高效液相色谱法同时测定九制大黄丸中5组分含量

李 莉，宋俊骊，王志梅，李晓敏，吴海霞，刘艳丽

（1．河北省邯郸市食品药品检验中心，河北 邯郸 056004； 2．河北省邯郸市中心血站，河北 邯郸 056001）

高效液相色谱法同时测定九制大黄丸中5组分含量

李 莉1，宋俊骊1，王志梅2，李晓敏1，吴海霞1，刘艳丽1

（1．河北省邯郸市食品药品检验中心，河北 邯郸 056004； 2．河北省邯郸市中心血站，河北 邯郸 056001）

目的 建立同时测定九制大黄丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 色谱柱为C18柱(250 mm×4．6 mm，5 m)，流动相为甲醇-0．1%磷酸溶液(77∶23)，流速1．0 mL／min，检测波长254 nm，柱温40℃，进样量20 L。结果 芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的进样质量浓度线性范围分别为4．6～92 g／mL，3．8～76 g／mL，4．0～800 g／mL，5．0～100 g／mL和17．6～352 g／mL，平均回收率分别为99．38%，99．04%，99．72%，99．59%和99．52%，RSD分别为0．80%，1．02%，0．50%，0．54%，0．92%(n=6)。结论 HPLC法可同时测定九制大黄丸中5组分的含量，专属性强，分离效果好。

高效液相色谱法；九制大黄丸；芦荟大黄素；大黄酸；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚

九制大黄丸适用于胃肠积滞、口渴不休、停食停水、胸热心烦、大便燥结、小便赤黄等症[1]，原标准中无定性和定量检查项，不能很好地控制药品质量。本试验中采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定九制大黄丸中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，方法简单、准确、重复性好。现报道如下。

1 仪器与试药

LC-2010AHT型高效液相色谱仪（日本岛津）；Lcsolution色谱工作站。芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品（中国食品药品检定研究院，批号分别为 110795-200605，110757-200206，110756-200110，110796-201017，110758-201013）；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为纯化水；九制大黄丸（甘肃岷海制药有限责任公司，水丸，规格为每50粒重3 g，批号为120401，120803，130312）；阴性样品(邯郸摩罗丹药业股份有限公司提供)。

2 方法与结果

2．1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Thermo BDS HYPERSIL C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0．1%磷酸（77∶23）；流速：1．0 mL／min；检测波长：254 nm；柱温：40℃；进样量：20 μL。在此条件下，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的保留时间分别为4．719，5．686，8．672，12．266，17．037 min，理论板数分别为5 471，5 920，8 622，11 419和11 998。色谱图见图1。

A．供试品溶液 B．对照品溶液 C．阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图

2．2 溶液制备

精密称取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解并稀释成1 mL中含芦荟大黄素0．23 mg、大黄酸 0．19 mg、大黄素 2．00 mg、大黄酚0．25 mg、大黄素甲醚0．88 mg的溶液，作为对照品贮备溶液。取本品水丸适量，研细，取约0．5 g，分置锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，置水浴上加热回流1 h，放冷，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10 mL，置烧瓶中，蒸干，加 8%盐酸溶液15 mL，超声处理2 min，再加三氯甲烷10 mL，加热回流1 h，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，移至25 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加甲醇溶解并稀释成1 mL中含芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄素甲醚各10 μg及大黄酚15 μg的溶液，作为对照品溶液。取阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

线性关系考察：精密量取对照品贮备溶液 1．0，5．0，10．0，15．0，20．0 mL，分别置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定峰面积，以对照品溶液质量浓度(μg／mL)为纵坐标、相应峰面积（A）为横坐标进行线性回归，回归方程与线性范围见表1。

表1 线性关系考察结果（n=5）

精密度试验：取同一对照品溶液，依法重复进样5次。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积积分值的RSD分别为0．6%，0．7%，0．4%，0．3%，0．8%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：在拟订色谱条件下，依法测定供试品溶液在室温下放置0，3，6，12，24 h时的峰面积。结果芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积积分值的 RSD分别为0．9%，0．7%，0．6%，0．8%，1．1%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批样品（批号为120401），依法制备供试品溶液并测定，以外标法计算含量。结果的 RSD为0．79%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为120401）6份，精密加入一定量的芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品，依法测定，计算回收率。结果见表2。

表2 5组分加样回收试验结果（n=6）

2．4 样品含量测定

按照拟订色谱条件，取供试品溶液和对照品溶液各20 μL，注入色谱仪测定，用外标法计算含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果（mg／g）

3 讨论

试验过程中，分别以乙腈（每1 L加磷酸二氢钠3．4 g和十二烷基硫酸钠）-水（1∶1)[2]19，458、甲醇-0．1%磷酸溶液（77∶23)[2]22为流动相，结果以后者为流动相时，柱效高、分离效果好，且甲醇对人体的伤害要比乙腈小，故选流动相为甲醇-0．1%磷酸溶液。

样品制备中分别采用加热回流0．5，1，2 h，超声处理1 h和 2 h时测定结果差别不大，加热回流1 h可得到满意结果，故采用加热回流1 h提取[3]。

本试验中所建立的方法具有回收率稳定、重复性好等特点，可以作为九制大黄丸中5组分的含量测定方法。

[1]WS3-B-0178-90，中华人民共和国卫生部标准药品标准·中药成方制剂（第二册）[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010．

[3]李晓敏，毕雪艳，李小菊，等．高效液相色谱法测定复方清肝胶囊中栀子苷含量[J]．中国药业，2008，10（17）：43-44．

Contents Determination of 5 Kinds of Components in Jiuzhi Rhubarb Pill by HPLC

Li Li1,Song Junli1,Wang Zhimei2,Li Xiaomin1,Wu Haixia1,Liu Yanli1
(1．Handan Municipal Inspection Center for Food and Drug,Handan,Hebei,China 056004; 2．Handan Municipal Blood Center,Handan,Hebei,China 056001)

Objective To establish a HPLC method for simultaneously determining the contents of aloe-emodin,chrysophanic acid, emodin,chrysophanol and rheochrysidin in Jiuzhi Rhubarb Pill．M ethods The C18column(250 mm×4．6 mm，5 m)was adopted with methanol-0．1% phosphoric acid(77∶23)as the mobile phase at a flow rate of 1．0 mL／min,the detection wavelength was 254 nm,the column temperature was 40℃ and the injection volume was 20 μL．Results The linear ranges were 4．6-92 μg／mL for aloe-emodin, 3．8-76 μg／mL for chrysophanic acid,4．0-800 μg／mL for emodin,5．0-100 μg／mL for chrysophanol and 17．6-352 μg／mL for rheochrysidin respectively．Theaveragerecoveryrateswere99．38%(RSD=0．80%),99．04%(RSD=1．02%),99．72%(RSD= 0．50%),99．59%(RSD=0．54%)and 99．52%(RSD=0．92%)respectively(n=6)．Conclusion The HPLC method can simultaneously determine the contents of 5 kinds of components in Jiuzhi Rhubarb Pill and has stong specificity and good separating effects．

HPLC;Jiuzhi Rhubarb Pills;aloe-emodin;chrysophanic acid;emodin;chrysophanol;rheochrysidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0034-03

李莉(1974-)，女，大学本科，副主任药师，研究方向为药物分析，（电话）0310-7052066（电子信箱）llqikai＠126．com。

2014-02-25；

2014-06-27)