RP-HPLC测定六味地黄丸中马钱苷的含量

王 聪

（河南省郑州市第一人民医院药剂科，郑州 450000）

RP-HPLC测定六味地黄丸中马钱苷的含量

王 聪

（河南省郑州市第一人民医院药剂科，郑州 450000）

目的建立六味地黄丸中马钱苷的含量测定方法。方法 采用RP-HPLC法，色谱柱为Diamonsil C18柱(250 nm×4.6mm，5μm)，以乙腈：水=15∶85作为流动相，检测波长为240 nm，柱温为25℃，通过外标法对六味地黄丸中马钱苷的含量进行测定。结果 马钱苷线性回归方程为Y=1610725.1X-11981.2，在0.08～1.6μg范围内线性关系良好（r=0.9991），平均加样回收率为99.68%（RSD为1.07%）。结论 该方法准确，简便，重复性好，灵敏度高，可用于对六味地黄丸的质量评价及质量控制。

六味地黄丸；马钱苷；高效液相色谱法

六味地黄丸是棕褐色的浓缩丸，味甜而酸，由熟地黄、山茱萸、牡丹皮、山药、茯苓、泽泻六味药组成。六味地黄丸是中医补益剂中滋补肾阴的代表方剂，在中药中占有很重要的地位，其功能是滋阴补肾，主要用于肾阴亏损，头晕耳鸣，腰膝酸软，骨蒸潮热，盗汗遗精，消渴[1]。该方的主要成分有熊果酸，齐墩果酸等有机酸类[2]，泽泻醇ABC[3]等萜类及芍药苷，马钱苷等苷类[4]。马钱苷是六味地黄丸的有效成分，为提升六味地黄丸的质量控制标准，保证制剂有效成分含量的稳定性和可靠性，本文建立了用高效液相色谱法测定六味地黄丸中的马钱苷含量的方法，并证明该方法简便，快捷，可用于质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters2695高效液相色谱仪（配Waters2998紫外检测器，Empower色谱工作站）；DT-100电子分析天平 (北京光学仪器厂)，DL-360A超声清洗机 (上海之信仪器有限公司)；MIL-LI-QB纯净水发生器（美国MILLIPORE公司）；SHZ-D（Ⅲ） 型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；HH-6型数控恒温水浴锅（上海比朗仪器有限公司）；EYELA N-1100旋转蒸发仪 （上海爱朗仪器有限公司）。

1.2 试药 九芝堂六味地黄丸浓缩丸 (批号：1201037、1201041、1201051，九芝堂股份有限公司)；马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111640-200503，五氧化二磷减压干燥12h以上）；乙腈（HPLC级，Grace Company INC）；甲醇（分析纯，天津四友精细化学品有限公司）；其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 马钱苷的含量测定

2.1.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱：Diamonsil C18柱 (250 nm×4.6mm，5μm)，柱温为25℃；流动相：乙腈-水 (15：85)；检测波长为240nm，理论塔板数按马钱苷峰计算应不低于2000。

2.1.2 对照品溶液的制备 取马钱苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇制成每1m l含80μg马钱苷的溶液，即得。

2.1.3 供试品溶液的制备 取六味地黄丸浓缩丸50粒，研磨，取粉末约1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入50%的甲醇25mL，称定重量，超声提取60min，放冷，再称定重量，用50%的甲醇补足减少的重量，摇匀，过0.22μm的滤膜，即得供试品溶液。

2.1.4 阴性对照溶液的制备 按处方量制备不含山茱萸的阴性对照药材，按“2.1.3”方法进行处理，得阴性对照溶液。

2.1.5 专属性试验 精密吸取对照品、供试品及阴性对照溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测试，结果阴性对照色谱中，在与对照品和药材出峰时间处没有相应的色谱峰，表明其他组分对马钱苷无干扰，结果见图1。

图1马钱苷HPLC色谱图

2.1.6 线性关系考察 按以上色谱条件，分别用自动进样器进1、2、4、8、10、20μL，按以上色谱条件下进行测定，以峰面积为纵坐标，以马钱苷进样量为横坐标，得到线性回归方程Y=1610725.1X-11981.2，r=0.9991；结果表明，马钱苷在0.08～1.6μg范围内线性关系良好。

2.1.7 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样5次，每次10μL，记录马钱苷的峰面积，计算精密度的RSD为1.01%，表明仪器的精密度良好。

2.1.8 重复性试验 取六味地黄丸样品5份，按“2.1.3”项方法将其制备成供试品并按照上述色谱条件测定马钱苷的含量，记录马钱苷的峰面积，计算RSD值为2.31%，表明重复性良好。

2.1.9 加样回收率实验 取已知含量（含2.63mg/g马钱苷） 的六味地黄丸约0.5g，共9份，精密称定，分为3组，每组分别加入质量浓度为1.247mg/mL的马钱苷对照品0.8、1.0、1.2mL，按照以上供试品的制备方法制备供试品以及按上述色谱条件进行测定，结果显示马钱苷的加样回收率的RSD为1.07%，见表1。

表1马钱苷的加样回收率结果 [例（%）]

2.2 样品的测定 取3批六味地黄丸样品（1201037，1201041，1201051），每批取6份，按照以上制备方法及色谱条件测定，记录色谱峰面积并计算，测定结果见表2。

表2六味地黄丸样品中马钱苷含量测定结果 （%）

3 讨论

3.1 流动相的考察 实验中对不同系统的流动相进行了筛选考察，包括：乙腈-水溶液、乙腈-0.05%磷酸水溶液、甲醇-水溶液；结果表明：把乙腈-水溶液做为流动相时效果最佳，色谱峰峰型及分离度均良好，且保留时间适宜，故选择乙腈-水溶液作为流动相。

3.2 提取方法的考察 六味地黄丸为中药复方制剂，对其进行供试品制备的方法主要有超声[5]，回流提取[6]两种方法，故本文分别对这两种方法进行了考察，结果发现回流提取法提出马钱苷的含量和超声法提出的马钱苷含量相比，无太大差异，因超声提取法操作简便，故选择超声提取法作为供试品的制备方法。

3.3 提取溶媒的考察 分别采用甲醇，50%甲醇，70%的甲醇为提取溶媒，对其进行考察，发现不同溶媒对马钱苷的提取量有微小差异，最终确定以50%甲醇为提取溶媒。

六味地黄丸因其良好的疗效及较为低廉的价格，在临床上广泛应用。我们通过HPLC方法对六味地黄丸中的马钱苷进行含量测定，更科学、合理、全面地对山茱萸提取物进行质量评价和控制，有利于生产及产品质量的保证，我们建立的六味地黄丸中马钱苷的含量测定方法，该法有良好的专属性，灵敏度，且重现性好，可作为六味地黄丸中马钱苷的含量测定方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版一部）[S].北京:中国医药科技出版社，2010:26.

[2]熊筱娟，邹盛勤，徐明，等.HPLC-PAD法测定市售六味地黄丸中熊果酸和齐墩果酸的含量[J].中成药，2008，30(12):1789-1791.

[3]曾常青，曾宇，赵越，等.六味地黄汤中4种有效成分的含量测定[J].中国医院药学杂志，2007，27(8):1034-1036.

[4]赵新峰，孔宏伟，汪江山，等.UFLC-ESI-IT-TOF鉴定六味地黄丸中的化学成分和代谢成分[J].世界科学技术-中医药现代化，2009，11(1):153-157.

[5]励建荣，夏道宗.超声波和溶剂法提取山茱萸中总皂甙的工艺研究[J].食品科学，2005，26(4)：198-202.

[6]韩志慧，张景伟，赵玉丛，等.7种山茱萸总皂苷提取分离方法效果比较[J].郑州大学学报(医学版)，2005，40(3)：466-468.

Determination of Loganin in Liuwei Dihuang Pills by RP-HPLC

WANG Cong
(Pharmacy department,Zhengzhou First People's Hospital,Zhengzhou 450000,China)

ObjectiveTo develop an RP-HPLC method to determine the content of Loganin in Liuwei Dihuang pills.Methods Loganin was assayed by RP-HPLC.The condition is Acetonitrile-Purified Water（15：85）；wavelength 240nm；temprature 25℃.Results The linear regression equation is Y=1610725.1X-11981.2 (0.08～1.6μg),average recovery is 99.68（RSD=1.07%）.Conclusion Thismethod is sensitive,accurate and useful for the analysis of Loganin in Liuwei Dihuang pills.

Liuwei Dihuang pills;Loganin;RP-HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.02.078

1672-2779（2015）-02-0146-02

杨 杰 本文校对：胡春伟

2014-09-22）