硫辛酸对糖尿病下肢周围动脉病患者内皮微粒的影响*

丁胜，赵湜，王中京，张旭艳

(武汉市中心医院内分泌科，武汉 430014)

·药物与临床·

硫辛酸对糖尿病下肢周围动脉病患者内皮微粒的影响*

丁胜，赵湜，王中京，张旭艳

(武汉市中心医院内分泌科，武汉 430014)

目的 评价硫辛酸注射液对糖尿病下肢周围动脉病(PAD)患者循环血中内皮微粒(EMP)的影响。方法 48例2型糖尿病下肢周围动脉病患者随机分为两组，对照组24例仅给予内科综合治疗，治疗组24例在内科综合治疗基础上，给予硫辛酸注射液600 mg加入0.9%氯化钠注射液250 mL，静脉滴注，每天1次，疗程均为3周。两组患者在治疗前后均采集静脉血，采用流式细胞术测定患者血浆EMP水平，并记录踝动脉-肱动脉血压比值(ABI)。 结果 治疗组治疗后EMP为(1 032.4±117.2)个·μL-1，较治疗前显著降低(P<0.01)，明显低于对照组治疗后(1 179.8±120.1)个·μL-1(P<0.01)；治疗组治疗后ABI指数为(0.68±0.10)，较治疗前明显增加(P<0.01)，且明显高于对照组治疗后(0.58±0.11)(P<0.01)。 结论 硫辛酸注射液可明显降低糖尿病下肢PAD患者循环血中EMP水平，对糖尿病下肢PAD有显著疗效。

硫辛酸；内皮微粒；糖尿病；周围动脉病

近年来，我国糖尿病患病率持续攀升，糖尿病截肢患者中因并发糖尿病足截肢者高达28.2%[1]。2型糖尿病下肢周围动脉病(peripheral artery disease，PAD)患者中，血管内皮功能障碍是其病理生理基础。内皮细胞在激活或凋亡过程中能释放内皮微粒(endothelial microparticles，EMP)[2]。研究提示EMP在糖尿病尤其是糖尿病并发PAD患者血浆中数量增多，它参与内皮损伤、血管炎症，导致内皮功能障碍，可直接特异的反映内皮细胞的功能状态，同时对血管网的形成起负面作用[3-4]。氧化应激是2型糖尿病下肢PAD患者内皮损伤的主要机制之一，高血糖可通过多种途径介导产生过多的自由基，导致氧化系统与抗氧化系统失衡[5]。硫辛酸是一种强效天然抗氧剂，可清除活性氧和自由基，纠正高血糖引起的内皮衍生物超极化因子和一氧化氮异常，调节一氧化氮介导内皮依赖性血管舒张[6]。已有研究显示硫辛酸对糖尿病足具有一定的疗效[7]，但未见硫辛酸用于治疗PAD对EMP的影响的研究报道。2013年6月—2014年6月笔者应用硫辛酸治疗2型糖尿病下肢PAD，观察其疗效及降低血浆EMP水平的情况。报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 48例武汉市中心医院内分泌科住院患者，按世界卫生组织(WHO)1999年标准诊断为2型糖尿病，入选患者均符合糖尿病下肢PAD诊断标准[8]：踝动脉-肱动脉血压比值(ankle-brachial index，ABI)≤0.9；所有入选对象均排除糖尿病足并发活动性溃疡或湿性坏疽、严重感染、高血压病、冠心病、心肌病及心肌炎、恶性肿瘤、严重肝肾功能不全、妊娠、结缔组织疾病及自身免疫性疾病。48例患者中男27例，女21例，年龄38～78岁，平均57.5岁，糖尿病史5～20年，平均12.5年。患者按入院先后随机分为治疗组和对照组。两组患者性别、年龄、糖尿病病程、HbA1c、ABI 等方面比较均差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

1.2 治疗方法 患者均给予内科综合治疗，包括饮食控制、口服降糖药或胰岛素控制血糖、抗凝(口服阿司匹林肠溶片0.1 g，qd)、调脂(口服阿托伐他汀钙片10 mg，qd)、改善循环(丹参注射液400 mg加入0.9%氯化钠注射液250 mL，静脉滴注，qd)。治疗组在内科综合治疗基础上给予硫辛酸注射液[商品名：奥力宝，卫材(中国)药业有限公司，药品注册证号：H20110104]600 mg加入0.9%氯化钠注射液250 mL，静脉滴注，qd，共3周。

1.3 评估项目

1.3.1 ABI测定 治疗前后测定ABI，于标准仰卧位采用5 MHz多普勒超声探头测量上臂和踝部(胫后动脉或足背动脉)的收缩压，分别使用上臂和踝部的收缩压的最高值，ABI的计算为足背动脉或胫后动脉收缩压的最高值与两上臂收缩压的最高值之比。

1.3.2 血浆EMP测定 治疗前后检测血浆EMP计数。清晨空腹抽取静脉血3 mL置于真空枸橼酸盐抗凝试管中，采血后标本立即处理。以150×g离心10 min获血小板丰富血浆，继之以1 000×g离心2 min获血小板贫瘠血浆。取血小板贫瘠血浆50 μL，加入特异性荧光标记抗体(anti-CD144-PE，购自eBioscience，Inc.)0.5 μg或同等数量的同型对照抗体(流式专用抗体购自法国Beckman Coulter Immunotech公司)。在室温下孵育30 min后加磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution，PBS)1 mL即上流式细胞仪进行检测。以1 μm 微球设门(购自Sigma-aldrich公司)，EMP定义为<1.0 μm CD144阳性的微粒。每支检测的样本流式管中加入已知数量的绝对计数3 μm微球(购自Sigma-aldrich公司)。当收集500 000个绝对计数微球后停止计数，依据绝对计数微球的浓度计算出EMP浓度。

2 结果

两组患者治疗前EMP比较差异无统计学意义(t=0.401，P>0.05)，治疗组治疗后EMP水平显著降低(t=6.333，P<0.01)，对照组治疗后EMP水平无显著降低(t=1.730，P>0.05)；治疗组治疗后EMP水平明显低于对照组(t=4.303，P<0.01)。治疗组治疗前ABI在0.23～0.81，治疗后ABI明显升高(t=5.281，P<0.01)；对照组治疗前ABI在0.25～0.80，治疗后ABI无明显升高(t=1.506，P>0.05)，治疗组治疗后ABI明显高于对照组(t=3.300，P<0.01)。见表2。

3 讨论

1990年，HAMILTON等[9]第一次检测出一种直径为<1 μm的微粒并命名为EMP。研究证实冠心病、高血压病、糖尿病等一系列疾病中EMP升高[4，10-11]。EMP与2型糖尿病下肢PAD的发生密切相关，增多的EMP能独立预测内皮依赖性血管舒张功能的受损情况[2，4]；它能与白细胞相互作用促使静脉血栓的形成和炎性反应而导致血管损伤[12]；它还可通过减少毛细血管的长度、减少血管网的数量、减少分支点影响血管网形成[13]。本研究中治疗组治疗后EMP水平显著降低，治疗后EMP水平明显低于对照组，同时ABI的改善也与EMP水平改善相匹配；提示硫辛酸注射液联合内科常规综合治疗能有效降低糖尿病并发下肢血管病变者循环血中的EMP水平，可能通过减轻EMP对于PAD患者在血管网形成、炎症反应、内皮损伤等方面的负面效应，带来内皮细胞功能障碍改善。

表1 两组患者基线资料比较

表2 两组治疗前后血浆 EMP 水平与ABI比较

Tab.2 Comparison of EMP and ABI values between two groups of patients before and after treatment

与同组治疗前比较，*1P<0.01；与对照组治疗后比较，*2P<0.01

Compared with the same group before treatment,*1P<0.01；Compared with control group after treatment,*2P<0.01

我国糖尿病患者治疗达标率仅25%[14]。长期持续高血糖作用导致超氧自由基(ROS)持续生成，过多的ROS参与氧化应激，并导致血管内皮功能障碍及神经微循环障碍[15-16]。氧自由基能抑制内皮细胞增殖，激活 NF-κB 核转录因子，加强白细胞与内皮细胞相互作用而促进血管内皮功能损伤的发生和发展[17]。硫辛酸注射液作为抗氧化应激的代表性药物可以有效阻断这一不良过程，改善微循环、保护血管内皮功能。此外，研究显示氧化应激可以使细胞对胰岛素产生抵抗，硫辛酸注射液则可以增加胰岛素刺激的葡萄糖代谢能力，提高胰岛素的敏感性，有益于控制血糖，进一步减少ROS生成[18]。

ABI指数用于筛查糖尿病并发PAD具有良好的诊断价值[19]。本研究观察到治疗组治疗后ABI指数较治疗前明显增加，且明显高于对照组。其原因考虑有硫辛酸提高胰岛素敏感性，辅助控制血糖带来的获益；更重要的是硫辛酸作用于线粒体，阻断氧化应激通路，保护血管内皮功能。硫辛酸注射液一直被用作糖尿病周围神经病变的经典药物，本研究提示将其应用于糖尿病下肢PAD患者尤其是ABI值在约0.5患者有较大的治疗潜力。对照组采用内科综合治疗后ABI指数仅略有升高，原因可能是常规内科综合治疗2型糖尿病下肢PAD患者获得显效过程缓慢，适当延长治疗时间，仍可能观察到ABI指数的显著升高。

硫辛酸注射液降低2型糖尿病下肢PAD患者EMP水平，且治疗糖尿病下肢PAD患者的近期疗效肯定。但本研究样本量有限，随访观察时间较短，后续更大样本的多中心、分层、分组研究可望进一步明确硫辛酸注射液应用于糖尿病下肢PAD的疗效与可行性，并观察分析不同程度PAD患者的循环血中的EMP水平变化情况，获得更为充分的循证医学证据。

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DOI 10.3870/yydb.2015.06.017

Effect of Lipoic Acid Treatment on Endothelial Microparticles in Patients with Diabetic Peripheral Artery Disease in Lower Limbs

DING Sheng, ZHAO Shi, WANG Zhongjing， ZHANG Xuyan

(DepartmentofEndocrinology,WuhanCentralHospital,Wuhan430014China)

Objective To evaluate the effect of lipoic acid on endothelial microparticles (EMP) in diabetic patients with peripheral artery disease (PAD) of the lower limbs. Methods Forty eight diabetic patients with PAD of the lower limbs were randomly divided into two groups: the therapeutic group and control group (each group has 24 cases).Patients of control group only

internal comprehensive medicine therapies for 3 weeks.Patients of therapeutic group were treated with both lipoic acid (600 mg lipoic acid injection in normal saline solution for intravenous drip, once daily for 3 weeks) and internal comprehensive medicine therapies at the same time.The levels of EMP in venous blood and Ankle-brachial index (ABI) were estimated before and after treatment by flow cytometry. Results Compared to the control group after treatment [(1 179.8±120.1) per μL], EMP value showed a significant reduction in therapeutic group [(1 032.4±117.2) per μL] (P<0.01).The levels of ABI of therapeutic group (0.68±0.10) was increased obviously as compared that before lipoic acid treatment (P<0.01).Patients treated with lipoic acid showed the higher levels of ABI than the control group after treatment (0.58±0.11) (P<0.01). Conclusion Lipoic acid injection significantly decreased the level of EMP in diabetic patients with PAD of lower limbs.Lipoic acid might be an effective drug for diabetic patients with PAD.

Lipoic acid； Endothelial microparticles； Diabetes mellitus； Peripheral artery disease

2014-08-10

2014-11-19

*武汉市卫生局临床医学科研基金资助项目(WX12C24)

丁胜(1979-)，男，湖北天门人，主治医师，硕士，研究方向：内分泌及代谢性疾病。电话：027-65699893，E-mail：doctordingsheng@163.com。

赵湜(1954-)，女，辽宁大连人，主任医师，硕士生导师，研究方向：内分泌及代谢性疾病。电话：027-82211474，E-mail：zhaoshiwuhan@126.com。

R977.15；R587.1

B

1004-0781(2015)06-0762-04