陕西省宫颈人乳头瘤病毒感染亚型分布特征分析

樊 静，李 娜，张忠明，安瑞芳，李 娇，赵静妮，邹余粮，苟文丽，杨筱凤

(西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

陕西省宫颈人乳头瘤病毒感染亚型分布特征分析

樊 静，李 娜，张忠明，安瑞芳，李 娇，赵静妮，邹余粮，苟文丽，杨筱凤

(西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

目的 明确陕西省及周边地区成年女性宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染基因亚型的分布及年龄特征。方法 分析2009年11月至2015年4月在西安交通大学第一附属医院妇科门诊22 306例宫颈样本21种HPV基因分型检测结果。HPV分型检测采用凯普医用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术。结果 HPV总感染率为28.84%。高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)感染率为26.26%，占HPV阳性标本的91.05%；低危型HPV(6、11、42、43、44、81)感染率为4.81%；高危/低危HPV混合感染率为2.22%。感染率最高的基因亚型为HPV16(9.31%)，其他常见高危亚型依次为HPV52(5.08%)、HPV58(4.99%)、HPV18(2.09%)、HPV31(1.95%)、HPV39(1.86%)、HPV33(1.74%)；常见低危亚型为HPV6(2.02%)、11(1.56%)、81(1.02%)。HPV总体感染率和高危HPV亚型感染高峰年龄在30～34岁之间，以后随年龄增长逐渐降低，各年龄组间HPV检出率有显著性差异(χ2值为4.743～85.971，均P<0.05)。结论 陕西省及周边地区女性宫颈HPV处于较高的感染水平；其HPV感染基因型符合亚洲人群分布规律，但有一定区域性差异；随着年龄的增高，高危型HPV感染比例逐步缓慢增加。该结果对区域宫颈癌防治和疫苗制备具指导意义。

人乳头瘤病毒亚型；宫颈；分布特征；陕西省

宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一。大量流行病学及分子生物学研究资料表明，持续的高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是子宫颈癌及其癌前病变发生的必要条件[1]。HPV被确认为引发宫颈癌的根本性致病因子[2]。HPV感染状况具有很强的地域性，不同国家与地区HPV感染基因分型的流行病学分布不同[3]。因此，开展筛查工作，明确HPV感染类型，及早和有针对性的处理HPV感染及其相关病变已成为防治宫颈癌的关键。本研究以西安交通大学第一附属医院近6年间一个大样本的HPV分型检测结果为对象，分析陕西省区域性女性宫颈HPV感染基因亚型分布特征及年龄特点。

1 资料与方法

1.1 研究对象

2009年11月至2015年4月在西安交通大学第一附属医院妇科门诊接受HPV检测的女性共计22 306人次，年龄为18～87岁，平均年龄37.96±9.82岁。研究对象纳入范围包括全部以筛查宫颈癌及其相关病变为目的的有意愿受检者。排除3天内有阴道用药或冲洗史，24小时内有性行为及月经期患者,受检者全部来自陕西地区。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器与试剂

PCR扩增仪、HybriMax医用核酸分子快速杂交仪、HPV分型检测试剂盒(PCR+膜杂交法)。

1.2.2 标本采集和处理

暴露宫颈，搽除宫颈粘液。将专用宫颈刷置于宫颈口轻轻搓动旋转5圈取样，放入加有专用保存液的取样管中送检。送检样本于4℃保存，48小时内完成检测。

1.2.3 检测方法

①DNA提取：取保存有宫颈刷取细胞的保存液0.5mL，离心后弃上清液，细胞裂解液提取DNA；②PCR扩增：将PCR混合液、Taq酶和DNA模板按要求的比例混匀，25μL/反应体系扩增；③杂交：采用凯普HybriMax核酸分子快速杂交仪及配套试剂盒，在杂交平台上放入标记有21种HPV基因型寡核苷酸探针的低密度基因芯片杂交膜，按试剂盒说明进行导流杂交，酶标显色；④结果判定：检测结果阳性点为清晰的蓝紫色圆点。根据膜条HPV分型分布图，判断阳性点为何种HPV基因型。本检测包括15种高危亚型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6种低危亚型HPV[6、11、42、43、44、81(CP8304)]，计21种亚型。

1.3 统计学方法

应用SPSS 18.0统计学软件，差异比较采用χ2检验，统计学显著性为P<0.05。

2 结果

2.1 人乳头瘤病毒总体感染状况

在22 306例受检标本中，6 433例HPV检测阳性，总阳性率为28.84%；其中高危HPV亚型感染率为26.26%(5 857/22 306)，低危HPV亚型感染率为4.81%(1 072/22 306)，高危/低危混合感染率为2.22%(496/22 306)，见表1。

表1 21种HPV亚型检测总体结果分布状况[n(%)]

Table 1 Overall distribution of 21 HPV genotypes in samples[n(%)]

有21种基因亚型均被检出。常见的HPV亚型依次为16、52、58、18、6、31、39、33、11、68、53、51、81，其余亚型感染率均在1.00%以下，由高到低依次为56、66、59、45、35、42、44、43。感染率最高的亚型为HPV16(9.31%)，见表2；感染率最低的亚型为HPV43(0.02%)，见表3。

2.2 高危亚型人乳头瘤病毒检测结果及分布

在22 306例受检标本中，有5 857例高危型HPV亚型阳性，阳性率为26.26%，占全部HPV阳性标本的91.05%。各高危型HPV感染频数及构成比见表2。其中感染率最高的基因亚型为HPV16(9.31%)，占全部HPV感染的32.27%和高危HPV感染的35.44%；其他常见6型高危亚型依次为HPV52(5.08%)、58(4.99%)、18(2.09%)、31(1.95%)、39(1.86%)、33(1.74%)，占全部HPV感染的61.43%和高危HPV感染的67.46%；较少见的3型高危亚型为HPV68(1.44%)、53(1.32%)、51(1.28%)；少见的5型高危亚型为HPV56(0.96%)、66(0.64%)、59(0.63%)、45(0.33%)、35(0.32%)。

表2 15种高危亚型HPV检测结果及分布状况

Table 2 Fifteen genotypes of high-risk HPV and their distribution in samples

2.3 低危亚型人乳头瘤病毒检测结果及分布

低危型亚型阳性者共1 072例，阳性率为4.81%，占全部HPV阳性标本的16.66%。各低危型频数分布及其构成比见表3。常见的低危亚型前3位为HPV6(2.02%)、11(1.56%)、81(即HPVCP8304，1.02%)，占全部HPV感染的15.95%和低危HPV感染的95.71%；HPV42(0.23%)、44(0.16%)感染少见；罕见亚型为HPV43(0.02%)。

2.4 高危/低危亚型人乳头瘤病毒检测结果及分布

高危/低危HPV混合阳性者496例，感染率为2.22%，分别占HPV阳性标本、高危型HPV标本和低危型HPV标本的7.71%(496/6 433)，8.47%(496/5 857)和46.27%(496/1 072)，见表1。

另外，在6 433例HPV阳性标本中，单一亚型感染4 755例(73.92%)，多重感染1 678例(26.08%)，其中4例样本感染有最多7种HPV基因亚型。

表3 6种低危亚型HPV分布状况

Table 3 Distribution of 6 low-risk HPV genotypes in samples

2.5 人乳头瘤病毒感染的年龄分布

将22 306例女性按不同年龄段分为6组(≤20岁、21～30岁、31～40岁、41～50岁、51～60岁、≥61岁)，各年龄段HPV检出情况见表4。受检人群高峰年龄为31～40岁组，HPV感染率为27.41%(检测占比34.78%、阳性占比33.05%)；其次为41～50岁组，HPV感染率为29.05%(检测占比29.38%、阳性占比29.60%)。极端年龄组即≤20岁年龄段和≥61岁段检测占比极低(1.02%和1.87%)，但HPV感染率较高(40.97%和38.99%)。剔除极端年龄，HPV感染率在21～60岁之间随年龄增长逐渐增高，各年龄组HPV检出率比较有显著性差异(χ2=4.743～23.482，均P<0.05)。

高危亚型HPV在各年龄段均处于较高的感染水平(23.88%～35.89%)；21岁以后，随着年龄的增高，高危亚型HPV感染的比例逐步增加，而低危亚型和混合性HPV感染的比例逐步下降。经χ2检验，不同年龄段高危亚型、低危亚型以及混合性感染的分布在各年龄段间比较有显著性差异(χ2=9.537～85.971，均P<0.05)。不同HPV感染类型在各年龄段的分布状况见表5及图1。

表5 不同HPV感染类型在各年龄段的分布状况[n(%)]

Table 5 Distribution of HPV genotypes among different age groups[n(%)]

图1 各年龄组不同HPV类型感染率分布状况

Fig.1 Infection rate distribution of different HPV genotypes among differnt age groups

3 讨论

3.1 陕西省及周边地区人乳头瘤病毒感染率及基因型分布规律和特点

西安交通大学第一附属医院是西北地区区域性医学中心，本研究基于近6年间全部门诊大样本的检测结果，具有陕西省相应群体即潜在宫颈病变高危人群为主的区域性代表性。在受检的22 306例女性中，HPV总体感染率28.84%，明显高于早先报道的山西省的14.2%[4]、北京地区的6.6%[5]、甘肃的19.9%[6]和新疆的13%[7]，略低于新近报道山东的32.2%[8]和黑龙江的36.45%[9]，接近于湖南的22.6%[10]。本院与陕西省肿瘤医院居同一地区，该院报道的7 640例研究对象HPV总感染率为18.86%[11]，原因可能在于该报道的来源以健康筛查人数居多，而本院研究以门诊就诊可疑高危群体为主有关。这些结果反映了不同地区和人群HPV流行的地域差别、人群背景和年代变化。本研究的结果也反映了陕西地区和国外相关报道相比具有较低的HPV总感染率，比如美国成年女性同时期生殖道HPV总感染率为42.5%～42.7%[12]。

世界范围最常见的HPV基因亚型是HPV16，其他常见基因亚型存在地区差别。国际癌症研究所研究发现，在宫颈癌患者中，除HPV16外，HPV18、45、31、33较常见[3,12]，多数亚洲国家的研究提示HPV52、58的感染率高于上述4种HPV亚型[13]。本研究中，HPV的21种基因亚型均被检出，HPV16居感染率首位，与世界范围的研究结果一致[4-13]。HPV52、58仅次于HPV16，符合亚洲人群研究结果，与我国境内其他地区比较，HPV感染常见基因亚型相似，也存在一定地区差异[4-13]。本研究中常见的HPV亚型为16、52、58、18、6、31、39、33、11、68、53、51、81，其余基因亚型感染率均在1.00%以下。高危亚型前6位为HPV16、52、58、18、31、39，低危亚型前3位为HPV6、11、81。感染率最高的基因亚型HPV16的人群感染率为9.31%，阳性构成比32.27%；感染率最低的基因亚型HPV43的人群感染率为0.02%。这些结果与甘肃地区[6]及陕西省肿瘤医院[11]报道的女性宫颈HPV感染基因亚型分布状况非常相似。北京地区常见的HPV亚型为HPV16、58、52、53、33、6[5]。山东、湖南和黑龙江地区常见的高危亚型为HPV16、58、52、18、33、31，常见的低危亚型为HPV6、11、44[8-10]。这些结果均反映了HPV感染谱在中国的基本相似性和一定的地域差别。本研究结果的亚型地域性差异主要体现在HPV52、18、39常见(高危)亚型中感染占比的前移。另外，基本人群和宫颈癌人群HPV感染谱的差异，反映了各HPV亚型致癌力的差异，进一步大数据的综合对比分析和临床跟踪对于HPV致癌机理研究和区域防治策略意义重大[12,14]。

3.2 陕西省及周边地区人乳头瘤病毒感染的年龄分布特点

年龄是HPV感染和宫颈疾病的密切相关因素[1-4]。Steinau等[12]总结报道了21～24岁年龄段女性HPV感染率最高(58.5%)，感染率随年龄增长逐渐降低，50～59岁年龄段女性HPV感染率降至34.9%。我国北京地区[5]筛查的人群感染高峰年龄在30～34岁之间(检出率为11.25%)，40～44岁以后明显下降，各年龄段HPV感染检出率差异显著。

本研究的结果提示，剔除≤20岁和≥61岁的极端年龄段，HPV筛查及感染的主体为21～50岁女性，其检测的人群占比总计89.08%，阳性例数占比总计86.28%，总体HPV感染率为27.93%，高危HPV感染率为25.37%，参见表4、表5。HPV感染率(和高危HPV感染率)随年龄增长逐渐增高，各年龄组HPV检出率比较有显著性差异。该筛查群体的研究结果应该能反映本地区临床潜在宫颈病变高危人群的总体HPV感染分布特征，具有相对重要的参考价值。上述HPV感染率应该接近但略高于本地区该年龄段正常女性的基础HPV感染状况。该结果与Steinau等[12-13]的报道差异明显，与北京地区报道的结果[5]较为接近，反映了不同国家HPV人群感染的生物和社会背景。

HPV多为一过性感染，随着年龄增大和机体免疫力的变化，感染的累积数和持续感染增加。本研究不同HPV感染类型在各年龄段的构成比差别有统计学意义。高危型HPV处于较高的感染水平，提示高危型HPV比低危型HPV更不易被机体自然清除，而容易表现为持续感染。本研究中21岁以后的患者随着年龄的增长，高危型HPV感染的比例逐步增加，而低危型和混合性HPV感染的比例逐步下降，40岁以后，三者均趋于平缓，且缓慢上升，提示在年轻人群中低危型HPV感染较常见且多为一过性，高危型HPV的感染随年龄的增加而增加，使机体患宫颈病变的几率增加，也提示年轻女性应尽早开展HPV预防接种，对年长女性则应积极进行HPV检测，对预防宫颈癌相关病变的发生至关重要。另外，本研究中≤20岁和≥61岁的极端年龄段人群具有相对较高的各型HPV感染率，合理的解释应该是它反映了这些受检者部分具有临床已知的HPV相关疾病，因为这些年龄段并非临床熟知的普通人群筛查对象，其总计2.89%的检测人群占比支持了这一估计的合理性，同时也说明这些极端病例相对于本研究的大样本而言引起总体结果偏倚的影响有限。

本文揭示的作为西北大区域诊疗中心的西安交通大学第一附属医院妇科门诊女性的大样本宫颈HPV感染基因亚型分布及年龄特点，为宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的区域性防治提供了必要的病毒流行病学基础数据和临床病例分流依据，对宫颈癌疫苗的研制策略具有切实参考意义。

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[专业责任编辑：杨文方]

喷鼻剂催产素可治疗自闭儿童

发表在《分子精神病学》(Molecular Psychiatry)的一项来自悉尼大学的研究表明，合成激素-催产素经5周的治疗可显著改善自闭症儿童的社会、情感和行为问题。该研究被认为是药物治疗自闭症儿童社会障碍的第一个证据。它也是调查鼻内施用催产素治疗年幼孤独症患儿的疗效、耐受性和安全性的第一个临床实验。在该研究中，31名3～8岁的儿童进行每日2次催产素鼻喷雾剂治疗。Adam Guastella说：“我们发现催产素治疗后，父母报告他们的孩子在家里更活跃互动，我们的双盲医师独立评价也支持治疗确实提高了社会反应”。总体而言，喷鼻剂的耐受性良好，最常见的不良事件是口渴、尿频、便秘。

Distribution characteristics of human papillomavirus infection genotypes in cervix of women in Shaanxi Province

FAN Jing, LI Na, ZHANG Zhong-ming, AN Rui-fang, LI Jiao, ZHAO Jing-ni, ZOU Yu-liang, GOU Wen-li, YANG Xiao-feng

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To analyze HPV genotype distribution and age characteristics among women in Shaanxi Province and areas nearby. Methods A total of 22 306 cervical scraping samples were collected from the outpatients for cervical cancer screening in the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University during November 2009 to April 2015. Twenty-one HPV genotypes were examined by PCR-based hybridization gene chip assay. Results The overall HPV infection rate was 28.84%. The infection rate of high-risk HPV (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68) was 26.26%, which occupied 91.05% of HPV positive samples. There were 4.81% cases being confirmed to have low-risk HPV (6, 11, 42, 43, 44, 81), and the combined infection rate of both high-risk and low-risk HPV was 2.22%. The most prevalent high-risk HPV was HPV16 (9.31%), followed by high-risk HPV 52 (5.08%), HPV 58 (4.99%), HPV 18 (2.09%), HPV 31 (1.95%), HPV 39 (1.86%), and HPV 33 (1.74%), respectively. The most prevalent low-risk HPV were HPV6 (2.02%), HPV 11 (1.56%), and HPV 81 (1.02%). The overall infection rate of HPV and infection rate of high-risk HPV reached peak among the women aged 30-34 years, and they declined with age increasing. The difference in HPV detection rate was significant among different age groups (χ2ranged 4.743-85.971,P<0.05).Conclusion HPV infection rate is high in Shaanxi Province and surrounding areas. The infection genotype of HPV in Shaanxi area has similar spectrum to that in Asian regions but with slight difference. The infection rate of high-risk HPV increases gradually with age increasing. These data are helpful for the cervical cancer prevention and the vaccination program in this area.

human papillomavirus genotype；cervix；distribution characteristics；Shaanxi Province

2015-06-24

国家自然科学基金面上资助项目(30872741)；陕西省自然基金资助项目(SJ08-ZT09)

张忠明，副教授。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.05.016

R737

A

1673-5293(2015)05-0958-04

[第一共同作者简介]樊 静(1986-)，女，在读硕士研究生，主要从事宫颈病变相关实验研究；李 娜(1985-)，女，检验师，主要从事女性生殖道感染性疾病实验工作。