育龄期妇女宫颈HPV感染自然转归的随访分析

朱珍珍，郑 洁，肖苹妹，徐漾漾，陈海斌

(1.瑞安市中医院妇产科，浙江 瑞安 325200；2.温州医学院附属第三医院检验科，浙江 瑞安 325200)

育龄期妇女宫颈HPV感染自然转归的随访分析

朱珍珍1，郑 洁1，肖苹妹1，徐漾漾1，陈海斌2

(1.瑞安市中医院妇产科，浙江 瑞安 325200；2.温州医学院附属第三医院检验科，浙江 瑞安 325200)

目的 研究育龄期妇女宫颈人乳头瘤病毒(HPV)感染的自然转归。方法 选择20～40岁育龄期妇女宫颈HPV感染者596例进行定期(6、12、24个月)随访，失访4例，入组592例，入组者根据HPV类型分为低危组89例，高危组503例；两组TCT(-)、(+)分别21例、68例和131例、372例；两组DNA载量<500pg/mL、500～1 000pg/mL、>1 000pg/mL者分别为52例、21例、16例和296例、129例、78例；观察两组HPV感染的自然转归情况，并进行统计分析。结果 低危组随访6、12、24个月HPV感染自然转阴率均显著高于高危组(χ2值分别为12.720、11.578、17.843，均P<0.05)。低危组和高危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(-)者自然转阴率均显著高于TCT(+)者(χ2值分别为4.307、17.168、25.740、7.906、44.740、68.204，均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月，TCT(-)者自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(-)者(χ2值分别为6.355、8.605、12.663，均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月，TCT(+)者自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(+)者(χ2值分别为5.452、6.838、12.981，均P<0.05)。低危组DNA载量中<500pg/mL者随访6、12、24个月自然转阴率均显著高于高危组DNA载量中<500pg/mL者(χ2值分别为12.999、12.191、21.204，均P<0.05)。结论 育龄期妇女宫颈HPV感染者低危型自然转阴率高于高危型，TCT阴性者自然转阴率高于TCT阳性，DNA载量<500pg/mL HR-HPV感染者自然转阴率高于LR-HPV感染，DNA载量>500pg/mL的HR-HPV、LR-HPV感染者很少出现转阴现象。

育龄期妇女；宫颈；人乳头瘤病毒；感染；自然转归

人乳头瘤病毒(human papilloma virus HPV)感染是引起宫颈癌变的重要因素，大部分HPV感染属于一过性[1]。现已发现了200多种不同类型HPV，根据HPV致病性的差异，将其分为高危型和低危型两大类，其中感染生殖道黏膜的有50多种类型[2]，不同亚型HPV感染的致病性和后果不同。HPV感染的自然转归与经济的发展状况、患者自身的生活习惯和免疫功能、感染的轻重、HPV类型等因素有关[3]，了解HPV感染的流行病学特点，掌握其自然转归规律，可为临床治疗提供更多的参考依据，本研究旨在观察HPV感染的自然转阴率。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2010年1月至2013年6月在瑞安市中医院妇产科门诊就诊的育龄期妇女宫颈HPV感染者596例进行定期(6、12、24个月)随访，患者年龄20～40岁，其中失访4例，入组592例。入组者根据HPV类型(低危型和高危型)分低危组89例，高危组503例，两组年龄、液基薄层细胞学检查(thinprep cytologic test，TCT)和人乳头状瘤病毒-脱氧核糖核酸(human papilloma virus-deoxyribonucleic acid，HPV-DNA)载量分布结果比较均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性，见表1。入选者均前置知情同意书，并排除宫颈癌及其它宫颈和其它宫颈恶性疾病，无心血管、肝、肾等重要器官疾病，无内分泌疾病，无精神障碍性疾病。

1.2 标本采集

采集方法：①样本采集前3d内无阴道冲洗、上药，24h内无性生活；②截石位，扩张阴道，用专用毛刷在宫颈内口顺时针旋转6圈，停留20s采集宫颈脱落细胞；③将毛刷放入专用采集管；④将标本中的黏液、血液、炎症细胞与上皮细胞分离，放-20℃冰箱保存，24h内检测。

1.3 人乳头状瘤病毒脱氧核糖核酸定量检测和分型

用Digene公司提供的二代杂交捕获法(hybrid captureⅡ，HC-Ⅱ)HPV-DNA检测系统及配套试剂盒检测，严格按照说明书要求操作，实验室温度20～25℃，检测步骤：提取分离液、裂解、杂交、捕获、冲洗、收集信号、结果判定。用数据操纵语言(data manipulation language，DML) 2000系统判读，HPV-DNA含量超过lpg/mL即RLU/CO比值大于1为阳性。HPV-DNA定量分3级：<500pg/mL、500～1 000pg/mL、>l 000pg/mL。用配套HPV分型检测试剂盒，HPV分型基因芯片检测阅读系统检测13种高危人类乳头状病毒(high risk human papilloma virus，HR-HPV)(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)和16种低危人类乳头状病毒(low risk human papilloma virus，LR-HPV)(6、11、26、40、42、43、44、53、55、57、66、67、69、73、82)，基因芯片相应类型HPV位点出现蓝点为阳性。

1.4 液基薄层细胞学检查

取样本分离液，制成薄层涂片，用95%酒精固定，巴氏染色，由主治医师以上专业科医生诊断，采用TBS诊断系统进行细胞学分类诊断[4]：高度鳞状上皮内瘤变(high squamous intraepithelial neoplasia，HSIL)、低度鳞状上皮内瘤变(low grade squamous intraepithelial neoplasia，LSIL)、未能除外高度上皮内瘤变的不典型鳞状细胞(atypical squamous cell carcinoma of the high intraepithelial neoplasia，ASC-H)、未能明确意义的不典型鳞状细胞(failed to define the significance of atypical squamous cells，ASC-US)、正常范围(normal range,WML)、鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)。

1.5 随访周期和内容

所有入选者均于6、12、24个月行宫颈常规检查、TCT检查，HPV及DNA载量检查，TCT结果为不典型鳞状上皮细胞(ASC-US)及/或HR-HPV阳性者行阴道镜下多点活检。

1.6 统计学方法

2 结果

2.1 宫颈低危型和高危型人乳头瘤病毒感染自然转阴率分析

低危组随访6、12、24个月HPV感染自然转阴率均显著高于高危组(均P<0.05)，见表2。

表2 宫颈低危型和高危型HPV感染自然转阴率分析[n(%)]

Table 2 Nature negative rate of cervical low-risk and high-risk HPV infection[n(%)]

2.2 人乳头瘤病毒感染自然转阴率与宫颈疾病的相关性

低危组和高危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(-)者自然转阴率均显著高于TCT(+)者(均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(-)者自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(-)者(χ2值分别为6.355、8.605、12.663，均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(+)者自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(+)者(χ2值分别为5.452、6.838、12.981，均P<0.05)，见表3。

2.3 人乳头瘤病毒感染近期自然转阴率与DNA载量的相关性

低危组DNA载量中<500 pg/mL者随访6、12、24个月自然转阴率均显著高于高危组DNA载量中<500 pg/mL者(χ2值分别为12.999、12.191、21.204，均P<0.05)，见表4。

注：★为两组内TCT(-)与TCT(+)比较。

3 讨论

3.1 育龄期妇女宫颈低危型和高危型人乳头瘤病毒感染自然转阴率

HPV感染与CIN发病有关，并参与了CIN的进展，是预测宫颈癌前病变的因素[5]。HPV感染可引起细胞分化失调，导致重度不典型增生，最后发展为宫颈浸润癌，约需10～15年时间。大部分妇女一生可有短暂HPV感染，免疫力正常的患者可在2年内清除病毒，仅少数妇女会持续感染乃至最终发展成宫颈癌[6]。国内对宫颈HPV感染自然转归研究较少，了解宫颈HPV感染的自然转归规律，可为其随访、治疗提供统计学依据，避免过度治疗，取消感染者惧怕心理。本研究结果发现，随访6月、12月、24个月，低危型和高危型HPV感染的自然转阴率分别为6.74%、12.36%、19.10%和0.80%、3.78%、5.57%，宫颈HPV感染随着时间的推移其自然转阴率逐渐升高，LR-HPV的自然转阴率高于HR-HPV(P<0.05)。

3.2 育龄期妇女宫颈人乳头瘤病毒感染近期自然转阴率与宫颈疾病的相关性

2012年池银归等[3]统计Ⅰ级宫颈上皮内瘤变随访6、12、24个月期自然转阴率分别为1.74%、4.35%、8.70%，CIN可以自然转阴，Ⅰ级CIN伴HPV感染者其HPV也可自然转阴；宫颈疾病的病理结果与HPV的自然转阴率与是否存在差异值得临床去进一步探讨。本研究结果发现，低危组和高危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(-)者自然转阴率均显著高于TCT(+)者(均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(-)者自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(-)者(均P<0.05)，低危组HPV感染随访6、12、24个月 TCT(+)者近期自然转阴率均显著高于高危组HPV感染TCT(+)者(均P<0.05)，提示宫颈HPV感染的自然转阴率与宫颈细胞学结果阴性或阳性有关，但各级别细胞学结果其HPV的自然转阴率是否存在差异有待于进一步探讨。

3.3 育龄期妇女宫颈人乳头瘤病毒感染近期自然转阴率与DNA载量的相关性

宫颈病变程度与HPV 载量及阳性率存在相关性[6-7]。持续性高危型HPV感染可引发宫颈病变及宫颈癌[8]。HPV-DNA载量与HPV自然转阴率是否存在相关性相关报道较少，本研究结果发现，低危组DNA载量中<500pg/mL者随访6、12、24个月自然转阴率均显著高于高危组DNA载量中<500pg/mL者(均P<0.05)，两组HPV-DNA载量500～1 000pg/mL、>1 000pg/mL者均未出现转阴现象。因此，宫颈HPV感染者HPV-DNA的载量与其自然转阴率有明显相关性。

[1]曾银英,陈晓榆,田可歌,等.东莞地区白细胞介素-10基因多态性与HPV感染及宫颈病变相关性研究[J].临床和实验医学杂志,2015,14(8)636-639.

[2]蔡为民,阚延静,耿建祥,等.子宫颈尖锐湿疣组织中HPV感染基因型别分布[J].临床与实验病理学杂志,2015,31(4):395-399.

[3]池银归,朱珍珍,虞如芬.Ⅰ级宫颈上皮内瘤变近期随访结果分析[J].中国现代医生,2012,50(10):30-31.

[4]傅小一,李娟,张子雯,等.液基细胞学在子宫颈癌机会性筛查中的应用与探讨[J].宜春学院学报,2013,35(12):78-79.

[5]陈秀堂,黄小芳.安吉县育龄妇女HPV感染及CIN患病情况的调查分析[J].中国妇幼健康研究,2014,25(3):354-356。

[6]Origoni M,Carminati G,Sideri M,etal.“Low-grade positivity” of HPV viral load after atypical squamous cells of undetermined significance(ASC-US) cytology identifies women at low-risk for cervical intraepithelial neoplasia grade 2 and 3[J].Eur J Gynaecol Oncol,2012,33(3):261-264.

[7]De Freitas A C,Coimbra E C,Leitao Mda C.Molecular Targets of HPV Oncoproteins:Potenfia1 Biomarkers for Cervical Carcinogenesis[J].Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Reviews on Cancer,2014,1845(2):91-103.

[8]马静,袁世发,关丽云,等.高危型HPV 检测在宫颈病变漏诊中的应用[J].重庆医学,2015,44(9):1203-1205.

[专业责任编辑：安瑞芳]

Follow-up analysis of natural outcomes of cervical HPV infection in child-bearing women

ZHU Zhen-zhen1, ZHENG Jie1, XIAO Ping-mei1, XU Yang-yang1, CHEN Hai-bin2

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,RuianHospitalofTraditionalChineseMedicine,ZhejiangRuian325200,China;2.ClinicalLaboratory,ThirdHospitalAffiliatedtoWenzhouMedicalCollege,ZhejiangRuian325200,China)

Objective To study the natural outcomes of cervical HPV infection in child-bearing women. Methods Totally 596 cervical HPV-infected childbearing women aged 20-40 years old were followed up regularly (6, 12, 24 months). Among them, 4 were lost to follow up, and 592 were enrolled. Enrolled patients were classified into two groups, including 89 in low-risk group and 503 in high-risk group. In two groups there were 21 cases, 68 cases, 131 cases and 372 cases of TCT(-) and TCT (+). There were 52 cases, 21 cases, 16 cases, 296 cases, 129 cases and 78 cases with DNA loading<500pg/mL, DNA loading ranged 500-1 000pg/mL and DNA loading >1 000pg/mL in two groups. The natural outcomes of HPV infection in two groups were observed and analyzed. Results After follow-up for 6, 12 and 24 months, the negative rate of HPV infection was significantly higher in low-risk group than in high-risk group (χ2value was 12.720, 11.578 and 17.843, respectively, allP<0.05). The negative rate of patients with TCT(-) was significantly higher than those with TCT(+) in two groups after follow-up for 6, 12 and 24 months (χ2value was 4.307, 17.168, 25.740, 7.906, 44.740 and 68.204, respectively, allP<0.05). In low-risk group the negative rate of patients with TCT(-) was remarkably higher than in high-risk group (χ2value was 6.355, 8.605 and 12.663, respectively, allP<0.05), and the negative rate of patients with TCT(+) was obviously higher in low-risk group (χ2value was 5.452, 6.838 and 12.981, respectively, allP<0.05). Compared with the patients in high-risk group with DNA loading<500pg/mL, the negative rate of patients in low-risk group with DNA loading<500pg/mL was significantly higher (χ2value was 12.999, 12.191 and 21.204, respectively, allP<0.05). Conclusion Natural negative rate in child-bearing women infected with low-risk HPV type is higher than that with high-risk HPV type, and natural negative rate in TCT negative women is higher than that in TCT positive women. Natural negative rate in high-risk HPV infected women with DNA loading<500 pg/mL is higher than that in Low-risk HPV infected women, and negative conversion is rarely observed in high-risk HPV and low-risk HPV infected women with DNA loading >500pg/mL.

child-bearing women; cervix; human papilloma virus (HPV); infection; natural outcomes

2014-08-08

瑞安市科技局资助项目(项目编号20120379)；温州卫生局科技项目(项目编号：2012B032)

朱珍珍(1976-)，女，主治医师，主要从事妇产科临床工作。

肖苹妹，副主任医师。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.04.038

R711.7

A

1673-5293(2015)04-0769-04