动脉粥样硬化患者主动脉组织PTX-3表达的变化及意义

沈宏，王晓军，薛梅，邢启崇(济南市天桥人民医院，济南5003;山东省千佛山医院)

动脉粥样硬化患者主动脉组织PTX-3表达的变化及意义

沈宏1，王晓军2，薛梅2，邢启崇2
(1济南市天桥人民医院，济南250031;2山东省千佛山医院)

摘要:目的探讨动脉粥样硬化(AS)患者主动脉组织PTX-3的表达变化及其与AS主要危险因素及冠状动脉病变程度的相关性。方法43例行主动脉-冠状动脉旁路移植术患者的主动脉打孔废弃组织为观察组，12例亲属间肾移植供者的修剪废弃动脉组织为对照组。观察组患者术前测定血清PTX-3、hs-CRP、LDL-C、TG、TC、HDL-C、脂蛋白(a)、［Lp(a)］，行冠状动脉造影后采用冠状动脉Gensini积分评价冠状动脉病变程度。应用免疫组化法检测动脉组织中PTX-3表达。结果与对照组比较，观察组血清PTX-3、hs-CRP、LDL-C、TG、TC、LDL-C、Lp(a)高，HDLC低(P均＜0.05)。观察组冠状动脉Gensini积分平均为(78.21±23.79)分，主动脉组织PTX-3表达量为0.21± 0.05，在吸烟及糖尿病患者中升高(P均＜0.05)，与Gensini积分、血清PTX-3、hs-CRP、TG、TC、LDL-C、HDL-C、Lp(a)呈正相关(r =0.694，P＜0.05)。对照组动脉组织PTX-3无表达。结论AS患者主动脉组织中存在PTX-3表达，其表达与AS发生及冠状动脉病变程度相关。

关键词:动脉粥样硬化; Pentraxin-3;危险因素

炎症学说是动脉粥样硬化(AS)发病机制之一［1］。PTX-3是一个新近发现的炎症时相反应蛋白，属于hs-CRP超家族成员。PTX-3与冠状动脉病变的程度及斑块的不稳定性的关系较其他炎症标志物可能更为密切［2，3］。虽然既往研究证实PTX-3可作为冠心病的危险因素对预后进行评估，但冠心病患者局部动脉组织内PTX-3的表达水平尚未见报道。本研究检测主动脉组织PTX-3的表达，并探讨其与AS主要危险因素及冠状动脉病变程度的关系。

1　资料与方法

1.1临床资料选取2012年1月～2014年1月在山东省千佛山医院行主动脉-冠状动脉旁路移植术(CABG)的冠心病患者43例(观察组)，取其主动脉打孔废弃的组织。男32例、女11例，年龄45～79岁。吸烟者7例，高血压病18例，糖尿病14例。排除各种急慢性全身或局部感染性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、肝肾功能不全、急性脑血管疾病及周围血管病等。对照组为12例亲属间肾移植供体者移植时修剪废弃的主动脉组织。患者男10例、女2例，年龄37～65岁。供体者入院后均经全面体格检查排除各种器质性病变，无冠心病、吸烟史、高血压病及糖尿病史等。

1.2生化指标测定入选者均于入院后第2天清晨空腹采肘静脉血6mL，采用终点比色法测定血清甘油三酯(TG)及总胆固醇(TC)，采用化学修饰酶法测定低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，采用免疫比浊法测定脂蛋白(a)［Lp(a)］。采用酶联免疫吸附法测定血清PTX-3，散射比浊法测定hs-CRP，以上测定均由罗氏公司MODULAR生化分析系统完成。

1.3冠状动脉狭窄程度及病变严重程度评定所有患者行冠状动脉造影(CAG)，采用Judkin法［4］，经右侧股动脉穿刺置入造影导管，取左前斜45°和右前斜30°，以及头位和足位25°进行左右CAG。对造影结果进行录像并刻录光盘，由两位非知情介入心血管病专家分析图像。冠状动脉狭窄程度的判定通过目测法，以百分数表示。应用冠状动脉Gensini积分方法评价冠状动脉病变严重程度［5］。

1.4主动脉组织PTX-3的检测获取主动脉组织后，立即储存于－80℃冰箱或液氮罐内备用。标本经10%甲醛溶液固定、梯度乙醇脱水、二甲苯脱乙醇、石蜡包埋、切片。选择多聚赖氨酸进行载玻片防脱片处理，切片经二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化，柠檬酸盐缓冲液高温高压抗原修复，3%双氧水消除内源性过氧化物酶活性，加入兔抗人PTX-3多克隆抗体(1∶300)，4℃冰箱孵育过夜，加入酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物，室温孵育30min，DAB显色，镜下控制显色时间，苏木素复染、分化、返蓝，梯度乙醇脱水、二甲苯脱乙醇，晾干，中性树脂封片。免疫组化染色切片经全自动显微图像分析系统检测，每张切片随机选取6个高倍视野，测定每个视野中阳性信号的平均光密度值(OD)，取其平均值即为PTX-3表达量。

2　结果

2.1两组血清各指标比较见表1。

表1　两组血清各指标比较

2.2主动脉组织PTX-3表达情况观察组PTX-3阳性表达着色主要分布于内皮细胞及平滑肌细胞的胞质，表现为棕褐色或棕黄色，染色分布不均匀，呈颗粒状、片状、簇状或条状。对照组主动脉组织PTX-3无表达，着色表现为浅蓝色。观察组主动脉组织PTX-3表达量为0.12～0.40(0.21±0.05)。

2.3观察组主动脉组织PTX-3表达量与AS主要危险因素的关系观察组主动脉组织PTX-3表达量男性与女性间比较差异无统计学意义(0.20± 0.04比0.22±0.08，P＞0.05)，吸烟者与非吸烟者、糖尿病患者与非糖尿病患者间比较，差异均有统计学意义(0.25±0.04比0.20±0.05; 0.24±0.07 比0.18±0.03，P＜0.05)。

2.4观察组主动脉组织PTX-3表达量与血清PTX-3、血脂及hs-CRP、冠状动脉Gensini积分相关性分析主动脉组织PTX-3表达量与血清PTX-3、hs-CRP、TG、TC、LDL-C、LP(a)呈正相关，与HDL-C、冠状动脉Gensini积分呈负相关(r分别为0.702、0.690、0.400、0.469、0.435、－0.453、0.506、0.694，P分别为0.002、0.012、0.016、0.004、0.008、0.014、0.002、0.001)。

3　讨论

AS是多因素协同作用的结果，而炎症学说是目前AS公认的最重要机制。PTX-3作为hs-CRP超家族成员，在AS发生发展中起关键作用［6］。PTX-3在炎性因子(IL-1、TNF-α)等诱导下，由血管内皮细胞、单核细胞及巨噬细胞等分泌。有学者推测PTX-3水平与hs-CRP比较，其和血管的炎症状态的相关性可能更好，更能直接反映AS程度。研究［7］也发现，PTX-3在AS进展期斑块中有高表达，而在没有AS病变的切片中未发现PTX-3表达。本研究发现，观察组血清和主动脉组织中PTX-3均明显升高，这与前期研究结果相一致。提示PTX-3水平升高可促进AS的形成。

既往研究证实，ox-LDL可通过NF-κB增加内皮细胞及巨噬细胞PTX-3的表达［8，9］，而释放的PTX-3促进氧自由基形成，加速LDL的氧化。低水平的HDL-C使动脉硬化部位抗氧化应激等能力下降和不能及时从动脉内膜转运出侵入的大量脂质，以至血脂不断沉积，进而导致AS进展。PTX-3与HDLC呈负相关性，两者相互作用的机制目前尚不明确，可能与HDL-C通过磷脂酰肌醇信号通路，调节PTX-3mRNA表达有关［10］。此外，PTX-3可引起膜促凝磷脂释放，血小板反应性增强，加重炎症反应。本研究发现主动脉组织PTX-3表达量与血清hs-CRP、TG、TC、LDL-C、Lp(a)表达量呈正相关，与HDL-C呈负相关。提示PTX-3水平升高造成脂代谢紊乱从而促进AS形成。

本研究中观察组部分主动脉组织肉眼可见黄色脂质，所有主动脉组织均有不同程度的PTX-3表达，PTX-3表达量平均为0.21±0.05。对照组动脉组织PTX-3无表达。提示组织PTX的表达与AS相关。本研究还发现，吸烟者主动脉组织PTX-3表达量较不吸烟者高，说明吸烟对PTX-3有诱导作用。糖尿病作为冠心病等危症，与AS有相同病理基础，PTX-3参与炎症反应，炎症细胞在病变局部聚集，刺激微血管增生。本研究发现，糖尿病患者主动脉PTX-3表达量较非糖尿病患者高，提示PTX水平升高可能在糖尿病患者的AS进展中起作用。

冠状动脉Gensini积分是一种有效评估冠状动脉病变程度的方法，冠状动脉病变程度越严重，Gensini积分越高。本研究显示，观察组患者主动脉组织PTX-3表达量随Gensini积分增加而增加，说明PTX-3表达的增高可促进AS的形成及进展，导致复杂病变形成，对易损斑块形成及不稳定可能起到促进作用。

本研究取材于行CABG的AS患者主动脉打孔时废弃的动脉组织［11］，为活体全层动脉壁，包括内膜、中膜及外膜组织，其研究结果提高了科学性、准确性及可信度，为研究AS发病机制增加了新的途径。本研究发现AS患者主动脉组织中存在PTX-3表达，其表达与AS发生相关，可作为预测冠状动脉病变程度的指标及治疗靶点。

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收稿日期:( 2015-07-02)

通信作者:邢启崇

基金项目:山东省自然科学基金项目(Y2007C066)。

文章编号:1002-266X(2015)37-0075-03

文献标志码:B

中图分类号:R541.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.030