结直肠癌患者血清miR-31的表达变化及意义

胡煊，熊兵红，马利(眉山市人民医院，四川眉山6000;昆明医科大学第一附属医院; 四川省绵阳市第三人民医院)

结直肠癌患者血清miR-31的表达变化及意义

胡煊1，熊兵红2，马利3
(1眉山市人民医院，四川眉山620010;2昆明医科大学第一附属医院; 3四川省绵阳市第三人民医院)

摘要:目的探讨结直肠癌(CRC)患者血清微小RNA-31(miR-31)的表达变化及意义。方法利用实时定量RT-PCR检测60例CRC患者血清中miR-31的表达量，并以20例健康体检者作为对照组，通过受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积计算miR-31诊断CRC的敏感度和特异度。结果CRC患者血清miR-31显著高于对照组(P ＜0.05)。血清中miR-31的相对表达量与CRC的TNM分期、浸润深度、分化程度和淋巴结转移有关(P＜0.05)。血清miR-31诊断CRC的灵敏度和特异度分别为75.3%和60.2%，ROC曲线下面积为0.75。结论CRC患者血清miR-31升高，后者与肿瘤进展有关;miR-31水平检测对诊断CRC具有良好的特异度和敏感度。

关键词:结直肠肿瘤;miR-31;肿瘤标志物

结直肠癌(CRC)是世界上常见的恶性肿瘤，是肿瘤死亡的第二大原因［1］。其发生发展机制未完全阐明，因此，发现CRC有关新的诊断、发展、转移标志物非常重要。微小RNAs已被证实和肿瘤的发生发展密切相关，其参与肿瘤的生物学过程，如细胞生长、增殖、发育、凋亡、分化、侵袭和转移［2，3］。研究发现，微小RNA-31(miR-31)在CRC中表达明显升高，充当致癌因子发挥作用［4～6］。本研究检测CRC患者外周血清中miR-31水平，探讨其与肿瘤发展的关系及其诊断CRC的价值。

1　资料与方法

1.1临床资料收集2010年10月～2013年10月住院治疗的60例CRC患者(CRC组)外周血标本，均经病理学证实。患者入院前均未进行过化、放疗。男46例、女14例，年龄30～78岁。CRC的TNM分期按照国际抗癌联盟和美国癌症联合会2010年版进行分期。患者均行CRC根治手术。另选择正常健康体检者20例作为对照组，男10例、女10例，年龄20～70岁。

1.2血清miR-31的检测采用实时定量RT-PCR法。患者均在手术前抽取静脉血5mL，EDTA抗凝。低温高速离心机离心，用1.5mL无RNase的离心管分装血清和血细胞，随即放入－80℃冰箱保存备用。mirVana PARIS试剂盒(Ambion，USA)说明书抽提总RNA，用紫外分光光度仪检测RNA溶液D260/D280，计算RNA浓度和纯度，D260/D280在1.8～

2.1者用于进一步实验检测RNA的完整性。使用一步法逆转录miRNA，miRNA反转录引物由美国ABI公司合成，U6作为内参。反应条件: 42℃、60min，70℃、5min，4℃储存，qRT-PCR反应体系，PCR扩增反应条件: 95℃、10min，95℃、15 s，60℃、1min(50个循环)。实验结果采用定量PCR中的相对定量法进行分析，以2－ΔΔCT表示肿瘤组织miR-31表达量相对于对照组表达量的变化倍数，其中ΔCT =(CTmiR-31－CTU6)肿瘤－(CTmiR-31－CTU6)

正常对照。

2　结果

2.1两组血清miR-31相对表达量比较CRC组患者血清中miR-31相对表达量(2－ΔΔCT)为9.50± 7.45，明显高于对照组(2.45±2.65)(P＜0.01)。

2.2 CRC患者血清中miR-31相对表达量与临床病理因素的关系见表1。

2.3血清miR-31在CRC中的诊断价值曲线下面积为0.75(95%CI: 0.65～0.87)，临界值取2.34时，其灵敏度和特异度分别为75.3%和60.2%。见图1。

3　讨论

表1　CRC患者血清中miR-31相对表达量与临床病理因素的关系

图1　miR-图31检测诊断CRC的ROC曲线

miRNAs是一类小的含有19～24个核苷酸的非编码RNA，参与肿瘤的发生发展。最近研究已证实，miRNAs能在血清、血浆中稳定地检测到，循环miRNAs可作为新的潜在肿瘤标志物［7，8］。许多研究表明，miR-31作为致癌因子，可调控肿瘤的生长、凋亡、转移和化疗耐药［9，10］。miR-31在CRC组织和细胞中明显升高，和肿瘤的发生发展预后相关［11，12］。

本研究发现，CRC外周血中miR-31水平明显高于对照组。随着肿瘤的发展，肿瘤TNM分期增加，外周血中miR-31的表达量也呈现上升趋势;淋巴结转移数增加，外周血中miR-31的表达量也随之增加，提示miR-31水平升高与CRC肿瘤的进展有关。血清中miR-31诊断CRC的灵敏度和特异度分别为75.3%和60.2%，ROC曲线下面积为0.75，对于CRC的诊断准确性良好:提示血清miR-31可作为诊断CRC的一个新的标志物，并且具有较好的敏感性和特异性。

综上所述，血清miR-31水平升高与CRC的进展相关。血清miR-31是一个较好的诊断CRC的非侵入性肿瘤标志物，具有较好的敏感度和特异度。但需要更多大样本多中心前瞻性试验来证实其临床应用价值。

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收稿日期:( 2015-06-22)

通信作者:熊兵红

文章编号:1002-266X(2015)37-0060-02

文献标志码:B

中图分类号:R735.3

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.37.023