龙血竭喷雾膜剂的质量控制*

李宜航，宋美芳，吕亚娜，李学兰 ，陈曦，2

(1.中国医学科学院药用植物研究所云南分所，景洪 666100；2.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193)

龙血竭喷雾膜剂的质量控制*

李宜航1，宋美芳1，吕亚娜1，李学兰1，陈曦1，2

(1.中国医学科学院药用植物研究所云南分所，景洪 666100；2.中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193)

目的 研究龙血竭喷雾膜剂的质量控制方法。方法 测定喷雾膜剂的pH和黏度，纳米粒度仪联用显微镜检测龙血竭喷雾膜剂的药物分散均匀程度和粒径；采用超高效液相色谱法对龙血素B含量进行测定。Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)；检测波长为280 nm；柱温40 ℃。流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈，流速0.8 mL·min-1。结果 龙血竭喷雾膜剂的pH和黏度稳定；药物分散较均匀，药物粒径小；龙血素B浓度在15.51～77.54 μg范围内线性关系良好。结论 该方法准确可控，稳定性强，重复性好，可较全面控制龙血竭喷雾膜剂的质量。

龙血竭喷雾膜剂；龙血素B；黏度；粒径

龙血竭为百合科剑叶龙血树[Dracaenacochinchinensis(Lour.)S.C.Chen]的树脂，具有活血散瘀、镇痛止血、敛疮生肌的功效，在临床应用中，龙血竭粉末或乙醇溶液外用治疗糖尿病足溃疡、压疮和软组织损伤等症均取得理想的疗效[1-4]。龙血竭经皮给药不但可以在病灶处产生较高的血药浓度，而且避免肝脏首关效应和胃肠道不良反应，但是目前市场上未见商品化的龙血竭外用制剂。龙血竭喷雾膜剂是根据龙血竭临床应用开发研制的外用制剂，具有抗菌、促进溃疡愈合的功效。其以喷雾的形式给药于皮肤，溶剂快速挥发后形成均一、透明的聚合物薄膜，药物均匀分散在薄膜中，达到定量给药和覆盖创面的效果。笔者对该制剂的质量控制方法进行研究，报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters Acquity H-Class超高效液相色谱仪(沃特世公司)；Zetasizer nano纳米粒度分析仪(Malvern公司)；DM4000B莱卡显微镜及成像系统(德国Leica公司)；KQ250E超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；UPW-Ⅱ90Z超纯水机(成都超纯科技有限公司)；NDJ-5S数字式黏度计(上海方瑞仪器有限公司)；PHSJ-4A型pH计(上海雷磁)；ABS265-S电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司，感量：0.001 mg)。

1.2 试药 乙腈(色谱纯，Fisher Scientific公司，批号：112189)；甲醇(色谱纯，Fisher Scientific公司，批号：126863)；无水乙醇(分析纯，北京化工厂，批号：20121112)；龙血素B对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111558-201006)。龙血竭喷雾膜剂样品(中国医学科学院药用植物研究所云南分所研发中心，批号：130407，130411，130412，130718，130720)。

2 方法与结果

2.1 一般性质 龙血竭喷雾膜剂为红色澄清液体，分别测试5批次喷雾膜剂的pH和黏度，结果见表1。不同批次龙血竭喷雾膜剂的黏度和pH不完全相同，但RSD均<2%，可认为该制剂此两项性质比较稳定。

表1 5批龙血竭喷雾膜剂黏度和pH测定结果

Tab.1 Determination results of viscosity and pH values in five batches of dragon's blood spraying film

2.2 药物分散和均匀程度检测

2.2.1 显微观察 将龙血竭喷雾膜剂喷于干净载玻片，自然干燥后，使用显微镜对药物膜进行观察，分别设置龙血竭水溶液和龙血竭乙醇溶液作为对照。见图1。喷雾膜剂中，药物均匀分布，颗粒粒径均匀而且较小，与龙血竭在乙醇中溶解状态接近。50%乙醇过饱和的龙血竭略有沉淀，显微镜下可见龙血竭颗粒，药物粒径较大；而纯水中龙血竭完全不溶，十分浑浊，显微镜下呈泥沙状。

2.2.2 药物粒径的测定 使用纳米粒度分析仪对龙血竭喷雾膜剂进行检测，对膜剂中的药物颗粒直径进行测量和定量分析。结果见表2。不同批次的喷雾膜剂中药物平均粒径为274.8 nm，而且RSD较小，可以认为不同批次样品中药物平均粒径一致。在光强分布图中，可以看到喷雾膜剂中主要存在两种粒径相差较大的颗粒，分布宽度系数(PDI)<0.7，可以认为仪器动态光散射获得的粒径平均值是可信的。因此可以得出结论：喷雾膜剂中存在不同直径的药物颗粒，其颗粒直径平均值为274.8 nm。见图2。

2.3 龙血素B的含量测定

2.3.1 色谱条件 Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)，预柱为BEH-C18(2.1 mm×5 mm，1.7 μm)，柱温40 ℃。流动相：0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)，采用梯度洗脱的方式进行色谱分离，0～10 min，25%A；～20 min，25%→40%A；～30 min，40%→45%A，流速0.8 mL·min-1，检测波长280 nm，检测器为Waters 2998 PDA检测器。

2.3.2 对照品溶液的制备和线性范围的考察 精密称定龙血素B 7.754 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容，配制成77.54 μg·mL-1的对照品溶液。精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μL，注入高效液相色谱仪。以龙血素B浓度(C)为横坐标，色谱峰峰面积(A)为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为A=2 297.57C-4 120.6(r=0.999 4)，龙血素B在15.51～77.54 μg范围内呈良好线性关系。

2.3.3 样品溶液的制备 取龙血竭喷雾膜剂1 mL，置具塞试管中加入纯水10 mL，充分振荡混匀后过滤。滤液重复加水充分混匀后滤过，滤渣加入甲醇5 mL充分溶解，转入25 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容，摇匀备用。

2.3.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液5 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。连续进样5次，每次10 μL，测得龙血素B峰面积的RSD为1.3%。

2.3.5 重复性实验 取同一批龙血竭喷雾膜剂样品(批号：130411)6份，按“2.3.3”项制备供试品溶液测定龙血素B含量，结果该批次样品中龙血素B含量平均值为42.73 μg·mL-1，RSD=1.2%，说明该方法具有较好的重复性。

Tab.2 Determination on drug particle size of different batches of spraying film

2.3.6 稳定性实验 同一样品溶液，于室温下放置0，4，8，10，12，24 h后分别进行测定，结果龙血素B含量的RSD=0.96%，说明样品溶液在室温下放置24 h稳定。

2.3.7 样品的含量测定 精密量取5个批号的龙血竭喷雾膜剂，按照样品溶液配制方法处理后，每份进样10 μL，进行分析；并取龙血素B对照品溶液10 μL以相同条件进样测定。结果见图3。通过与对照品谱图对比，确认5号峰为龙血素B。通过标准曲线计算，龙血素B在喷雾膜剂中平均含量为42.46 μg·mL-1，保留时间为18.6 min，不同批次样品的龙血素B含量RSD为1.51%，表明不同批次样品之间差异较小。见表3。

Fig.3 UPLC chromatogram of Dragon's blood spraying film

表3 不同批次喷雾膜剂中龙血素B含量

Tab.3 Loureirin B content in different batches of spraying film

3 讨论

喷雾膜剂能结成膜状覆盖在患处，同时形成微小而致密的小孔，因而能使伤口在保持一定的透气性的同时，又能防止细菌等进入患处引发炎症和二次感染[5-6]，是一种便携、小型创面应急处理药物剂型，广泛应用于烧烫伤、皮肤软组织创伤、冻疮溃烂及溃疡等疾病[7-8]。但是目前2010版《中华人民共和国药典》中并未对喷雾膜剂的质量控制方面做出明确的规定，因此本课题组参考《中华人民共和国药典》中对喷雾剂和涂膜剂质量控制的研究方法，兼顾喷雾膜剂的物理性质，建立龙血竭喷雾膜剂质量控制体系。

在质量控制方面首先对喷雾膜剂的一般性质进行观察，其中喷雾膜剂的黏度会直接影响喷雾状态和创面附着效果、pH过高或者过低可能会产生强烈的刺激性，因此列为一般性质中的主要考察项目。另外，引进马尔文纳米粒度仪和电子显微镜用于对药物的分散状态进行量化描述和直观观察。药物分散状态包括两个方面，一方面是药物分散均匀程度，一方面是药物粒径，分别与定量给药和药物吸收速度相关。在成分控制方面，对龙血素B含量进行定量检测。

本次实验结果表明，龙血竭喷雾膜剂的黏度和pH稳定，药物分布比较均匀，药物颗粒平均直径274.8 nm，制剂中龙血素B含量变异小。测定方法结果稳定，重复性好，证明该方法适用于龙血竭喷雾膜剂的质量控制。

[1] 余清，胡庭芬，彭守江.龙血竭外治糖尿病足溃疡的临床观察[J].内蒙古中医药，2010，29(18)：32.

[2] 曾凡荣，黄涛.龙血竭外用治疗压疮的效果观察[J].临床护理杂志，2007，6(3)：80.

[3] 余德文，杨宇，杨海捷，等.龙血竭乙醇液与云南白药气雾剂治疗急性软组织损伤的临床对照研究[J].中华保健医学杂志，2013，15(2)：181-182.

[4] 蓝九红.微波辐射联合纳米银凝胶和龙血竭治疗宫颈糜烂 50 例[J].医药导报，2009，28(9)：1146-1147.

[5] 朱小凤，魏刚，何坦，等.双柏喷雾剂与双柏喷膜剂制备工艺比较[J].中国实验方剂学杂志，2012，17(24)：4-6.

[6] 叶玉杰，舒翔，刘敏，等.贝马喷膜剂的质量控制[J].医药导报，2013，32(7)：939-941.

[7] 王超君，谷娜，孙义峰，等.创面用复方喷雾膜剂的制备及其性质研究[J].东南国防医药，2013，15(6)：577-580.

[8] 康建功，王汝琴，吴敬德.烧伤喷膜气雾剂的研制和应用[J].中国现代应用药学，1998，15(3)：32.

DOI 10.3870/yydb.2015.06.028

Quality Control of Dragon's Blood Spraying Film Agent

LI Yihang1, SONG Meifang1,LYU Yana1, LI Xuelan1, CHEN Xi1，2

(1.YunnanBranchInstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Jinghong666100,China； 2.InstituteofMedicinalPlant,ChineseAcademyofMedicalSciences,Beijing100193,China)

Objective To study the quality control methods for dragon's blood spraying film agent. Methods The pH value and viscosity of dragon's blood spraying film agent were detected.Drug dispersed homogeneous degree and particle sizes were determined with Nano Particle Size Analyzer and microscope.Content of Loureirin B was measured by Ultra Performance Liquid-Chromtography (UPLC).UPLC was performed on Waters BEH C18column (2.1 mm×100 mm,1.7 μm), the wavelength was 280 nm, the column temperature was 40 ℃, and the mobile phase was 0.1% formic acid aqueous solution and acetonitrile, and the flow rate was 0.8 mL·min-1. Results The pH value and viscosity of dragon's blood spraying film agent were stable, drug dispersion was homogeneous, and particle size of the drug was tiny.The concentration of Loureirin B had a good linear relationship in the range of 15.51-77.54 μg. Conclusion This method can be accurately controlled, has good stability and repeatability, and can fully control quality of dragon's blood spraying film agent.

Dragon's blood spraying film； Loureirin B； Viscosity； Particle size

2014-02-17

2014-03-28

*中央级公益性科研院所基本科研业务专项(YZYN-12-01)

李宜航(1984-)，男，云南景洪人，实习研究员，硕士，研究方向：中药药理学。电话：(0)15087657871，E-mail：yihang_313@126.com。

陈曦(1973-)，男，北京人，副研究员，博士，研究方向：药物活性筛选、药动学。电话：010-57833257，E-mail：chenxi@implad.ac.cn。

R286；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0805-04