ALK在非小细胞肺癌中的表达



ALK在非小细胞肺癌中的表达

郝彦勇1，李旭丹2，郭黎黎1，许仙花1*， 邹玉凤1

(1.吉林省肿瘤医院，吉林 长春130012；2.长春市妇产医院)

间变性淋巴瘤激酶(ALK)于1994年首先发现于间变性大细胞淋巴瘤中；EML4-ALK融合基因于2007年首次发现，是新兴的生物标记物和治疗靶标[1]。我们检测了106例经手术切除的非小细胞肺癌组织标本，观察并分析ALK融合基因的表达情况以及阳性病例的临床病理特征。

1材料与方法

1.1材料随机抽取吉林省肿瘤医院2010年至2013年间经手术切除的非小细胞肺癌106例，年龄41-77岁，平均年龄58.8岁。肿瘤组织常规取材，经10%中性福尔马林液充分固定，石蜡包埋后，4 μm切片，用于免疫组化及FISH染色。

1.2试剂抗ALK(D5F3)兔单克隆抗体试剂，兔单克隆阴性对照Ig(Rabbit Monoclonal Negative Control Ig),OptiView DAB IHC检测试剂盒，OptiView 扩增试剂盒，均购自罗氏诊断产品(上海)有限公司。Vysis ALK双色分离探针试剂盒。

1.3　实验方法

1.3.1HE常规切片染色，观察。

1.3.2免疫组化的方法检测ALK蛋白的表达。使用BenchMark XT自动切片染色仪，每轮实验设阳性对照一张，每例标本设阴性对照一张。

1.3.3对于阳性病例，用FISH的方法复检，按照ALK探针试剂盒说明操作，荧光显微镜下观察。

1.3.4结果判读 ①组织学诊断标准：参照2004版世界卫生组织编写的《肺、胸膜、胸腺及心脏肿瘤病理学和遗传学》诊断标准以及国际肺癌研究学会/美国胸科学会/欧洲呼吸学会(IASLC/ATS/ERS)于2011年2月公布的肺腺癌国际多学科分类标准[2]。②免疫组化判读标准：参照《VENTANA anti-ALK(D5F3)评分解读指南》，任意比例的肿瘤细胞胞浆内出现强的颗粒状着色既判断为阳性，否则为阴性。③FISH判读标准：>15%的肿瘤细胞内出现分离信号(同一肿瘤细胞核内出现红、绿信号分离，分离距离大于两个信号直径；或出现单独的红色信号)为阳性[3,4]。

2结果

106例患者中，年龄41-77岁，平均58.8岁；男性58例，女性48例；有吸烟史者61例，无吸烟史者45例；肿瘤平均最大径3.4 cm；淋巴结转移者66例，无淋巴结转移者40例；腺癌73例，鳞状细胞癌33例，详细临床病理特征见(表1)。其中，ALK阳性表达5例(图1、2)，阳性率4.71%，其临床病理特征见(表2)。所有阳性病例均经FISH检测，符合率100%。

表1　106例非小细胞肺癌的临床病理特征

表2　5例ALK阳性非小细胞肺癌临床病理特征

图1　ALK阳性表达

3讨论

肺癌是死亡率最高的恶性肿瘤之一，常规的手术、放疗、化疗等治疗方法效果仍然有限[5]。近年来，靶向治疗已经成为肺癌治疗领域的新的热点。有研究表明，ALK酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌方面，已取得了重大进展[6]。因此，准确地检测ALK并研究总结其临床病理特征，具有重要意义[7]。

为尽量避免肿瘤异质性等原因造成的误差，本组实验全部采用手术后标本。通过分析，可以发现ALK阳性患者：①平均年龄低于全组平均年龄；②女性、不吸烟者占优势；③组织学类型以腺癌为主，其中，以腺泡状为主的腺癌略占优势；④肿瘤最大径明显大于全组平均值；⑤淋巴结转移率明显高于全组平均值；⑥肿瘤发病部位无明显特征；⑦VENTANA免疫组化法检测与FISH方法检测，有较高的符合率。

文献报道，ALK阳性患者以女性，年轻，不吸烟，腺癌为主要特征；这与本组实验结果一致，但在年龄的确切区分上，尚需进一步研究[6]。有些报道认为在腺癌类型中，以粘液腺癌占优势，有些报道认为实性型为主的腺癌占优势，本组实验显示以腺泡状为主的腺癌略占优势，但其与粘液产物的关系，尚需进一步研究。另外，本实验还发现，肿瘤最大径以及淋巴结转移与否，有可能是ALK阳性患者的潜在特征，需要扩大样本量进一步证实。

综上所述，ALK阳性患者以女性，年轻，不吸烟，腺癌为特征，VENTANA免疫组化法是可靠的筛查手段，同时，为了避免过度治疗，提高疗效，节约医疗成本，对阳性病例行FISH检测验证也是十分必要的。

参考文献：

[1]Soda M,Choi YL,Enomoto M,et al.Identification of the transforming EML4-ALK fusion gene in non-small-cell lung cancer[J].Nature,2007,448:561.

[2]Travis WD,Brambilla E,Noguchi M,et al.International association for the study of lung cancer/american thoracic society/european respiratory society international multidisciplinary classification of lung adenocarcinoma[J].J Thorac Oncol,2011,6:244.

[3]Paik JH,Choe G,Kim H，et al.Screening of Anaplastic Lymphoma Kinase Rearrangement by Immunohistochemistry in Non-small Cell Lung Cancer:Correlation with Fluorescence In Situ Hybridization[J].J Thorac Oncol,2011,6(3):466.

[4]Shaw AT,Yeap BY,Mino-Kenudson M，et al.Clinical features and outcome of patients with non-small-cell lung cancer who harbor EML4-ALK[J].J Clin Oncol ,2009,27:4247.

[5]Jemal A,Siegel R,Ward E，et al.Cancer statistics,2008[J].CA Cancer J Clin ,2008,58:71.

[6]Salido M,Pijuan L,Martinez-Aviles L et al.Increased ALK gene copy number and amplification are frequent in non-small cell lung cancer[J].J Thorac Oncol,2011,6:21.

[7]Takahashi T,Sonobe M,Kobayashi M，et al.Clinicopathologic features of non-small-cell lung cancer with EML4-ALK fusion gene[J].Ann Surg Oncol,2010,17:889.

(收稿日期：2014-06-07)

文章编号：1007-4287(2015)05-0833-03

*通讯作者