CRABPⅡ、E-FABP和Ki-67在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义

吴化雷，包福德，王继文

(深圳市宝安区石岩人民医院外四科，广东 深圳 518000)



CRABPⅡ、E-FABP和Ki-67在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义

吴化雷※，包福德，王继文

(深圳市宝安区石岩人民医院外四科，广东 深圳 518000)

摘要：目的探讨细胞视黄酸结合蛋白(CRABP)Ⅱ、表皮型脂肪酸结合蛋白(E-FABP)及Ki-67在乳腺浸润性导管癌(IDC)组织中的表达及临床意义。方法收集2009年1月至2013年1月深圳市宝安区石岩人民医院收治的112例IDC患者的临床资料，患者均采用手术切除，并对IDC组织进行免疫组织化学染色，观察IDC组织中CRABPⅡ、E-FABP及Ki-67的表达情况。结果CRABPⅡ在Ki-67阴性表达组的阳性表达率高于Ki-67阳性表达组(67.6%比 19.2%，χ2=24.761，P=0.000)；E-FABP在K-i67阳性表达组中的阳性表达率高于Ki-67阴性表达组(84.6%比35.3%，χ2=27.245，P=0.000)。IDC组织中CRABPⅡ表达与Ki-67表达呈负相关(rspan=-0.467，P=0.000)，E-FABP表达与Ki-67表达呈正相关(rspan=0.916，P=0.000)。E-FABP与Ki-67共同表达与肿瘤大小、组织学分级、IDC淋巴转移有关，与患者年龄、TNM分期均无关。结论CRABPⅡ和E-FABP可能参与了肿瘤细胞的增殖调控，CRABPⅡ对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，E-FABP对肿瘤细胞的增殖具有促进作用，E-FABP和Ki-67对IDC的进展具有协同作用，两者的共同表达对IDC转移的判断具有一定的临床价值。

关键词：乳腺浸润性导管癌；细胞视黄酸结合蛋白Ⅱ；表皮型脂肪酸结合蛋白；Ki-67

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，且近年来我国发病逐年增加，给女性的生命和健康带来严重威胁。乳腺癌最常见的病理类型是浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma，IDC)[1]。研究显示，细胞视黄酸结合蛋白(cellular retinoic acid binding protein，CRABP)Ⅱ和表皮型脂肪酸结合蛋白(epidermal type fatty acid binding protein，E-FABP)是维甲酸转运蛋白，在IDC肿瘤细胞的增殖和凋亡过程中发挥重要作用[2]。Ki-67是增殖细胞核抗原，与细胞周期有关，可反映肿瘤细胞的增殖活性，IDC的发生、发展与细胞的增殖密不可分。本研究通过观察IDC组织中3种蛋白的含量，探讨CRABPⅡ、E-FABP、Ki-67的相关性及其在IDC发生、发展中的作用。

1资料与方法

1.1一般资料收集2009年1月至2013年1月深圳市宝安区石岩人民医院收治的112例IDC患者的临床资料，患者均为女性，均采用手术切除，术前均未行放疗、化疗或内分泌治疗，术后病理证实为IDC。年龄36～74岁，平均(49±6)岁，其中年龄≥50岁者65例、年龄<50岁者47例；肿瘤直径≥2 cm 73例，<2 cm 39例；有淋巴转移89例，无淋巴转移23例；国际抗癌联盟TNM分期：Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分别为15例、47例和50例；世界卫生组织乳腺病理组织分级：Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级分别为11例、55例和46例。患者均有完整的临床资料和病理学资料。

1.2试剂与方法鼠抗人E-FABP 单克隆抗体(批号：YM10168)和羊抗人CRABPⅡ多克隆抗体(批号：08169H6)购自北京金桥生物制品公司，Ki-67鼠抗人单克隆抗体(批号：101220485D)购自福建迈新生物技术公司，所有标本由甲醛固定，石蜡包埋，并作4 μm连续连续切片，采用免疫组织化学染色，CRABPⅡ、E-FABP一抗工作液浓度为1∶200，阳性对照分别采用人健康前列腺组织和银屑病皮肤组织，Ki-67采用 EnVision 二步法作免疫组织化学染色，阳性对照应用已知的阳性切片，CRABPⅡ、E-FABP、Ki-67均应用磷酸盐缓冲液替代一抗作为阴性对照，严格按照试剂说明书进行操作。

1.3结果判读CRABPⅡ、E-FABP以细胞质和(或)细胞核内呈现黄色、棕黄、黄褐色颗粒为阳性判断，并按照细胞着色程度进行评分：0分，无着色；1分，黄色；2分，棕黄色；3分，黄褐色。高倍镜下随机选择5个视野，分别计算每个视野中阳性细胞所占百分率，取平均值，并按照阳性细胞所占百分率进行评分：0分，≤5%；1分，>5%~25%；2分，>25%~50%；3分，>50%~75%；4分，>75%。两项评分乘积作为总积分，并据此进行阳性判断[3]：阴性(-)，总积分0分；弱阳性(+)，总积分1～4分；中等强度阳性(++)，总积分5～8分；强阳性(+++)，总积分≥9分。细胞Ki-67着色程度评分同上，阳性细胞所占百分率≤14%为0分、15%～25%为1分、26%～50%为2分、>50%为3分。着色程度评分与阳性细胞所占百分率评分之和为总积分，根据总评分进行阳性判断[4]：阴性(-)，总积分0～1分；弱阳性(+)，总积分为2分；中等强度阳性(++)， 总积分3～4分；强阳性(+++)，总积分5～6分。三者均以(-)为阴性，(+)、(++)和(+++)为阳性。

1.4统计学方法应用SPSS 19.0统计软件进行统计分析。计数资料比较采用χ2检验，相关性分析应用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1IDC组织中CRABPⅡ、E-FABP表达与Ki-67表达的关系112例IDC组织标本中，Ki-67阳性表达78例，阴性表达34例。CRABPⅡ在Ki-67阴性表达组的阳性表达率高于Ki-67 阳性表达组(χ2=24.761，P=0.000)；E-FABP在Ki-67阳性表达组中的阳性表达率高于Ki-67阴性表达组(χ2=27.245，P=0.000)，见表1。

表1　IDC组织中CRABPⅡ、E-FABP

IDC：浸润性导管癌；CRABPⅡ：细胞视黄酸结合蛋白Ⅱ；E-FABP：表皮型脂肪酸结合蛋白；a与Ki-67阳性表达组比较,P<0.01

2.2IDC组织中CRABPⅡ、E-FABP表达与Ki-67表达的相关性IDC组织中CRABPⅡ表达与Ki-67表达呈负相关(rs=-0.467，P=0.000)，E-FABP表达与Ki-67表达呈正相关(rs=0.916，P=0.000)，见表2。

表2　IDC组织中CRABPⅡ、E-FABP

IDC：浸润性导管癌；CRABPⅡ：细胞视黄酸结合蛋白Ⅱ；E-FABP：表皮型脂肪酸结合蛋白

2.3IDC组织中E-FABP与Ki-67共同表达与临床病理指标的关系112例IDC组织标本中， E-FABP与Ki-67均为阳性表达63例，均为阴性表达22例，E-FABP与Ki-67共同表达与IDC肿瘤直径、组织分级和淋巴转移有关，与患者年龄、TNM分期均无关，见表3。

表3　IDC组织中E-FABP与Ki67共同

IDC：浸润性导管癌；E-FABP：表皮型脂肪酸结合蛋白

3讨论

E-FABP是一种来源于表皮细胞的低相对分子质量胞质蛋白，由135个氨基酸组成，分布于机体多种组织中，可调节组织细胞对长链脂肪酸的摄取、转运及代谢活动[5]，CRABP Ⅱ是调节维甲酸及其受体的重要物质，与维甲酸的转录活性有关。E-FABP和CRABP Ⅱ 均为维甲酸的转运蛋白，CRABP Ⅱ 将维甲酸转运至细胞核后，在维甲酸受体的作用下，发挥

维甲酸对细胞分化的调节作用和细胞周期的调控作用，从而诱导细胞的凋亡，对细胞的生长分裂发挥抑制作用[6]。国内外有研究显示，卵巢癌组织中CRABPⅡ表达水平高于卵巢良性肿瘤和卵巢异位症组织，推断CRABPⅡ可能介导维甲酸在恶性肿瘤细胞的增殖和分化中发挥重要作用[7-8]。动物实验也显示，CRABPⅡ可在一定程度上抑制乳腺癌小鼠的肿瘤细胞增殖[9]。E-FABP转运维甲酸至细胞核后，通过活化过氧化物酶体增殖物激活受体β/δ，抑制细胞的凋亡，促进细胞的分化和增殖，国内有研究显示E-FABP在不同种属肝癌组织[10]、非小细胞肺癌组织[11]中呈高表达，并且对肿瘤患者的预后评估具有一定价值。Ki-67是一种核蛋白，可表达于除G0期外的所有的细胞周期，在M期达到峰值。Ki-67具有较短的半衰期，在细胞有丝分裂后很快降解，因此，Ki-67可作为判断细胞增殖活性的确切指标，并可对恶性肿瘤化疗的敏感性做出预测[12]。黄泽楠等[13]研究结果显示，Ki-67的表达与多数乳腺浸润性导管癌病理及临床指标有相关，可作为监测患者预后的指标。国外也有研究表明，乳腺癌组织Ki-67阳性表达患者无病生存期和总生存期均较短于Ki-67阴性表达患者[14]。

本研究结果显示，CRABPⅡ在Ki-67阴性表达的IDC组织中的阳性表达率较高，而E-FABP在Ki-67阳性表达的IDC组织中的阳性表达率较高，CRABPⅡ、E-FABP与Ki-67在IDC组织中的表达情况分别呈负相关和正相关(P=0.000)，E-FABP 与Ki-67共同表达与肿瘤的大小、组织学分级和淋巴结转移有关，表明CRABPⅡ和E-FABP可能通过不同的机制调控肿瘤细胞的增殖，从而参与IDC发生、发展。在这个发展过程中，CRABPⅡ对肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，相反，E-FABP 肿瘤细胞的增殖具有促进作用，而在发生转移的IDC患者中，E-FABP的作用可能占据优势，E-FABP与Ki-67对于IDC的进展具有协同作用，两者的共同表达对于IDC转移的评估和预测具有一定临床价值。

本研究不足之处在于仅对E-FABP与Ki-67的共同表达与肿瘤的转移的关系进行分析，未对两者共同阳性表达与患者疗效及预后的影响进一步探讨，有待于在进一步研究中增加样本量深入探讨。

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Clinical Significance and Expression of CRABPⅡ,E-FABP and Ki-67 in Breast Invasive Ductal CarcinomaWUHua-lei，BAODe-fu，WANGJi-wen.(DepartmentofFourSurgery，ShiyanPeople′sHospitalofBao′anDistrict,Shenzhen518000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the clinical significance and expression of cellular retinoic acid binding protein(CRABP)Ⅱ,epidermal type fatty acid binding protein(E-FABP) and Ki-67 in breast invasive ductal carcinoma(IDC).MethodsClinical data of 112 patients with IDC admitted to Shiyan People′s Hospital of Bao′an District from Jan. 2009 to Jan. 2013 was collected.All patients were treated with surgical resection,and the IDC was performed immunohistochemical staining,to observe the expressions of CRABPⅡ，E-FABP and Ki-67 in the IDC tissues.ResultsThe positive expression rate of CRABP Ⅱ in the Ki-67 negative expression group was higher than that of the Ki-67 positive expression group(67.6% vs 19.2%， χ2=24.761,P=0.000).The positive expression rate of E-FABP in the Ki-67 positive expression group was higher than that of the Ki-67 negative expression group(84.6% vs 35.3%，χ2=27.245,P=0.000).The expression of CRABP Ⅱ was negatively correlated with Ki-67 in IDC tissues(rspan=-0.467,P=0.000),the expression of E-FABP was positively correlated with Ki-67(rspan=0.916,P=0.000). E-FABP and Ki-67 coexpression was correlated with tumor size,histological grade,IDC lymph metastasis,but not related with patient age,and TNM stage.ConclusionCRABPⅡ and E-FABP may be involved in tumor cell proliferation:CRABPⅡ has inhibiting effect on proliferation of tumor cells,while E-FABP can promote the proliferation of tumor cells,E-FABP and Ki-67 has a synergistic effect on the progression of IDC,the co-expression of the two has a certain clinical value for judgment of IDC metastasis.

Key words：Breast invasive ductal carcinoma; Cellular retinoic acid binding proteinⅡ; Epidermal type fatty acid binding protein; Ki-67

收稿日期：2014-09-22修回日期：2015-02-07编辑：伊姗

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.18.050

中图分类号：R737.9

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)18-3398-03