Th1/Th2平衡状态与子宫内膜息肉的相关性研究

李 慧，李晓红，陆 洋，樊李平，李 瑾

(暨南大学医学院附属宝安妇幼保健院 深圳市宝安区妇幼保健院生殖健康科，广东 深圳518133)

Th1/Th2平衡状态与子宫内膜息肉的相关性研究

李 慧，李晓红，陆 洋，樊李平，李 瑾

(暨南大学医学院附属宝安妇幼保健院 深圳市宝安区妇幼保健院生殖健康科，广东 深圳518133)

目的 通过检测子宫内膜息肉患者外周血辅助性T细胞(Th)中Th1/Th2平衡状态，探讨Th1/Th2与子宫内膜息肉的相关性。方法 对25例子宫内膜息肉患者(A组)行宫腔镜下定位诊刮活检，病理诊断为子宫内膜息肉；选择20例孕前检查妇科阴道B超未见异常的健康女性(B组)。对两组均在非月经期抽取空腹肘静脉血，A组宫腔镜术前取血。采用三色荧光标记法流式细胞技术检测两组受检者外周血Th0细胞(CD4+IFN-γ+IL-4+)、Th1细胞(CD4+IFN-γ+IL-4-)/Th2细胞(CD4+IFN-γ-IL-4+)。结果 两组中Th0细胞比较无显著性差异(P>0.05)。A组Th1细胞(33.33±8.68)%明显高于B组(22.35±3.88)%，经比较有显著性差异(t=5.658，P<0.05)；A组Th2细胞(3.25±0.89)%低于B组(3.72±0.79)%，但经比较无显著性差异(P>0.05)；A组Th1/Th2比值(11.41±6.10)较B组(6.24±1.69)升高，经比较有显著性差异(t=4.047，P<0.05)。结论 子宫内膜息肉与Th1/Th2平衡状态有一定的关联，这为研究子宫内膜息肉的发生机制提供了新的思路。

子宫内膜息肉；辅助性T细胞；Th1/Th2平衡；流式细胞仪

子宫内膜息肉是由子宫内膜腺体和含有厚壁血管的纤维化子宫内膜间质构成的突出于子宫内膜表面的良性结节。女性发病率约为25%[1]。子宫内膜息肉的发病机理至今尚未明确，一般认为与雌孕激素失衡及炎症有关。另有观点认为子宫内膜息肉是一种良性的子宫内膜肿瘤，与直肠息肉一样也是一种癌前病变的信号，子宫内膜息肉的恶变率约为1%～3%[2]。

辅助性T细胞中Th1/Th2漂移是指Th1和Th2细胞的分化与功能互相制约，只有当Thl/Th2处于动态平衡时，机体才处于健康状态。Thl/Th2失衡会发生感染性疾病、过敏性疾病、自身免疫病以及肿瘤等。鉴于子宫内膜息肉与炎症及癌前病变有一定的关联，本文检测了子宫内膜息肉患者外周血Th1/Th2平衡状态，以探讨TH1/Th2与子宫内膜息肉的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年9至12月在深圳市宝安区妇幼保健院生殖健康科门诊就诊患者中经阴道彩超检查考虑子宫内膜息肉，行宫腔镜下定位诊刮，经过病理确诊为子宫内膜息肉的女性患者25例为子宫内膜息肉组(A组)，年龄23～38岁，平均(29.2±3.9)岁；选取同期行孕前检查的已婚健康女性20例为健康对照组(B组)，经阴道妇科B超检查结果未见异常，排除内外科及妇产科疾病，年龄24～33岁，平均年龄(27.7±2.4)岁。两组入选者年龄无显著性差异(P>0.05)；之前未接受过任何治疗，均无自身免疫性、过敏性疾病及急性炎性疾病，无糖尿病、高血压、其他慢性病或近期服用激素类药物治疗。对入选者均避开月经期，子宫内膜息肉组患者在宫腔镜术前均抽取空腹肘静脉血2～3mL。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器

细胞刺激剂，布雷菲德菌素A(BFA)，红细胞裂解液，异硫氢酸荧光素标记的抗人CD4抗体(FITC anti-human CD4)，染色缓冲液，固定缓冲液，破膜洗液，藻红素标记的抗人白细胞介素-4抗体(PE anti-human IL-4)，别藻青蛋白标记的抗人干扰素-γ抗体(APC anti-human IFN-γ)均购自美国Biolegend公司。流式细胞仪为美国BD公司 FACSCantoⅡ型，应用BD FACSDiva软件分析检测数据。

1.2.2 外周血Th1/Th2细胞的检测

1.2.2.1 细胞培养 抽取静脉血用肝素抗凝，3小时内进行实验。取无菌流式进样管，每管加入200μL肝素抗凝全血和200μL AIM-V无血清培养基。以细胞刺激剂置于37℃ CO2培养箱中孵育5小时。

1.2.2.2 细胞抗原染色 取两只流式进样管，分别取刺激后血样200μL，标记为对照管和实验管。每管加入2mL红细胞裂解液，室温避光孵育10分钟。经2次离心弃上清后对照管和实验管各加入5μL FITC anti-human CD4，室温避光孵育15分钟。相继加入细胞染色缓冲液，固定缓冲液分别离心，弃上清后，破膜洗液重悬细胞，实验管加入PE anti-human IL-4和APC anti-human IFN-γ各5μL；对照管不加入抗体，室温避光孵育20分钟。继以2mL破膜洗液重悬细胞，350g离心5分钟，弃上清，重复洗涤2次。用500μL细胞染色缓冲液重悬细胞，上机检测。

1.2.2.3 流式细胞仪检测 流式上机检测采用三色荧光(FITC、PE、APC)流式细胞术。通过前向角散射/侧向角散射(FSC/SSC)分群设门圈出样本中T淋巴细胞，再对T淋巴细胞CD4/SSC分群设门圈出CD4+T淋巴细胞。使用BD FACSCantoⅡ流式细胞仪应用BD FACSDiva软件收集CD4+T淋巴细胞1～2万并分析。结果表示为CD4+T淋巴细胞分泌细胞因子(IFN-γ、IL-4)的百分比。在本研究中，CD4+T淋巴细胞同时分泌IFN-γ和IL-4(CD4+IFN-γ+IL-4+)的细胞亚群定义Th0细胞，只分泌IFN-γ(CD4+IFN-γ+IL-4-)或IL-4(CD4+IFN-γ-IL-4+)的细胞亚群分别被定义为Th1和Th2细胞。

1.3 统计学方法

2 结果

子宫内膜息肉组(A组)与对照组(B组)比较，两组中Th0细胞(CD4+IFN-γ+IL-4+)无显著性差异(P>0.05)。A组外周血Th1细胞(CD4+IFN-γ+IL-4-)明显升高，经比较有显著性差异(P<0.05)；Th2细胞(CD4+IFN-γ-IL-4+)B组高于A组，但两组比较无显著性差异(P>0.05)；Th1/Th2比值A组较B组升高，经比较有显著性差异(P<0.05)，见表1。

对T淋巴细胞CD4/SSC分群设门圈出CD4+T淋巴细胞见图1、图2中的第1图；检测到APC anti-human IFN-γ结合的Th1细胞(每组第2图的Q1区)，PE anti-human IL-4结合的Th2细胞(每组第2图的Q3区)，兼有APC、PE染色的Th0细胞(每组第2图的Q2区)。

图1 A组CD4+T细胞中Th0、Th1、Th2细胞百分比

Fig.1 Percentages of Th0, Th1 and Th2 sub-groups in CD4+ T cells in group A

图2 B组CD4+T细胞中Th0、Th1、Th2细胞百分比

Fig.2 Percentages of Th0, Th1 and Th2 sub-groups in CD4+ T cells in group B

3 讨论

3.1 Th细胞的分类及功能特征

T淋巴细胞依据细胞表面分化抗原的不同可分为CD4+、CD8+两大亚群，分别代表辅助性T淋巴细胞(Th)和抑制/细胞毒性T淋巴细胞(Ts/Tc)。CD4+T细胞(Th)产生大量细胞因子，这些细胞因子在调节机体细胞免疫和体液免疫中起着重要的作用。根据分泌细胞因子的不同，CD4+细胞分为三大类，Th1细胞以产生IL-2、IFN-γ为主；Th2细胞产生IL-4、IL-6和IL-10；Th0细胞可分泌两类细胞因子。在正常情况下，Th1和Th2的前体细胞Th0细胞按一定比例向Th1和Th2细胞分化，两者以相互拮抗和自身促进的方式，形成复杂有序的细胞因子网络，分别行使各自不同的生理功能，调节正常的免疫应答。在某些疾病的状态下，Th0细胞受特异性抗原的刺激，使得Th1、Th2细胞某一亚群功能增强，另一亚群功能减弱，造成Th1/Th2平衡失调，产生细胞因子种类和数量的变化，结果进一步导致细胞免疫及体液免疫的紊乱，引起异常免疫应答。

3.2 子宫内膜息肉与Th1/Th2漂移的关系

子宫内膜息肉是较为常见的良性病变，本文中子宫内膜息肉患者的Th1/Th2表现为Th1细胞优势。有学者研究发现，子宫内膜息肉的不孕患者无论是外周血还是内膜组织中IFN-γ明显高于非子宫内膜息肉的不孕患者[2]。IFN-γ为Th1类细胞因子，另外巨噬细胞和自然杀伤(NK)细胞可分泌IFN-γ，IFN-γ可使致敏的T细胞从Th2经Th0向Thl转化；IFN-γ明显升高提示Th1/Th2表现为Th1优势，与本文研究结果一致。机体对抗自身及外来抗原入侵过程中，以Th1型介导的细胞免疫为主，Th1类细胞因子IL-2可刺激MHC Ⅱ类抗原的表达，并产生多种淋巴因子，还具有诱导细胞毒性淋巴细胞(CTL)、NK和淋巴因子激活杀伤(LAK)等多种杀伤性细胞的分化和效应功能。

IL-2能增加NK细胞的细胞毒性，并诱导其产生IFN-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α等细胞因子。IFN-γ低水平时抑制肿瘤的生长，高水平时促进肿瘤的生长[3]。Inagaki等(2003年)对子宫内膜息肉患者的宫腔灌洗液进行细胞因子的检测，并以正常宫腔灌洗液作为对照，结果发现灌洗液中的IL-1、IFN-γ的水平均比正常对照组高。蔡惠兰等[4]采用ELISA法检测子宫内膜息肉患者宫腔镜术前及术后放置左炔诺酮宫内缓释系统治疗1年后，宫腔灌洗液中IFN-γ、IL-6等细胞因子的变化情况，发现术后放置左炔诺酮宫内缓释系统治疗的患者宫腔灌洗液IFN-γ含量明显降低，IL-6含量明显增高，说明内膜息肉与IFN-γ和IL-6水平失衡，即Th1/Th2漂移有关。

越来越多的证据表明，慢性炎症增加癌症的风险，人类大约20%的癌症由慢性炎症发展而来[5]。例如结直肠癌被认为是由长期存在的肠道炎症发展而来。Hanada等(2006年)有研究在小鼠体内发现依赖于IFN-γ自发生长的结直肠肿瘤。Cicinelli等(2005年)的一项对25 000例宫腔镜检查标本分析显示，慢性子宫内膜炎与40%～50%的子宫内膜异常增生，尤其是子宫内膜息肉有关。Th1/Th2平衡向Th1漂移时，体内细胞因子的改变、促炎症作用的发生，可能使得子宫内膜异常增生，导致息肉的形成。

3.3 孕酮与Th1/Th2的关系

在妊娠期，Th1/Th2向Th2漂移可使母体对胚胎产生免疫耐受，从而维持正常妊娠状态[6]。孕酮及孕酮诱导的封闭因子是促进Th1/Th2向Th2漂移的机制之一[7]。子宫内膜息肉摘除术后复发率为3.7%～10%[8]。临床主要以孕激素类药物抑制子宫内膜息肉的复发，推测孕酮类药物的使用促进Th1/Th2向Th2方向偏移，从免疫机理上阻断子宫内膜息肉的生长。

本文中子宫内膜息肉患者外周血Th1/Th2平衡状态向Th1漂移，提示子宫内膜息肉与Th1/Th2平衡状态有一定相关性，为子宫内膜息肉发生机理的研究提出了新的方向，为子宫内膜息肉的治疗提供了更充分的依据。但是Th1/Th2漂移在子宫内膜息肉发生发展中的具体分子机理尚需更深入的探讨。

[1]Lieng M, Istre O, Sandvik L,etal.Prevalence, 1-year regression rate, and clinical significance of asymptomatic endometrial polyps:cross-sectional study[J].J Minim Invasive Gynecol,2009,16(4):465-471.

[2]Mollo A, Stile A, Alviqqi C,etal.Endometrial polyps in infertile patients:do high concentrations of interferon-gamma play a role?[J].Fertil Steril,2011,96(5):1209-1212.

[3]Wilke C M, Wei S, Wang L,etal.Dual biological effects of the cytokines interleukin-10 and interferon-γ[J].Cancer Immunol Immunother,2011,60(11):1529-1541.

[4]蔡惠兰,丁香翠,钱蓉蓉.子宫内膜息肉术后放置左炔诺孕酮宫内缓释系统对宫腔灌洗液中细胞因子的影响[J].中国医院药学杂志,2012,32(3):204-206.

[5]Terzic J, Grivennikov S, Karin E,etal.Inflammation and colon cancer[J].Gastroenterology,2010,138(6):2101-2114.

[6]Piao H L,Tao Y, Zhu R,etal.The CXCL12/CXCR4 axis is involved in the maintenance of Th2 bias at the maternal/fetal interface in early human pregnancy[J].Cell Mol Immunol,2012,9(5):423-430.

[7] Robinson D P,Klein S L. Pregnancy and pregnancy-associated hormones alter immune responses and disease pathogenesis [J]. Horm Behav,2012,62(3):263-271.

[8]Gardner F J, Konje J C, Bell S C,etal.Prevention of tamoxifen induced endometrial polyps using a levonorgestrel releasing intrauterine system long-term follow-up of a randomised control trial[J].Gynecol Oncol,2009,114(3):452-456.

[专业责任编辑：安瑞芳]

Correlation between Th1/Th2 balance and endometrial polyps

LI Hui, LI Xiao-hong, LU Yang, FAN Li-ping, LI Jin

(DepartmentofReproductiveMedicine,MaternityandChildCareHospitalofBaoanDistrictinShenzhen,BaoanDistrictMaternityandChildCareHospitalAffiliatedtoJinanUniversity,GuangdongShenzhen518133,China)

Objective To investigate the relationship between Th1/Th2 lymphocyte balance in peripheral blood and endometrial polyps. Methods There were 25 women with endometrial polyps and diagnosed by pathology (group A) accepting hysteroscopic curettage biopsy. Without abnormal change in gynecological ultrasound results, another 20 healthy women receiving pre-pregnancy check without abnormal ultrasonic results were selected (group B). Fasting venous blood was sampled from all cases during non-menstrual period, and in group A blood samples were colleted before hysteroscope operation. The distributions of Th0 cells (CD4+IFN-γ+IL-4+) and Th1 (CD4+IFN-γ+IL-4-)/Th2 (CD4+IFN-γ-IL-4+) were determined by 3-colored fluorescence labeled flow cytometry in two groups. Results The level of Th0 cells was not significantly different between two groups (P>0.05). The level of Th1 cells in group A was 33.33±8.68%, which was significantly higher than that in group B (22.35±3.88%) (t=5.658,P<0.05). The level of Th2 cells in group A was lower than that in group B (3.25±0.89%, 3.72±0.79%), but the difference was not significant (P>0.05). Compared with group B, Th1/Th2 ratio was obviously higher in group A (11.41±6.10, 6.24±1.69) (t=4.047,P<0.05).Conclusion There is a correlation between endometrial polyps and the balance of Th1/Th2, which provides new idea in studying the mechanism of endometrial polyps.

endometrial polyps；T helper cells；Th1/Th2 balance; flow cytometry

2015-01-19

深圳市宝安区科技计划社会公益资助项目(编号2014080)

李 慧(1979-)，女，主治医师，硕士，主要从事生殖医学的研究。

李 瑾，主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.05.010

R711.74

A

1673-5293(2015)05-0938-03