HPLC测定杜五液中芍药苷的含量

杜建红寇新民郄革红张国庆

（1成都军区联勤部药品仪器检验所，四川 成都610017；2成都军区八一骨科医院，610015）

HPLC测定杜五液中芍药苷的含量

杜建红1寇新民2郄革红1张国庆1

（1成都军区联勤部药品仪器检验所，四川 成都610017；2成都军区八一骨科医院，610015）

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定杜五液中芍药苷含量的方法。方法：采用HPLC测定制剂中赤芍的主要成分芍药苷的含量；色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为：乙腈-0.1%磷酸水溶液（18∶82）；检测波长：230 nm；柱温：30℃；流速：1.0 m L/min。结果：芍药苷在5.89～ 58.88μg/m L范围内线性关系良好（r＝0.999 9），平均回收率97.07%～ 103.09%，试验结果RSD为2.20%（n=9）。结论：本法简便、准确性好，可用于杜五液的质量控制。

杜五液；高效液相色谱法；芍药苷；含量；测定

杜五液是由羌活、川芎、赤芍等9味中药组成的特色医院制剂，具有袪风散寒、活血通络的作用。临床用于各类陈旧伤，风湿麻木，腰酸腿痛。本文依据《中国药典》2010年版一部附录“中药质量标准分析方法验证指导原则”[1]，采用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中赤芍的主要成分芍药苷的含量[2]，从而建立控制杜五液制剂质量的含量测定方法。

1 仪器与试药

岛津LC-20AD型液相色谱仪；电子分析天平（TB-215D,丹佛仪器北京有限公司）；芍药苷对照品（来源于中国食品药品检定研究院）；杜五液（成都军区八一骨科医院,100 m L/瓶，批号：20130729，20131104，20131203），乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 色谱条件色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为：乙腈-0.1%磷酸水溶液（18∶82）；检测波长：230 nm；柱温：30℃；流速：1.0 m L/m in；进样量：10μL。

2.1.2 溶液的制备①供试品溶液的制备：精密量取本品5 m L，置10 m L量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。②对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液稀释制成每1 m L含0.03 mg的溶液，即得。③阴性对照溶液剂量：按处方比例及工艺制备缺赤芍的阴性对照样品，按供试品溶液项下方法制成阴性对照溶液。

2.1.3 专属性考察分别吸取供试品、对照品、阴性对照溶液各 10μL，注入液相色谱仪，按2.1.1项下的色谱条件，进样测定，记录色谱图，见图1。样品中芍药苷峰与其他组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照溶液色谱峰对测定无干扰。采用拟定的方法对本品进行含量测定，专属性良好。

图1 杜五液的HPLC图

2.1.4 线性关系考察取芍药苷对照品适量，精密称定，制备对照品储备液，再用甲醇稀释成一系列的线性对照品溶液。按照拟定的测定条件进行测定，记录峰面积。以芍药苷浓度X（μg/m L）为横坐标，芍药苷峰面积Y为纵坐标，进行回归，得回归方程：

Y=14 181X＋ 583.49。

试验结果显示，芍药苷浓度在5.89～58.88μg/m L范围内线性关系良好（r=0.999 9）。

2.1.5 溶液稳定性试验取新配制的芍药苷对照品溶液及供试品溶液，分别在 0，1，2，4，8，12小时进样，每次进样10μL，记录芍药苷峰面积，试验结果显示，对照品溶液及供试品溶液均在12小时内稳定性良好（RSD小于2%）。

2.1.6 进样精密度试验取同一对照品溶液，按照拟定的测定条件重复测定6次，记录芍药苷峰面积，考察进样精密度。试验结果RSD为0.45%，表明进样精密度良好。

2.1.7 重复性试验取供试品（批号：20131104），按拟定方法制备供试品溶液，平行制备6份，测定芍药苷含量。试验结果RSD为0.84%，表明该方法重现性较好。

2.1.8 回收率试验采用加样回收法，精密量取已知含量的供试品（批号：20131104，含量：0.056mg/m L）9份，每份2.5 m L，置10 m L量瓶中，分别加入芍药苷对照品3，5，9 mg（每个水平3份），照拟定的方法制备供试品溶液并测定芍药苷含量，计算芍药苷的回收率，结果见表1。RSD为2.20%，回收率为97.07% ～ 103.09%，表明拟定的含量测定方法回收率良好。

表1 芍药苷回收率试验结果

2.1.9 样品测定采用经过验证，专属性、重复性良好，准确度良好的含量测定方法，对多批样品中的芍药苷含量进行测定，试验结果见表2。

3 讨论

3.1取芍药苷对照品溶液，经 UV光谱扫描，在230 nm处有最大吸收，同时参照《中国药典》2010版一部赤芍含量测定波长，故确定测定波长为230 nm。

Determ ination of Paeoniflorin in Duwu Ye by HPLC

Du Jianhong1，Kou Xinmin2，Qie Gehong1，Zhang Guoqing1（1 Institute for Drug and Instrument Control of Chengdu M ilitary Region，Sichuan Chengdu 610017，China；2 Bayi Orthopedics Hospital of Chengdu M ilitary Region，610015）

Objective:To establish a HPLC method for the content determination of paeoniflorin in Duwu Ye.M ethods:HPLC was employed to determ ine the content of paeoniflorin in the preparation.The chromatographic column C18（250 mm×4.6 mm，5μm）was adopted w ith acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution（18∶82）as the mobile phase at a flow rate of 1.0 m L/m in.The detection wavelength was set at 230 nm and the column temperature at 30℃.Results:A good linear relationship of paeoniflorin was obtained w ithin the range of 5.89～58.88μg/m L（r＝0.999 9）.The average recovery was 97.07%～103.09%，RSD=2.20% （n=9）.Conclusion:The method is simple and convenient w ith a good accuracy.It can be used for the quality control of Duwu Ye.

Duwu Ye；HPLC；Paeoniflorin；Content；Determine

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.06.007

成都军区医学科学技术研究“十二五”面上项目（C12072）

杜建红，男，副主任药师。研究方向：药物分析。通讯作者E-mail：yjsdjh@163.com