150例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级患者HPV感染型别的研究及随诊

张静平　洪　颖



150例宫颈上皮内瘤变Ⅰ级患者HPV感染型别的研究及随诊

张静平洪颖

[摘要]目的探讨南京鼓楼医院宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)人乳头瘤病毒(HPV)感染的分型情况及其转归。方法回顾性研究2010年至2012年在南京鼓楼医院确诊的CINⅠ患者，采用凯普核酸分子快速导流杂交基因芯片技术对HPV进行分型。定期随诊(每半年1次，持续2年)，随诊项目包括宫颈液基细胞学检测(TCT)、第二代基因杂交捕获(HC-II)检测HPV(人乳头瘤病毒)。结果①CINⅠ患者以HPV单一高危型感染为主，150例CINⅠ患者，HPV阳性的患者134例(89.33%),HPV检测阴性16例(10.67%)。单一高危型别感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，单一低危型别感染2例(1.33%)。②CINⅠ中HPV阳性的患者134例，其中单一感染者88例(65.67%)，双重感染30例(22.39%)，三重感染10例(7.46%)，四重感染6例(4.48%)；③HPV52、58、16感染率最高，分别占HPV阳性患者中的27.61%、17.16%、15.67%。④随访过程中，150例CINⅠ患者1年转阴率达62.00%，2年转阴率达80.00%，病程持续2年及病理升级的占20.00%，其中病理升级者占所有患者的12.67%。 结论HPV以单一高危型感染为主，其中以HPV52、58、16亚型感染率最高。但在病变持续及进展病例中，以HPV16及18亚型感染率最高。HPV多重感染可能会导致病毒清除时间的延长，是否增加病理升级的风险，需待大样本进一步调查研究。

[关键词]人乳头瘤病毒分型；宫颈上皮内瘤变Ⅰ级；随诊

宫颈癌是严重威胁女性健康的妇科恶性肿瘤之一。近年来，宫颈癌发病率呈上升趋势且发病年龄趋于年轻化[1]。宫颈上皮内瘤变(CIN)是与子宫颈浸润癌密切相关的一组宫颈病变，包括CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ，反映了子宫颈癌发生发展中的连续过程，通过筛查发现CIN，及时治疗高级别病变，是预防子宫颈癌行之有效的措施。人乳头瘤病毒(HPV)的持续感染是导致癌前病变，形成宫颈癌的主要病因[2]，人乳头状瘤病毒感染是宫颈癌发生的先决必要条件[3]，接近90%的CIN和99%以上的宫颈癌伴有人乳头瘤病毒感染[4]。在某些发达国家，宫颈癌筛查已逐步开始向HPV检测与细胞学检查联合筛查转化。由于多数HPV感染为一过性，可以被机体自动清除，因此，以HPV-DNA检测为基础的筛查必然造成一定程度的假阳性，引起HPV阳性妇女的恐慌和卫生资源的浪费。目前，国内外已开始使用其他生物标志物分流HPV阳性人群[5-7]。本文对鼓楼医院妇科经病理组织学检查确诊为C1NⅠ的150例患者进行HPV分型检测，研究不同亚型HPV感染在CINⅠ中的发生率及其对CINⅠ患者转归的影响，以明确CINⅠ病变持续及进展的高危亚型，尽早做出诊治，预防子宫颈癌的发生。

1资料与方法

1.1一般资料选择2010年1月1日至2012年7月1日在南京市鼓楼医院妇产科，经组织病理学确诊为CINⅠ的150名患者为研究对象(去除妊娠者，此前宫颈手术者)，年龄23～73岁，平均(42.2±3.45)岁，回顾分析其HPV分型。

1.2方法取样避开月经期，3 d内没有阴道内用药或冲洗，24 h内无性生活；扩阴器充分暴露宫颈，棉拭子擦去宫颈口过多的分泌物，宫颈刷在宫颈口顺时针旋转3～5圈，取出放入专用HPV采样管中；4℃保存，在2周内进行检测。HPV-DNA分型测定采用凯普生物工程有限公司提供的人乳头瘤病毒分型检测试剂盒。

通过提取临床样本病毒DNA，经过PCR扩增，利用导流杂交平台，在已经固定好核酸探针的低密度基因芯片上杂交、显色、诊断脱落细胞标本中的21种HPV病毒DNA分子的存在。21种常见型别精确分型检测包括，15种高危型别：HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53，56,58,59,66,68；6种低危型别：HPV6,11,42,43,44，CP8304(81)。

1.3统计学方法所有实验数据采用SPSS 17.0软件包进行统计分析。实验数据中部分采用统计学描述的方法，计数资料用率表示，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1CINⅠ中HPV感染率150例CINⅠ患者，HPV阳性的患者134例(89.33%)，HPV检测阴性16例(10.67%)。HPV阳性的患者中单一感染者88例(88/150，58.67%)，其中单一高危型别感染86例(86/150，57.33%)，单一低危型别感染2例(2/150，1.33%)；多重感染46例(46/150，30.67%)，其中双重感染30例(30/150，20.00%)，三重感染10例(10/150，6.67%)，四重感染6例(6/150，4.00%)。多重感染主要是高-低及高-高危HPV亚型组合，本研究未发现低-低危HPV亚型混合感染。所有病例中，以HPV高危亚型单一感染为主，其差异有统计学意义。

2.2CINⅠ中HPV亚型分布不论是单一HPV感染还是复合感染(多重感染重复计数)，HR-HPV(高危型HPV),HPV52、58、16感染率最高，累计分别占HPV阳性患者中的27.61%(37/134)、17.16%(23/134)、15.67%(21/134)。LR-HPV(低危型HPV)以CP8304为主，占10.45%(14/134)。HR-HPV中未发现HPV35(+)及HPV59(+)；HPV45(+)发现稀少。LR-HPV中，未发现HPV6(+)。亚型分布见表1。

表1　150例CINⅠ HPV感染情况及亚型分布

注：﹡复合感染重复计数

2.3CINⅠ患者病变持续2年及病理升级的主要型别病变持续2年及病理升级的患者共30例，其中，单一HPV16(+)及HPV18(+)患者分别有7例及4例；复合HPV16(+)及HPV18(+)分别有5例及2例，分别占各自感染率的57.14%(12/21)和60%(6/10)。占HPV高危亚型感染的前2位，和其他型别比较，差异有统计学意义(χ2=5.803，P<0.05)

2.4单一感染和多重感染对CINⅠ转归的影响本实验CINⅠ患者，88例HPV单一感染者，半年内单一HPV感染逆转率18.18%(16/88),1年内逆转率45.45%(40/88)，2年内逆转率13.64%(12/88)，病变持续2年及病理升级的患者占单一感染的22.73%(20/88)； 46例HPV复合感染患者中，半年内复合HPV感染逆转率15.22%(7/46)，1年内逆转率30.43%(14/46),2年内逆转率32.61%(15/46),病变持续2年及病理升级的患者占复合感染的21.74%(10/46)。 除2年阴转病例，单一感染和复合感染差异有统计学意义(χ2=6.758，P<0.05),余皆无。说明HPV复合感染可能会导致病毒清除时间延长，但并不增加病理升级的风险。CINI患者转归情况见表2。

表2　150例CINⅠ患者转归情况[n(%)]

3讨论

HR-HPV病毒感染是宫颈癌及癌前病变发病的必要条件,主要病因。本研究中150例确诊CINⅠ的患者中，HPV分型检测阳性134例，检出率为89.33%，单一高危型别感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，无论单一感染还是多重感染，均以高危型HPV感染为主。既往观点认为，宫颈高级别病变主要由高危型HPV感染引起，宫颈低级别病变主要由低危型HPV感染引起[8]。但近年来李晓红等[9]及汤惠如等[10]的研究表明，宫颈低级别病变，大部分由高危型HPV感染所致。这与本文分析结果一致。

在不同国家和地区，HPV感染率及亚型分布存在一定差异[11]。北京地区高危型HPV感染，以16,58型为主；上海地区高危型HPV感染，以16，52，58，33，31型为主；云南地区以16，52，33型为主；大连地区以16，58，52型为主。本实验CINⅠ感染以52,58,16型为主。HPV16和18是最主要的高危致癌亚型，导致了全世界范围内大约70%的宫颈癌[12,13]。HPV52和HPV58是亚洲人感染HPV的主要两个基因亚型，在中国、日本等亚洲国家有较高的检出，而在世界其他地区很少或者没有检出[14]。 HPV感染常无临床症状，平均持续时间为8～12个月，其中低危型平均清除时间为5～6个月，高危型平均清除时间为8～14个月，约50%～90%的HPV感染可在数月至2年内被机体清除，而HPV16或18型持续感染的时间会更长[15]。本实验的研究结果显示，CINⅠ患者的逆转率半年为22%，1年为62%，2年达到80%，与上述文献报道HPV清除率基本一致。

本实验HPV单一感染和多重感染对CINⅠ转归的影响，除2年阴转率差异有统计学意义，余皆无统计学意义。亦支持多重感染不增加宫颈癌的发病率，但引起病变持续的风险的观点[16]，还需大样本进一步调查研究。

对CINⅠ的随诊，主要是防止对高级别病变的漏诊和宫颈癌的发生，通过本实验，我们了解到高危型HPV在疾病发生、发展中的作用，并认识到CINⅠ的主要HPV感染亚型以及HPV16及18型的危害，对其加以重视，定期检查，将宫颈癌的发生尽量降到最低。

参考文献

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Study and follow-up of 150 cases of CINⅠ with HPV infection type

ZhangJingping，HongYing

GulouSchoolofClinicalMedicine,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210008,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the cervical intraepithelial neoplasia grade I (CINⅠ) points in human papilloma virus (HPV) infection situation and its outcome in this hospital.MethodsA retrospective study was performed in patients with CINⅠform 2010 to 2012 in this hospital,HPV was classified with cape nucleic acids rapid diversion hybridization of HPV gene chip technology.The regular follow-up was once every half a year,in two years.Follow-up projects included TCT,HPV HC-II.Results①Patients with CINⅠwere mainly with single high-risk HPV type infections; of 150 patients with CINI,HPV positive was in 134 cases (134/150,89.33%) and negative in 16 cases (16/150,10.67%).There were 86 cases of single high-risk pattern infection,(86/150,57.33%) ,46 cases of multiple infections (46/150,30.67%),and 2 cases of single low-risk type infection (2/150,1.33%).②CINⅠHPV positive was in 134 cases,in which a single infection was in 88 cases (88/134,65.67%),dual infection in 30 cases(30/134,22.39%),triple infection was in 10 cases (10/134,7.46%),and quadruple infection was in 6 cases (6/134,4.48%).③In turn,HPV52,58,16 infection rate was the highest,which was respectively 27.61%,17.16%,15.67% of HPV positive patients.④In the process of follow-up,1 year negative conversion rate of 150 patients with CINⅠwas 62.00%; two years conversion rate was 80.00%.Course for two years and pathological upgrade accounted for 20.00%,and the pathological upgrade accounted for 12.67% of all patients.ConclusionA single high-risk HPV infection is the main type,with the highest infection rate of HPV52,58,16 subtypes.But in cases of disease duration and progression,HPV16 and 18 subtypes has highest infection rate.Multiple HPV infections can lead to viral clearance extension of time.Large sample for further investigation is still in need with regard to whether to increase the risk of pathological upgrade.

[Key words]Human papilloma virus classification; Cervical intraepithelial neoplasia grade I; Follow-up

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.01.007

通信作者：洪颖，hongyingwjm@sina

基金项目：江苏省科技厅科技支撑计划-社会发展课题(BE2012606)
作者单位： 210008江苏南京南京医科大学鼓楼临床医学院(张静平，洪颖)，南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科(洪颖)