HPV感染亚型分布及其与宫颈病变关系的研究

段山红，安瑞芳

(1.陕西省核工业二一五医院妇科，陕西 咸阳 712000；2.西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

HPV感染亚型分布及其与宫颈病变关系的研究

段山红1，安瑞芳2

(1.陕西省核工业二一五医院妇科，陕西 咸阳 712000；2.西安交通大学第一附属医院妇产科，陕西 西安 710061)

目的 探讨咸阳地区妇科门诊患者人乳头状瘤病毒(HPV)感染亚型分布及其与宫颈病变的关系。方法 选取2009年1月至2013年2月在咸阳市区3家三级医院妇科门诊行宫颈HPV病毒分型及薄层液基细胞学筛查的患者共3 573例，其中HPV分型(包括19种高低危亚型)检测呈阳性者为966例，细胞学阳性者[≥未确定意义的不典型鳞状细胞(ASCUS)]572例，两者均为阳性者354例；对HPV分型检测或薄层液基细胞学两者任一阳性结果者行阴道镜下组织病理学检查，共1169例。依据病检结果分析HPV感染亚型与宫颈病变的相关性。结果 咸阳地区妇科门诊患者HPV检测阳性率为27.04%；高危型HPV阳性率24.55%，HPV16阳性率12.26%，占高危型HPV的45.34%。30岁及以下HPV检查阳性率最高，30岁以上随年龄增长各年龄组HPV检查阳性率逐渐降低，除了≤20岁组与21～30岁组差异无统计学意义外(P>0.05)，21～30岁组与31～40岁组、31～40岁组与41～50岁组、41～50岁组与51～60岁组、51～60岁组与>60岁组的阳性率比较差异均有统计学意义(χ2值分别为5.08、8.93、37.48、4.28，均P<0.05)。HPV16在宫颈上皮内瘤样病变CINⅡ、CINⅢ及鳞状细胞癌(SCC)中检出率均为最高，分别为50.59%、78.13%、81.82%。HPV16较HPV58、18、52、33致CINⅡ以上病变的发生率明显增高，经比较差异均有统计学意义(χ2值依次为53.93、62.84、93.01、93.01，均P<0.01)。结论 咸阳地区妇科门诊患者高危型HPV感染的优势型别依次为HPV16、52、58、18和33。HPV16在宫颈癌及癌前病变的发生和发展中起关键作用。同时，HPV58、18、52、33在该地区也具有较高的致病性。高危型HPV基因分型诊断在宫颈癌筛查及防治过程中具有重要意义。

人乳头状瘤病毒感染；人乳头状瘤病毒分型；人乳头状瘤病毒亚型分布；宫颈病变

在全球范围内，宫颈癌的发病率和死亡率均较高。全世界每年因宫颈癌死亡的人数约30万，而新发宫颈癌病例更高达50万人[1-2]。我国宫颈癌的新发病例每年大于13万，占全球的1/4～1/3[3]。流行病学和生物学资料已经证明人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染是子宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)及宫颈癌的主要病因[4-5]。本文旨在通过对咸阳地区妇科门诊患者的HPV亚型检测及其与宫颈病变相关性研究，指导本地区的癌前筛查和治疗，同时为开发研究适合我国国情的HPV亚型的多价HPV疫苗提供临床医学资料及信息，以便对宫颈癌前病变及宫颈癌进行更有效的防治。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选择2009年1月至2013年2月在咸阳市区3家三级医院妇科门诊就诊的患者。纳入标准：患者年龄范围19～70岁，平均年龄41.25±6.53岁；出生及长期居住在咸阳地区；研究对象均有性生活史1年以上，目前未孕，无口服免疫抑制剂及免疫性疾病史，筛查者既往无恶性肿瘤、放疗、化疗，无子宫颈锥形切除史及子宫切除史。根据患者自愿的原则行宫颈HPV病毒分型及薄层液基细胞学筛查，本次共检查3 573例患者，其中HPV分型(包括19种高、低危亚型)检测呈阳性者为966例，细胞学阳性者(≥ASCUS)572例，两者均为阳性者354例，对两者任一阳性结果者行阴道镜下组织病理学检查，共1 169例。

1.2 方法

1.2.1 薄层液基细胞学检查

采用离心沉淀式薄层液基细胞学技术(Thinprep cytologic test)，简称LCT，进行宫颈细胞学检测。细胞学诊断采用2004年TBS分类系统(The Bethesda System)，其中鳞状上皮内病变被分为低级别(LSIL)和高级别(HSIL)两个类别。低级别病变包括：HPV的细胞病理改变(挖空细胞化)和轻度异型增生或宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ)；高级别病变包括中度异型增生、重度异型增生和原位癌或CINⅡ、CINⅢ级。

1.2.2 人乳头状瘤病毒-DNA的检测

HPV的检测方法为PCR-反向点杂交法。采用HPV分型基因芯片检测系统(中山大学达安基因有限公司)检测19种HPV亚型，包括6、11、43型3种低危型；16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、CP8304型等16种高、中危型。

1.2.3 阴道镜下活检

采用金科威公司生产的电子数码阴道镜，根据阴道镜下特征及所有信息的综合评判，在阴道镜下对醋酸试验异常区、异常血管区及碘试验阴性区行宫颈活检，进行准确取材。对于镜下检查不满意者行宫颈管搔刮术，所取标本均送组织病理学检查，以病检结果作为宫颈疾病诊断的金标准。

1.3 统计学方法

所有数据结果由两人进行双录入并进行有效性核查，不一致的数据查阅原始资料进行确认核实。采用描述性分析。采用SPSS 19.0软件对资料进行统计分析，计数资料采用χ2检验表示，P<0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 人乳头状瘤病毒基因型分布状况

在3 573例筛查者中收集到HPV分型检测阳性样本966例，阳性检出率占27.04%，其中高危型阳性率为24.55%，占阳性标本的90.79%；低危型阳性率为2.49%，占阳性标本的9.21%。常见高危型HPV检出结果前5位为HPV16、52、58、18、33，见表1。

2.2 人乳头状瘤病毒检出率与年龄的关系

将患者分为6个年龄组，≤20岁组与21～30岁组、21～30岁组与31～40岁组、31～40岁组与41～50岁组、41～50岁组与51～60岁组、51～60岁组与>60岁组的阳性率比较，除了≤20岁组与21～30岁组差异无统计学意义外，其余差异均有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

2.3 人乳头状瘤病毒亚型在宫颈病变组织中的分布

在3 573例自愿接受检查者中，最终阴道镜下组织病理学检查阳性者437例，其中345例为HPV检测阳性。本次共检出13种HPV亚型，按其在宫颈病变组织中检出率由高到低分别为HPV16、58、52、18、33、31、66、68、CP8304、35、51、59及低危型43。HPV高危亚型在宫颈病变组织的分布结果见表3。

表1 966例HPV阳性样本基因型分布情况

Table 1 Genotype distribution of 966 cases of HPV positive samples

注：χ2和P值为每个年龄组与下一行年龄组的比较。

注：每行的χ2和P值代表本行与其下一行的比较。

HPV16在CINⅠ～SCC宫颈病变组织中占31.01%，HPV58占22.03%，HPV52占13.04%，HPV18占8.99%，HPV33占8.69%。HPV16在CINⅡ、CINⅢ及SCC中检出率均为最高，分别为50.59%、78.13%和81.82%。

在CINⅡ以上的各组病变中，HPV16占60.15%(77/128)，HPV58占15.63%(20/128)，HPV18占12.50%(16/128)，HPV52占3.91%(5/128)，HPV33占3.91%(5/128)。根据表3，各组间比较，HPV16较其他型别致CINⅡ以上病变的发生率明显增高，经比较差异均有统计学意义(χ2值依次为53.93、62.84、93.01、93.01，均P<0.01)；HPV58与HPV18比较，致CINⅡ以上病变的发生率差异无统计学意义(P>0.05)，但两者均较HPV52、HPV33致病率高，经比较差异均有统计学意义(HPV58与HPV52、HPV33比较，χ2=9.97；HPV18与HPV52、HPV33比较，χ2=6.28，均P<0.05)；HPV52与HPV33之间比较，致CINⅡ以上病变的发生率差异无统计学意义(P>0.05)。

在SCC中，HPV16占81.82%，HPV18占9.09%，HPV58占9.09%，经比较HPV16致SCC的发生率较HPV58、18、52、33高，差异均有统计学意义(χ2值依次为16.73、17.11、24.78、25.35，均P<0.01)。

3 讨论

3.1 人乳头状瘤病毒感染的年龄分布

本研究显示，子宫颈的HPV阳性率有明显的年龄分布特点，20岁之前、21～30岁的年龄段妇女，HPV检测阳性率最高，分别为42.67%、37.01%，之后随着年龄的增长，HPV的阳性率逐渐降低，51～60岁年龄段妇女HPV阳性率降至12.08%，60岁以上妇女HPV阳性率仅为7.38%，提示年轻女性是本地区HPV感染的主要高发人群。考虑与年轻女性性活动旺盛，生殖道局部和全身免疫系统未经致敏，易被HPV感染有关。随着年龄的增长，性阅历的丰富，女性生殖道局部和全身免疫系统将被致敏并逐渐发育成熟，抗病能力相应增强；约50%的年轻女性在初次性行为后的3年内会有HPV感染，但绝大多数为隐匿性、一过性，仅持续短时间后便会自动消失，但可重复感染。如果是高危HPV持续感染，则很可能使宫颈的细胞学形态发生异常改变，进一步发生宫颈癌前病变及宫颈癌[6]。

由于年龄和性活动是HPV感染的相关因素，在小于30岁性生活活跃的女性中阳性者比较常见，绝大多数为一过性感染，在7～12个月即可从体内清除，所以建议对感染HPV的妇女随访1年，若复查仍为阳性，建议阴道镜进一步检查；30岁以上高危型HPV阳性的妇女易发展为持续性感染，与高级别宫颈病变相关[7-8]。

3.2 人乳头状瘤病毒感染亚型分布及其与宫颈病变相关性

在世界范围内，HPV16是与宫颈癌联系最紧密的基因型，并随地域变化很小，其余高危亚型与宫颈癌的相关性依区域不同而不同。在亚洲，除了HPV16、18型以外，由HPV52、58型引起的宫颈癌比例要较非洲国家和西方国家多。根据Serrano等[9]的研究，在亚洲地区最常见的高危型HPV型别有HPV16、18、45、31、33、58和52。

本研究显示，在咸阳地区门诊筛查人群中高危型HPV亚型其阳性率最常见的前5位依次为HPV16、52、58、18、33。检出的13种HPV亚型中，HPV16型与宫颈高级别鳞状上皮内瘤变及宫颈癌密切相关(P<0.05)，表明HPV16在宫颈癌的发生和发展中起关键作用。这与相关研究结果一致[10-11]，再次证实了HPV16在宫颈病变发生中的重要作用。HPV52和HPV58是亚洲特有的两个基因亚型，在高度鳞状上皮内瘤变及宫颈癌组中，HPV58及HPV18居第2位，HPV52及HPV33紧随其后。可以看出，随着宫颈病变程度的增加，HPV亚型分布也发生了变化。但总体而言，高危型HPV16、52、58、18、33在各级别病变中均系优势型别，具有较高的致病性，其致病性依次为HPV16、58、18、52、33，这5种型别HPV的持续性感染是引起当地就诊患者发生宫颈鳞状上皮内瘤变及宫颈癌发生的最主要原因之一。因此应对这5种病毒感染高度重视。

我国仍属于发展中国家，医疗资源及卫生基础设施有限，宫颈癌的预防及治疗面临重要挑战。国外已经研制出四价预防性疫苗(针对HPV16、18、6、11)，可以有效地预防HPV16、18、6、11的感染，但对我国主要感染型别覆盖范围偏小，因此有其局限性。为了使我国宫颈癌的防治跃上一个新的台阶，若各地区各级别医疗机构对该地区的HPV流行情况有详尽的调研，将对我国宫颈癌流行病学和病因学研究、制定出有中国特色的宫颈癌防治策略、研发及应用预防性和治疗性HPV疫苗具有现实意义。

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[专业责任编辑：王月玲]

HPV infection subtype distribution and its relation with cervical lesions

DUAN Shan-hong1, AN Rui-fang2

(1.Xianyang215Hospital,ShaanxiXianyang712000,China;2.DepartmentofObstetricsandGynecology,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To discuss HPV infection subtype distribution among gynecological outpatients in Xianyang district and its relation with cervical lesions. Methods Between January 2009 and February 2013, totally 3 573 outpatients undergoing HPV genotyping and liquid-based cytology check were selected in three tertiary hospitals in Xianyang district. There were 966 cases with HPV genotype positive (including 19 kinds of high- and low-risk subtype) and 572 cases with cytological positive (ASCUS). Both positive results were found in 354 cases. For 1 169 patients with any positive results, colposcopy and cervical biopsy were performed. The correlation between subtypes of HPV infection and cervical lesions was analyzed according to pathological examination results. Results HPV testing positive rate was 27.04%. HR-HPV positive rate was 24.55%, and HPV16 positive rate was 12.26% accounting for 45.34% of HR-HPV. The highest positive rate of HPV was found among women aged below 30. With age increasing, HPV positive rate declined gradually. There were significant differences in HPV positive rate among different age groups except for group aged≤20 years and group aged 21-30 years (χ2value was 5.08, 8.93, 37.48 and 4.28, respectively, allP<0.05). The detection rates of HPV16 in CIN Ⅱ, CINⅢ and squamous cell cancer (SCC) were highest, and they were 50.59%, 78.13% and 81.82%, respectively. Compared with HPV58, HPV18, HPV52 and HPV33, HPV16 caused CINⅡ or above more easily, and the difference was statistically significant (χ2value was 53.93，62.84，93.01 and 93.01, respectively, allP<0.05). Conclusion The most common high-risk HPV genotypes infected in outpatients in Xianyang district are HPV16, HPV52, HPV58, HPV18 and HPV33. HPV16 plays a key role in the genesis and development of cervical cancer and precancerous lesions. HPV58, HPV18, HPV52, and HPV33 are also pathogenic in this area. High-risk HPV genotyping is therefore very important in cervical cancer screening and the process of prevention and diagnosis.

HPV infection；HPV subtype；HPV subtype distribution；cervical lesion

2014-12-21

段山红(1972-)，女，副主任医师，硕士，主要从事妇科肿瘤的临床诊治工作。

安瑞芳，教授。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.05.015

R737

A

1673-5293(2015)05-0955-04