度为0.1530 mg/mL的对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录淫羊藿苷峰面积，RSD为0.77%，结果表明方法的精密度良好。

2.2.8 重复性试验 取同一催情散样品，按2.2.2项下方法平行制备供试品溶液6份，按2.2.4项色谱条件进样分析，记录淫羊藿苷峰面积，RSD为0.80%。结果表明本法测定淫羊藿苷含量的重复性良好。

2.2.9 稳定性试验 取同一催情散样品，按2.2.2项下方法制备供试品溶液。分别在0、1、2、4、6、8、10、12 h按2.2.4项色谱条件分别进样，记录峰面积，计算RSD为0.92%，表明催情散供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.1.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的催情散样品1.6 g，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品储备溶液(0.510 mg/mL)3.0 mL，按2.2.2项下方法处理后，测定并计算回收率，结果见表1。可以看出，催情散的添加平均回收率为99.24%，表明该方法回收率较好，准确度高。

表1 加样回收率试验结果

2.1.11 样品含量测定 取3批样品，按2.2.2项下方法制备供试品溶液。按2.2.4项下色谱条件进样分析，记录峰面积值，依照标准曲线法计算样品中淫羊藿苷含量，结果见表2。批号为150610、150616、150623的三批催情散中淫羊藿苷的含量为0.9 mg/g。

表2 含量测定结果

3 讨论

方中淫羊藿和阳起石补肾壮阳，为君药。淫羊藿系小檗科植物淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥叶。在我国分布较为广泛，是补肾壮阳的常用药物。淫羊藿中主要有效活性成分是多糖和黄酮类化合物，而淫羊藿苷在总黄酮中含量最为丰富，可增强性腺功能，具有“壮阳”[4]以及调节机体免疫功能的功效[5]。为了更有效控制催情散的质量，本研究在鉴别中增加淫羊藿的薄层色谱法，采用高效液相色谱法对该方中的淫羊藿苷进行定量测定。

淫羊藿的TLC鉴别中，实验条件、展开系统参照《中国兽药典》“淫羊藿”鉴别(2)项下薄层鉴别方法[1]，经多次试验表明，“温浸超声”的提取效果较“温浸”提取的效果好，且节省时间，超声5 min、10 min、15 min、20 min，考察超声时间对实验的影响，结果表明，超声15 min后淫羊藿苷已提取基本完全，为了保证淫羊藿苷提取率并结合工作效率，综合选择超声处理时间为15 min。

阴性对照样品色谱中，在与淫羊藿苷对照品色谱相应的位置上，有较浅的不同颜色的斑点(图1)，考虑阴性样品有其他成分的干扰；供试品色谱中，在与淫羊藿对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性无干扰，专属性强。故淫羊藿的TLC鉴别中，只采用淫羊藿药材对照，未采用淫羊藿苷对照。

采用 DAD 在 200～400 nm 进行全波长扫描，淫羊藿苷对照品在270 nm波长处有最大吸收，故采用270 nm作为检测波长。分别用25∶75、30∶70、35∶65比例的乙腈-水系统进行了方法考察，当流动相为乙腈-水(30∶70)时最佳，使得样品中淫羊藿苷与其他组分的分离效果最好，且保留时间适宜。

经测定，该3批样品的淫羊藿苷含量为0.9 mg/g。淫羊藿相关的报道和文献很多，不同的产地、不同的品种含量不尽相同，即使相同产地其含量也有一定的差别[6-7]，故需收集大量样品进行试验，才能制定合理的含量限度。

[1] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典二〇一〇年版(二部)[S].

[2] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典兽药使用指南中药卷二〇一〇年版(中药卷)[S].

[3] 孔伟，李刚，马致远，等.催情散治疗种公牛性欲降低的效果观察[J].中兽医学杂志，2014,8: 7.

[4] 张森，谭建华，伊鹏霏，等.淫羊藿苷对生殖系统影响研究进展 [J].中兽医医药杂志，2011,30(3): 76-77.

[5] 刘雪琴，何燕.淫羊藿苷药理作用研究进展 [J].中国中医药科技，2012, 19 (4) : 379-380, 382.

[6] 史万忠, 徐德生，刘力，等.30批市售淫羊藿的质量分析 [J].中国实验方剂学杂志，2006, 12 (7): 6-7.

[7] 徐玲玲，黄礼杰，顾国献.不同产地和品种淫羊藿品种中活性黄酮类成分分析及资源研究[J].中国药科大学学报，2010, 41(2): 146-150.

(编辑：李文平)

Studies on Quality Standard of Cuiqing San

ZHANG Xu, LI Shu-gang, ZHANG Lei, JU Fu-xing*

(GansuInstituteofVeterinaryDrugandFeedInspection,Lanzhou730030,China)

To improve quality standard for Cuiqing San，Herba Epimedii was identified by TLC, which is the Monarch Drug of Cuiqing San, and icariin was determined by HPLC.The TLC spots of these traditional Chinese medicinal materials were fairly clear and the blank test showed no interference.The linear ranges were 0.0510～0.2250 mg/mL for icariin (r=0.9992,n=5).The average recoveries rates were 99.24% withRSD0.29%.The methods are available with a good reproducibility and can control the quality of Cuiqing San effectively.

Cuiqing San；Quality Standard；TLC； Determination；HPLC

张旭，从事兽药检测工作。E-mail: wwwzx0099@126.com

2015-09-10

A

1002-1280 (2015) 11-0038-04

S853.76