HPLC法测定香砂平胃丸中橙皮苷的含量

陈艳梅 刘传辉

（1河南省商丘市食品药品检验所，商丘 476000；2河南省商丘市畜产品质检中心，商丘 476000）

HPLC法测定香砂平胃丸中橙皮苷的含量

陈艳梅 刘传辉

（1河南省商丘市食品药品检验所，商丘 476000；2河南省商丘市畜产品质检中心，商丘 476000）

目的建立香砂平胃丸中橙皮苷的含量测定方法。方法 采用Agilengt Eclipse Plus -C18色谱柱（150mm×4.6mm，5um）；流动相：甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）；流速：1.0m l·m in-1；检测波长283n m。结果 橙皮苷在0.0438～0.438μg范围内线性关系良好（r=0.9996），平均回收率为97.83%，RSD=0.81%（n=6）。结论 方法简便，灵敏，准确，可靠，可以作为香砂平胃丸中橙皮苷的含量测定方法。

香砂平胃丸；橙皮苷；高效液相色谱

香砂平胃丸[1]由苍术、陈皮、厚朴（姜制）、砂仁、木香、甘草加工制成。具健脾，舒气、止痛之功效，用于胃肠衰弱、消化不良、胸膈满闷、胃痛呕吐。

陈皮为方中君药，橙皮苷为陈皮特征成分[1-2]，原质量标准较为简单，无含量测定项，为了确保产品的质量，采用HPLC建立了该制剂中橙皮苷的含量测定方法，经方法学验证，重现性好，空白无干扰，可作为控制本制剂质量的分析方法。

1 仪器与试药

Agilengt 1260高效液相色谱仪（G1314F VWD检测器） Eclipse Plus-C18色谱柱 （150mm×4.6mm，5um）；岛津AUW220D电子分析天平 （精密至0.01mg） DSQ10260超声仪（功率300W，频率50HZ上海特惠电子仪器有限公司生产）。

橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110721-200512）；乙腈为色谱纯，醋酸为分析纯、水为重蒸馏水（本单位自制）。香砂平胃丸（商丘市金马药业有限公司提供：批号：13052221、13011101、12850121），阴性样品自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性 色谱柱：Agilengt Eclipse Plus-C18色谱柱 (4.6mm×100mm，5um)；流动相：甲醇-醋酸-水 （35∶4∶61）；流速：1.0ml·min-1；检测波长283nm[2]；柱温为30℃；进样量为5μl；在上述条件下，黄橙皮苷峰出峰时间为4.7分钟，橙皮苷峰与其他色谱峰分离度大于1.5，达到良好的分离效果，理论板数按橙皮苷峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品27.38mg，精密称定，置于25ml棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使完全溶解后，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，进样前经0.45um微孔滤膜滤过。

2.3 供试品及阴性对照溶液的制备 取本品约8.0g，研细，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸渍两小时，超声提取20分钟[3]，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液，进样前经0.45um微孔滤膜滤过。

另取按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的阴性对照品约8.0g，同法制成阴性对照溶液。进样前经0.45um微孔滤膜滤过。

2.4 标准曲线及线性范围 精密取对照品溶液，分别进样5μl，以2.1色谱条件，分别进样测定，记录橙皮苷峰面积，以进样量（ug） （X） 对峰面积（Y） 进行线性回归，得回归方程：Y=1800.92152X+2.29416 r=0.9996。橙皮苷在0.0438～0.438μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 干扰试验 精密取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各5μl，以甲醇-醋酸-水 （35：4：61）；流速：1.0ml.min-1；检测波长283nm；柱温为30℃；分别进样测定，记录色谱图，见图1。结果表明阴性对照对橙皮苷的测定无干扰。

图1香砂平胃丸的高效液相色谱图

2.6 精密度试验 精密取橙皮苷对照品溶液5ul，连续进样6次，记录橙皮苷峰面积，结果6次进样测得峰面积分别为：453.12923、455.74632、450.15987、455.62477、454.46251、455.77483，相对标准偏差 RSD=0.49%(n=6)，表明橙皮苷精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密取香砂平胃丸供试品溶液5ul，分别在0、2、4、8、12、16h进样测定，测得峰面积分别为：431.26608、430.56452、428.85475、429.62547、427、88340、429.62555，结果RSD=0.87%，表明供试品溶液在16小时内稳定性良好。

2.8 重复性实验 取同一批号样品（批号：13052221）5份，按2.3方法操作，并按上述色谱条件测定，测得峰面积并计算含量。结果橙皮苷含量平均1.308mg/g，RSD为1.31%，结果表明重复性良好。

2.9 加样回收率试验 采用加样回收法，称取6份已知含量为1.308mg/g的样品约2.0g，精密称定，置250ml棕色容量瓶中，分别精密加入对照品溶液各2ml，按照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，进样5ul，分别测定回收率，结果见表1。

表1橙皮苷加样回收率试验结果 （%）

2.10 样品测定 按2.1色谱条件对5批香砂平胃丸样品，分别进行含量测定，按外标法计算橙皮苷的含量，结果见表2。

表2 5批样品中橙皮苷的含量 （mg/g）

3 讨论

香砂平胃丸经多年临床经验证明对治疗胃脘疼、心下痞满、胃疼嗳气、恶心吐酸、浅表性胃炎、十二指肠球部炎及溃疡等症具有显著疗效，现行质量标准只有薄层鉴别项目，未有含量测定项目，为了较好地控制该制剂的质量，保障人体用药安全，本实验采用高效液相色谱法对香砂平胃丸中所含橙皮苷进行了含量测定，方法简便快捷，结果准确可靠，效果满意。

橙皮苷提取方法的选择：笔者对同一批香砂平胃丸进行了加石油醚（60～90℃） 索氏提取[2]及加甲醇浸泡超声两种不同的提取方案比较，并对后种方案中浸渍，超声时间进行了考察结果见表3：

表3不同提取方法所得橙皮苷的含量 （mg/g）

由上表可见索氏提取和甲醇浸渍超声提取对香砂平胃丸中橙皮苷含量测定无明显区别，从操作方便，快捷、经济方面考虑笔者建议选择浸渍2h超声20分钟。且索氏提取所得色谱峰杂质峰较多，不建议采用索氏索氏提取法。

从样品含量测定结果可以看出，橙皮苷的含量较高的为1.317mg/g，较低的为1.3000mg/g，综合考虑原药材的选择及制剂生产工艺等多种因素的影响，建议将该制剂中橙皮苷含量含量指标为含橙皮苷（C28H34O15） 不得少于1.30mg/g，另建议厂家考察不同产地，不同节气，不同色泽陈皮原料中橙皮苷含量，以确保香砂平胃丸质量，以保证其疗效。

[1]WS1-B-2938-98.中华人民共和国卫生部药典委员会.卫生部药品标准中药成方制剂第十五册[S].北京：中华人民共和国药典委员会，1989.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010年版.一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3]史大军，袁才琼，邱海蕴.高效液相色谱法测定小儿吐泻宁中橙皮苷含量[J].中国药业，2011，20(12):36-37.

Content Determination of Hesperidin in Xiangsha Pingwei Pills by HPLC

CHEN Yanmei1,LIU Chuanhui2
（1 Shangqiu food and druginspection，shangqiu 476000,China;2.Shangqiu animalproducts quality in spection center,shangqiu 476000,China）

ObjectiveTo establish HPLC method for the determination of Hesperid in Xiangsha Pingwei Pills.Methods The chromatographic systemconsisted of C18 column （150mm×4.6mm，5um） ,amobile phase ofmethonal acetic acide-water(35：4：61).The content was detected at a waveleng of 283nm,the flow rate was 1.0 mol·min－1.Results The Baicalin have a good linear relatio in the range of 0.0438～0.438ug（r=0.9993） ,the average recovery was 98.61%，RSD=0.86%（n=6）.Conclusion The method is convenient accuracy.It can be used for content determination of Hesperidin in Xiangsha Pingwei Pills by HPLC.

Xiangsha Pingwei Pills;Hesperidin;HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.02.077

1672-2779（2015）-02-0144-03

杨 杰 本文校对：杨 杰

2014-12-02）