壮骨止痛方无水乙醇提取A部位对去势雌鼠骨质疏松模型的疗效分析

刘长明 张征

（承德市食品药品检验检测中心，河北 承德 067000）

壮骨止痛方无水乙醇提取A部位对去势雌鼠骨质疏松模型的疗效分析

刘长明 张征

（承德市食品药品检验检测中心，河北 承德 067000）

目的：通过建立去卵巢雌鼠骨质疏松模型，研究壮骨止痛方无水乙醇提取A部位对骨质疏松症的疗效。方法：选取250 g左右的SD雌性大鼠60只，按体质量随机分为正常组、假手术组、模型组、壮骨止痛方组与壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组。各组均于5 d拆线后给药，连续13周。从骨密度、骨生物力学、血清雌激素（E2）、甲状旁腺激素（PTH）、降钙素（CT）、骨钙素（BGP）水平及光镜下骨小梁形态方面对其疗效进行评价。结果：壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组大鼠的股骨密度与腰椎骨密度显著高于模型组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组大鼠的胫骨最大应力与胫骨最大抗弯强度较模型组显著增强，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）。与模型组大鼠相比，壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组的血清E2有显著增高的趋势，而PTH，CT，BGP显著下降，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）。结论：壮骨止痛方无水乙醇提取A部位可有效改善骨韧性，提高骨骼抵抗外力冲击的能力，对于骨质疏松症具有较好疗效。

壮骨止痛方无水乙醇提取A部位；骨质疏松；疗效

骨质疏松症（osteoporosis，OP）是指以骨量减少、骨组织微细结构破坏为主要特征，骨矿物质和骨基质比例减少，导致骨骼脆性增加的一种全身性疾病。临床主要表现为腰背疼痛、易发生骨折等[1]。据统计我国目前女性原发性骨质疏松症的发病率已高达90.48%，尤其多发于绝经后妇女。因此找到一种有效预防及治疗女性骨质疏松症的途径，已成为当前亟需解决的课题[2]。壮骨止痛方为传统方剂，具有补肾气、温肾阳、壮骨止痛的功效[3]。本研究对壮骨止痛方中无水乙醇提取A部位对去势雌鼠骨质疏松模型的骨质影响进行实验分析，以探讨后者对于骨质疏松症治疗中的临床价值。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物

3月龄SD雌性大鼠60只，体质量均在250 g左右，由××省医学实验动物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 适应性饲养1 w，随机分出空白组和假手术组各15只，模型组、壮骨止痛方组、壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组各10只。除空白组外，其余大鼠均用2%的戊巴比妥钠麻醉，假手术组仅在卵巢周围切除相应质量的脂肪，其余摘除双侧卵巢，缝合伤口。术后连续3 d肌注青霉素（4万U/d）。饲养室温为23～ 25℃，相对湿度为50%～70%。

1.2.2 给药方法 各组均于5 d拆线后给药，ig，qd，连续13 w。假手术组、空白组和模型组相应体积冷开水和植物油ig，qd；其余各组相应药物（水相6 m L/kg；油相4 m L/kg）ig，qd。壮骨止痛方相当于生药13.2 g/kg，ig，qd，无水乙醇提取A部位0.12 g/kg，ig，qd。

1.2.3 检测指标及方法 ①13 w后所有大鼠均腹腔注射2%戊巴比妥钠麻醉。取右侧股骨、第2～ 4腰椎，以Unigamma骨密度仪检测骨密度。②取左侧胫骨作骨生物力学检测，包括骨最大弹性应力、最大抗弯强度等指标。③腹部切口，分离腹主动脉，用负压采血管采血，离心取血清，采用放射免疫法检测雌激素（E2），甲状旁腺激素（PTH），降钙素（CT），骨钙素（BGP）等。④光镜下观察左侧股骨骨小梁形态学变化。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 骨密度检测比较

股骨密度检测结果显示，空白组与模型组比较，t=19.96，P＜0.001；假手术组与模型组比较，t=9.69，P＜0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=14.11，P＜0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=10.27，P＜0.001。腰椎骨密度检测结果显示，空白组与模型组比较，t=11.70，P＜0.001；假手术组与模型组比较，t= 15.54，P＜ 0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t= 10.13，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=9.56，P＜ 0.001。壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组大鼠的股骨密度与腰椎骨密度显著高于模型组，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）；空白组与模型组比较，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）。见表1。

2.2 骨生物力学检测比较

胫骨最大应力检测结果显示，空白组与模型组比较，t=9.19，P＜ 0.001；假手术组与模型组比较，t=9.44，P＜0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=13.77，P＜0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取 A部位组与模型组比较，t=13.32，P＜0.001。胫骨最大抗弯强度检测结果显示，空白组与模型组比较，t=7.84，P＜0.001；假手术组与模型组比较，t=6.25，P＜0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=7.39，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=9.86，P＜0.001。壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组大鼠的胫骨最大应力与胫骨最大抗弯强度较模型组显著增强，差异具有统计学意义（P＜ 0.05）。空白组与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 骨密度检测比较

表2 骨生物力学检测比较

2.3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比较

血清E2检测结果显示，空白组与模型组比较，t=12.77，P＜ 0.001；假手术组与模型组比较，t=20.61，P＜0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=8.57，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=5.67，P＜ 0.001。PTH检测结果显示，空白组与模型组比较，t=7.58，P＜0.001；假手术组与模型组比较，t= 8.82，P＜0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=7.20，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=4.13，P＜ 0.001。CT检测结果显示，空白组与模型组比较，t=4.78，P＜ 0.001；假手术组与模型组比较，t=2.36，P=0.028；壮骨止痛方组与模型组比较，t=4.93，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t=6.19，P＜0.001。BGP检测结果显示空白组与模型组比较，t=5.17，P＜ 0.001；假手术组与模型组比较，t=4.59，P＜ 0.001；壮骨止痛方组与模型组比较，t=3.65，P＜ 0.001；壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组与模型组比较，t= 3.26，P=0.004。与模型组大鼠相比，壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组的血清E2增高，而PTH，CT，BGP显著下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。空白组与模型组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比较

3 讨论

骨质疏松症最突出的临床表现即为骨脆性增加导致骨折风险增高[4]。女性在绝经后由于雌激素水平低下，大量骨矿物质丢失，发生骨小梁变细、穿孔甚至消失等退行性改变，骨体积下降[5-7]。同时骨矿物含量的减少也造成了骨小梁本身材料性能的改变，骨小梁正常的生物力学结构和性能遭到破坏，强度下降，特定的承载部位如股骨颈等无法承受正常载荷，轻微外力作用即可发生骨折[8-10]。

壮骨止痛方无水乙醇提取A部位为补骨脂和女贞子的提取物。补骨脂具有较强的雌激素作用[11]。有文献报道，补骨脂95%乙醇提取物具有增强成骨细胞的增殖以及碱性磷酸酶（ALP）活性的作用，可明显增进成骨细胞的生长以及ALP的分泌，从而发挥有效的防治骨质疏松的作用[12-13]。此外女贞子具有促成骨细胞增殖作用[14]。研究发现，女贞子在促成骨细胞增殖方面作用比淫羊藿更强，提示以女贞子为代表的补肾阴类药物对骨质疏松症同样有较好的治疗作用[15]。

本实验中所采用的由雌鼠去势造成绝经后骨质疏松症模型的方法已被国内外所公认。实验结果显示，与空白组和假手术组相比，模型组大鼠的股骨和腰椎骨密度显著下降（P＜ 0.05），血清学检测血清E2水平亦较正常组与假手术组显著降低（P＜ 0.05），说明绝经后骨质疏松症病理模型造模成功。给药后，与模型组比较，壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组的骨密度显著增加（P＜0.05），同时胫骨最大应力与胫骨最大抗弯强度显著增强（P＜ 0.05），说明壮骨止痛方无水乙醇提取A部位增加了大鼠的骨量，提高了骨的机械性能，增强了骨的承载能力，提高了骨的生物力学性能和骨强度。此外与模型组大鼠相比，壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组的血清E2有显著增高的趋势，而PTH，CT，BGP显著下降，提示壮骨止痛方无水乙醇提取A部位具有促进骨形成，降低骨转换，抑制骨吸收的作用。

光镜下显示，正常组与假手术组大鼠骨小梁分布均匀，梁髓比正常；模型组骨小梁稀疏，骨髓腔扩大，梁髓比明显下降。壮骨止痛方无水乙醇提取A部位组骨小梁密度分布比较均匀，梁髓比基本正常，镜下可见成骨细胞，提示壮骨止痛方无水乙醇提取A部位能有效逆转骨质疏松模型雌大鼠的骨组织病理改变。

总之，壮骨止痛方无水乙醇提取A部位可有效增加骨密度和骨强度，其作用机制或许在于发挥雌激素样作用，可在一定程度上改善由于雌激素缺乏所造成的激素代谢紊乱现象，通过调节细胞因子起到降低转换，促进骨形成的作用，从而增加去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度和骨强度。文献报道指出[16]，无水乙醇提取 A部位已被证实为是壮骨止痛方的主要药效部位，除此之外，壮骨止痛方还含有无水乙醇提取B部位、石油醚提取A部位、水提A部位、水提B部位、乙酸乙酯提取A部位等有效部位。

综上所述，证实壮骨止痛方无水乙醇提取A部位可有效改善骨韧性，提高骨骼抵抗外力冲击的能力，对于骨质疏松症具有较好疗效。

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Curative Effects Analysis of Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position on Osteoporosis M odel of Ovariectom ized Female Rats

Liu Changm ing，Zhang Zheng （Chengde Food and Drug Inspection and Testing Center,Hebei Chengde 067000, China）

Objective:To study the curative effects of osteoporosis by zhuangguzhitong formula anhydrous ethanol extract A position through building an osteoporosis model of ovariectom ized female rats.Methods:Sixty SD female rats about 250 g each were selected and divided into normal group,control group,model group,zhuangguzhitong formula group,and zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group based on the rat weights.All groups were given medicines 5 days later after taking out stitches and lasted for 13 weeks.The curative effects were evaluated from bone m ineral density,bone biomechanics,serum levels of estrogen （E2）,parathyroid hormone（PTH）,calcitonin（CT）,osteocalcin（BGP）levels,and trabecular bone morphology.Results:The bone mineral density of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.The maximum stress and bending resistance of the shinbone of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly stronger than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Compared w ith the modelgroup,E2of zhuangguzhitong and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher,while PTH,CT,and BGP were significantly lower,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Conclusion:Zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A position can effectively improve the bone toughness,improve the ability of bone to resist external shocks and proved a good curative effect on osteoporosis.

Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position；Osteoporosis；Curative Effect

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.07.007

2015-03-17）

刘长明，女，主管药师。研究方向：药理药效学。E-mail：cdliuchangm ing@126.com