紫雪丹的质量控制

戴兰

盐城市亭湖区人民医院，盐城 224000

紫雪丹的质量控制

戴兰

盐城市亭湖区人民医院，盐城 224000

目的：建立紫雪丹的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对甘草、木香进行定性鉴别；采用气相色谱法对龙脑进行含量测定。结果：定性鉴别阴性无干扰，分离度高；龙脑在100 μg· mL-1～800 μg·mL-1（r=0.9996）范围内线性关系良好，加样回收率为100.79%，RSD为2.5%（n=6）。结论：方法可用于紫雪丹的质量控制。

紫雪丹；质量标准；薄层色谱法；气相色谱法

紫雪丹见于《太平惠民和剂局方》卷六，又称紫雪，紫雪散，言此药如法制成之后，其色呈紫；其性大寒，清热解毒之方，犹如霜雪之性，从而称之曰“紫雪丹”[1]。紫雪丹由石膏、羚羊角、寒水石、冰片、甘草、木香等10味中药组成，具有清热解毒、镇痉熄风、开窍定惊的功效，临床上主要用于治疗温热病，如高热烦躁、口渴唇焦、尿赤便闭及小儿热盛惊厥等。该制剂原先质量控制中只有性状检验，无定性定量指标，在质量控制方面存在局限性。本文增设了2项薄层色谱法（TLC）鉴别，并且采用气相色谱（GC）法对方中挥发性成分龙脑进行了含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津GC-14B气相色谱仪，岛津FID检测器，浙江大学N2000色谱工作站。

1.2 试药

紫雪丹：广西梧州制药厂生产，批号：110912X、110925X、111011X；龙脑对照品：中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110881；水杨酸甲酯为分析纯；其他试剂为分析纯。

甘草、木香购于盐城一中药房。

2 方法与结果

2.1 甘草的TLC鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备 取紫雪丹3.5 g（批号：110912X、110925X、111011X），加乙醚40 mL，加热回流1 h，滤过弃去醚液；药渣加甲醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加水40 mL使溶解，用正丁醇提取3次，合并醇液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。

陡河水库坝基下砂层顶部埋藏深度为5～10m，建库前所作的标准贯入试验击数为10～20击，相应的相对密度Dr为0.6～0.75，其密实度属中密上限或密实下限。遇到9～10度地震，仍将发生液化。对建库时与震后修复后在坝基砂层所作的标准贯入试验成果进行比对，坝基砂层密实度有了显著的提高。

2.1.2 阴性供试品溶液制备 按处方配比取各味药（缺甘草），按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。

2.1.3 对照药材溶液的制备 取甘草药材0.2 g，同法制成甘草对照药材溶液。

2.1.4 定性鉴别 照薄层色谱法 《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验[2]。吸取供试品溶液、甘草对照药材溶液和阴性供试品溶液各2～3 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（30∶10∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，经105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色斑点，见图1。阴性供试品在相应位置上无黄色斑点。

图1 甘草的薄层图

2.2 木香的TLC鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备 取紫雪丹2 g（批号：110912X、110925X、111011X），加甲醇10 mL，超声处理30 min，滤过，滤液作为供试品溶液。

2.2.2 阴性供试品溶液制备 按处方配比取各味药（缺木香），按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。

2.2.4 定性鉴别 照薄层色谱法 《中国药典》2010年版一部附录ⅥB[3]）试验。吸取供试品溶液、木香对照药材溶液和阴性供试品溶液各4～6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环己烷-乙酸乙酯（6∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，经105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与木香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性供试品在相应位置上无斑点。见图2。

图2 木香的薄层图

2.3 龙脑含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：固定液为50%苯基甲基聚硅氧烷（DB-17）的弹性石英毛细管柱（30 m×0.32 mm，0.5 μm）；程序升温：90℃，保持3 min，10℃/min升温至110℃，保持4 min；进样口温度：200℃；检测器温度：250℃；RANGE：0；进样量：1 μL；分流比20∶1。

2.3.2 对照品溶液的制备 按照 《中国药典》2010年版一部冰片项下，选择水杨酸甲酯作为内标，结果内标峰和龙脑峰分离度在1.5以上，分离良好。

理论板数按龙脑峰计算应不低于2500。

2.3.3 供试品溶液的制备 取紫雪丹粉末0.1 g，精密称定，加甲醇10 mL，超声处理30 min，放冷，滤过，滤液置20 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加入内标溶液2 mL，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，即得。

2.3.4 阴性对照溶液的制备 按处方配比取相当于测定量5倍的药材（缺冰片），照工艺制备成模拟制剂，按“2.3.3”项下制成阴性对照溶液。

2.3.5 系统适用性试验 取阴性对照溶液、对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进样。结果表明，阴性对照溶液对样品中龙脑的测定无干扰。见图3。

图3 龙脑专属性试验GC色谱图

2.3.6 线性关系考察

储备溶液的制备：取龙脑对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液。

内标溶液的制备：取水杨酸甲酯适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含4.5 mg的溶液。

标准曲线的制备：精密吸取储备液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL分别置10 mL量瓶中，加内标溶液2.0 mL，加甲醇至刻度，摇匀，制成浓度为50.0、100.0、200.0、400.0、600.0 μg·mL-1的对照品溶液。分别取1 μL注入气相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图，得到龙脑峰与内标峰峰面积比值分别为0.124、0.261、0.654、1.308、2.060，以龙脑量与内标量比值X为横坐标，龙脑与内标峰面积比值Y为纵坐标进行回归，方程为：Y=1.5815X-0.0694，r= 0.9996（n=5）。龙脑对照品在100 μg·mL-1～800 μg· mL-1范围内线性关系良好。标准曲线见图4。

图4 龙脑标准曲线图

2.3.7 精密度考察 精密吸取对照品溶液（200 μg· mL-1）1 μL，连续进样6次，考察其精密度，龙脑和内标峰峰面积比值的RSD为0.8%。表明精密度良好。

2.3.8 稳定性考察 取供试品溶液分别于0、2、4、6、8 h进行测定，龙脑峰面积与内标峰面积比值的RSD为1.8%。表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.3.9 重复性试验 取同一批号样品6份 （批号：110912X），按“2.3.3”项下制备成供试品溶液，进行测定，龙脑含量的RSD为2.4%，表明方法可行，重现性好。

2.3.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品6份（批号：110912X，含量：681.2 μg·g-1），精密加入对照品适量，配成中间浓度溶液，其余操作按“供试品溶液的制备”，平行6份，计算加样回收率。平均回收率为100.79%，RSD为2.5%。见表1。

表1 加样回收率试验结果

2．3.11 样品测定 取不同批号制剂，制备成供试品溶液，在上述色谱条件下以外标法测定龙脑的含量，结果见表2。

表2 各批样品龙脑含量测定结果（g·g-1）

3 讨 论

紫雪丹历史悠久，君药石膏、寒水石为矿物药，《中国药典》无定性标准。羚羊角为动物药，也没有相关定性、定量标准。查阅文献未见有关紫雪丹质量控制标准及定性定量方面的文献。因此在制定该质量标准时，选择了臣药甘草、木香进行定性鉴别，选择了臣药冰片中的龙脑作为含量测定的对象。龙脑为易挥发物质，常温下不稳定，生产过程中易损失，因此，龙脑的含量对于紫雪丹质量稳定性具有十分重要意义。采用气相色谱法测定紫雪丹中龙脑含量重现性好、杂质对分离无干扰，可为紫雪丹的质量控制提供可行的方法。

木香薄层色谱展开条件参照 《中国药典》2010年版一部木香[3]项下，以环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。结果发现木香的几个斑点比移值较小。对展开剂进行改进，以三氯甲烷-环己烷-乙酸乙酯 （6∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，Rf值达标。

龙脑的含量测定文献中多采用超声处理的提取方法[4-5]，考虑到龙脑的挥发性，不宜采用加热、煎煮等剧烈的提取方法，所以本实验采用超声提取。分别考察了三种提取溶解：乙酸乙酯、乙醇、甲醇各10 mL，密塞，超声处理30 min。结果表明，三者提取效率相差不大，但是由于甲醇在FID检测器上响应最小，为避免溶剂影响，选用甲醇作为样品提取溶剂。分别超声处理10、20、30、40 min，结果表明10 min和20 min提取不完全，30 min和40 min提取较完全且提取效率相当，故采用超声处理30 min的方法进行提取。

[1] 何河内.从紫雪丹谈成药的标准化 [J].中医杂志，1994，35（5）：303-4.

[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S]：一部，北京：中国医药科技出版社，2010：一部附录ⅥB.

[3] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典[S]：一部，北京：中国医药科技出版社，2010：57.

[4] 邹吉利，徐 彬，吴金虎，等.烧伤愈合膏龙脑与异龙脑的含量测定[J].医药导报，2014，33（7）：944-6.

[5] 赵 磊，邵大志，谭洪泉，等.气相色谱法同时测定小儿双清颗粒中薄荷脑、龙脑 [J].中国药师，2013，35（7）：1470-2.

Quality Standard for Zixue Dan

DAI Lan
The Lake District People's Hospital of Yancheng City Pavilion,Yancheng 224000

Objective:To establish the quality standard for Zixue dan.Methods:Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Aucklandiae Radix were identified by TLC.The content of borneol was determined by GC.Results:The qualitative identification was with high resolution and without interference from the negative substances.The linear range of borneol was 100 μg·mL-1～800 μg·mL-1(r=0.9996)and the recovery was 100.79%(RSD=2.5%,n=6).Conclusion:The method can be used in the quality control of Zixue dan.

Zixue dan;Quality standard;TLC;GC

R927.1

A

1673-7806（2015）01-042-03

戴兰，女，主管药师 E-mail:2689026243@qq.com

2014-10-12

2014-12-15