尖锐湿疣患者HPV感染类型和细胞免疫功能的分析

马晓慧

尖锐湿疣患者HPV感染类型和细胞免疫功能的分析

马晓慧

【摘要】目的 研究尖锐湿疣（Condyloma Acuminatum，CA）患者感染的人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）基因型的状况和分布特点，以及HPV亚型和外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达情况，分析尖锐湿疣患者感染人乳头瘤病毒亚型与细胞免疫功能的关联性，为临床治疗CA提供实验依据。方法 根据纳入标准，选择81例明确诊断CA患者，治疗前取患者皮疹皮屑通过聚合酶链式反应（PCR）方法检测HPV亚型；在治疗和随访3个月的截止点采血，应用流式细胞仪分析淋巴细胞免疫功能，并与正常人群对照组进行比较。结果单一亚型感染40例（49.38%），混合亚型感染41例（50.62%）。感染患者外周血T细胞与正常人群对照组比较，CD 4+细胞百分比降低，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 8+细胞百分比升高，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 4+/CD 8+比值低于正常人群，P＜0.05，差异具有统计学意义。结论 HPV亚型混合感染和细胞免疫功能异常是促使尖锐湿疣患者感染人乳头瘤病毒的重要因素。

【关键词】尖锐湿疣；人乳头瘤病毒；细胞免疫

作者单位：450003郑州，河南省人民医院检验科

Analysis of HPV Infection Types and Cellular Immune Function in Patients With Condyloma

MA Xiaohui He’nan Province The People's Hospital Department of Laboratory, 450003 Zhengzhou, China

[Abstract]Objective To investigate condyloma acuminatum(common sexually transmitted disease, CA)in patients with human papilloma virus(human papillomavirus, HPV)genotype infection status and the characteristics of distribution and HPV subtypes, and peripheral blood T lymphocyte subsets and NK cell expression and clinical treatment of ca provide experimental basis. Methods According to the inclusion criteria, the choice of 81 cases of diagnosed patients with Ca, before treatment take rash dander by polymerase chain reaction(PCR)method for detection of HPV subtype; in treatment and followed up for 3 months to cut-off point of blood by flow cytometry analysis of lymphocyte immune function and with the normal population control groups were compared. Results 40 cases(49.38%)were infected by single subtype and 41 cases(50.62%)were mixed subtype. Infection in patients with peripheral blood T cells and

normal control group comparison, the percentage of CD 4+cells decreased, P<0.05, had difference statistically significance, CD 8+cell percentage increased, P<0.05, had difference statistically significance, ratio of CD 4+/CD 8+decreased, P<0.05, had difference statistically significance. Conclusion HPV subtype mixed infection and immune cell function anomaly is prompted condyloma acuminatum patients Infected with human papilloma virus is an important factor.

[Key words]Condyloma, Human papillomavirus, Cellular immunity

尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒（HPV）感染所致的，以肛门生殖器部位增生性损害为主要表现的性传播疾病。其发病率逐渐增高，在我国居性传播疾病第2位[1]。尖锐湿疣的发病原因与HPV基因型的感染状况和分布特点及HPV型别、细胞免疫功能异常等有关。本研究通过检测81例尖锐湿疣初诊患者人乳头瘤病毒 （HPV）基因型的状况和分布特点及HPV亚型和外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达情况，探讨尖锐湿疣患者HPV亚型感染与细胞免疫功能异常的关系，为临床治疗CA提供实验依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

所有81例尖锐湿疣初诊患者均来自2013年1月～2014年1月我院皮肤科门诊，诊断符合卫生部防疫司制定的CA标准。入选的81例CA患者为感染组，其中男48例，女33例，平均年龄（31±9.2）岁；对照组20例，均为本院健康志愿者，男12例，女8例，两组之间在性别、年龄等方面对比，P＞0.05，差异不具有统计学意义。

1.2仪器和试剂

DA 7 600型扩增仪（广州中山大学达安基因有限公司），流式细胞仪（FACS Canto II，美国BD公司）；HPV基因分型检测试剂盒（广州中山大学达安基因有限公司），T/B/NK四色淋巴细胞免疫分型检测试剂盒（美国BD公司）。

1.3方法

1.3.1标本采集 治疗前用拭子在赘生物表面稍用力刮拭少量组织液渗出或者剪切少量赘生物，取出后放入装有2 ml细胞保存液的保存管中，沿刷柄折痕折断，旋紧管盖，-20℃保存待测HPV亚型。两组均在入选后采集静脉血2 ml，经EDTA-K 2抗凝后待检T淋巴细胞亚群。

1.3.2CA的治疗方法 使用微波或电离子将肉眼可见生殖器赘生物清除，治疗过程中尽可能保护正常皮肤，减少创面，局部糜烂创面外搽复方黄柏液或我院制剂3%聚维酮碘溶液。待7～10天皮损创面愈合后减少疣体复发，外涂干扰素凝胶或3%咪喹莫特乳膏。1.3.3实验方法 HPV亚型检测参照试剂盒规定采用行PCR法检测标本。共检测19种HPV基因亚型，包括16个高危型：16、18、3l、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、亚型CP 8 304型，和3个低危型：6，ll，43型。淋巴细胞（T/B/NK）免疫分型参照试剂说明书制作细胞悬液，用FACS Canto II检测CD 3+总T细胞、CD 3+CD 4+辅助性T细胞、CD 3+CD 8+细胞毒T细胞、CD 16+56+NK细胞百分率等，计算CD 4/CD 8比值。1.4统计学方法

研究采用SPSS16.0统计软件进行分析，组间比较采用单方差分析（One-way ANOVA），P＜0.05，差异具有统计学意义。

2　结果

2.1CA的HPV基因亚型检测

人乳头瘤病毒（HPV）亚型感染构成中，单一亚型感染40例（49.38%），混合亚型感染41例（50.62%），其中高危亚型＋低危亚型的类型占混合感染的73.17%（30/41），其余为单纯高危亚型（4/41）和单纯低危亚型（7/41）的混合感染；以低危型HPV 6/11感染为主，而单一或混合感染的高危亚型除HPV 16/18外，还出现51、52、53、31、33、39和CP 8 304。

2.2感染组和正常对照组外周血T淋巴细胞（百分率）比较

对比两组外周血T淋巴细胞（百分率）检测均值结果，见表2。感染组与正常对照组比较，CD 4+细胞百分率降低，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 8+细胞百分率升高，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差异具有统计学意义。

2.2感染组和正常对照组外周血T淋巴细胞（百分率）比较

对比两组外周血T淋巴细胞（百分率）检测均值结果，正常人群对照组CD 3+（%）、CD 4+（%）、CD 8+（%）、CD 4+/CD 8+分别为（70.64±9.32）、（39.80±5.63）、（30.63±3.99）、（1.40±0.25）；HPV感染组分别为（68.10±8.02）、（32.41±4.89）、（38.61±4.18、（0.93±0.31）。感染组与正常对照组比较，CD 4+细胞百分率降低，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 8+细胞百分率升高，P＜0.05，差异具有统计学意义，CD 4+/CD 8+比值降低，P＜0.05，差异具有统计学意义。

3　讨论

尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒（HPV）引起的一种常见性传播疾病。该病复发率高，HPV有不同的亚型。最常引起尖锐湿疣的HPV有6、11等。HPV在人体温暖潮湿的条件下易生存繁殖，故外生殖器和肛周是最易发生感染的部位。临床上CA患者，特别是难治性或复发性CA的出现，常与HPV基因型的感染状况和分布特点，以及HPV型及宿主的免疫状态等因素有关，尖锐湿疣患者细胞免疫功能异常导致HPV发生免疫逃逸，易引起尖锐湿疣的复发[2]。本次研究发现HPV感染型别和细胞免疫功能的变化在尖锐湿疣发病因素起着重要作用。本研究对81例临床初次确诊为尖锐湿疣的患者在治疗前进行HPV亚型检测，最常见19种亚型检测发现，HPV感染组患者混合感染的比例较高，感染类型以高危型＋低危型为主，提示混合高HPV感染是导致CA发生尤其是复发的重要因素之一。文献表明[3]，单纯或混合高危型HPV 16/18 型CA患者的复发率高于低危型HPV 6/11型患者，使病毒复制扩大和感染时间延长。此外，E 6还可以结合干扰素调控因子，降低干扰素β表达功能，使HPV病毒逃逸正常免疫反应。进一步说明HPV高危亚型参与的混合感染能够加强HPV病毒复制的协同作用，并且有利于HPV逃脱宿主免疫应答。CA患者与正常人群对照组比较，CA患者CD 8+淋巴细胞百分比增加，CD 4+淋巴细胞百分比减少，CD 4+/CD 8+比值下降，表明机体细胞免疫功能下降（Th 2占优），抑制病毒增殖和诱发细胞毒CD 8+T细胞抗病毒的作用都降低，不能有效清除HPV。经卡介菌多糖核酸等免疫

调节剂治疗尖锐湿疣，可有效提高患者的免疫功能，外周血CD 4+T淋巴细胞以及CD 4+/CD 8+比值与治疗前相比升高，而CD 8+T淋巴细胞降低，P＜0.05，差异具有统计学意义。如何规范有效治疗尖锐湿疣，预防和减少尖锐湿疣患者复发，是皮肤性病科包括妇科、泌尿外科医生在日常门诊中较为麻烦的问题。尖锐湿疣患者致病，特别是难治性或复发性CA的出现，常与HPV感染亚型，包括机体的细胞免疫功能密切相关。本研究需要引起我们日常门诊工作足够重视的是尖锐湿疣患者感染亚型，尤其是由高危亚型或合并高危亚型的混合感染引起时，尖锐湿疣患病及复发的机率明显增加，而检测尖锐湿疣患者与正常人群比较CD 8+淋巴细胞百分比增加，CD 4+淋巴细胞百分比减少，CD 4+/CD 8+比值下降，提示与患者机体的细胞免疫功能密切相关，而增强机体的细胞免疫功能，则是可能减少CA发生，规范治疗减少复发的关键。

参考文献

[1] 赵辨. 临床皮肤病学[M]. 南京：江苏科学技术出版社，2001：514-519.

[2] 肖子娥，黄捷. 尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒基因分型检测[J]. 实用皮肤病学杂志，2014（2）：99-101.

[3] 李彦，张守民，李振鲁. 尖锐湿疣患者人乳头状瘤病毒感染细胞免疫功能的相关性研究[J]. 中华医院感染学杂志，2014（12）：2874-2876.

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2015.26.055

【文章编号】1674-9308（2015）26-0078-03

【文献标识码】B

【中图分类号】R725.5+3