冻干乳酸菌对肉鸡生长性能和免疫功能的影响

2015-01-21尹艳军郝延刚

饲料工业 2015年10期

■尹艳军郝延刚

（河北农业大学生命科学学院，河北保定 071000）

抗生素可非选择性抑菌或杀菌来抑制肠道内有害微生物的生长[1]，作为具有防病促生长的作用在集约化的畜牧业、工业化规模养殖中的饲料添加剂广泛应用[2-3]。但也造成了药物残留、耐药细菌的产生、疾病难以控制、大规模疫病群发、疾病易感性上升、动物免疫功能下降等危害[2-4]。因此，关于寻求抗生素替代品的研究势在必行。有研究表明，在动物基础日粮中添加适量的微生态制剂可改善肠道内环境，提高动物的生长性能，增强机体免疫力，保护动物健康生长[5-7]。乳酸菌作为肠道内重要的厌氧菌，具有较强的吸附能力，既能促进免疫器官的快速发育，又可增强动物的体液免疫和细胞免疫水平，防止疾病的发生，是制备活菌制剂的优良菌种[8-10]。本研究以冻干乳酸菌作为试验材料，研究其对肉鸡生长性能和免疫功能的影响，为合理开发利用乳酸菌微生态制剂提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

微生态制剂：试验用微生态制剂为冻干乳酸菌(有效活菌含量≥1.0×109CFU/g)，由山东蔚蓝生物科技有限公司提供。

试验饲料：商品日粮，购于河北康达畜禽养殖有限公司。

动物分组处理：1日龄AA肉仔鸡400只（购于北京大风种禽公司），分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个鸡舍，每个鸡舍100只。其中Ⅰ鸡舍为对照组，基础日粮中不添加活菌微生态制剂，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ鸡舍分别为低剂量、中剂量、高剂量组，基础日粮中分别添加0.5%、1.0%、2.0%活菌微生态制剂冻干乳酸菌，饲养按常规方法进行，试验期间各组饲养管理条件一致。

1.2 检测指标

1.2.1 生产性能

试验开始后记录每组肉鸡死淘情况，每周日上午以各组为单位空腹称重，计算每组鸡均重、平均日增重、日采食量和料重比。

1.2.2 免疫器官指数

免疫器官指数的测定参照谢仲权等[11]的方法。于试验的第3、6周周日每个组分别随机选取3只肉鸡，剖杀，完整剔出胸腺、脾脏和法氏囊于电子天平上称鲜重，计算免疫器官指数。

1.2.3 红细胞C3b受体花环率和免疫复合物花环率的测定

参照易力等[12]测定方法。各组随机选取3只肉鸡分别于试验第3、6周周日心脏取血抗凝，Hank’s液洗涤红细胞3次，调整红细胞悬液浓度为1.25×107个/ml。酵母悬液、血清和红细胞悬液各50 μl，37℃水浴30 min，摇匀加入25 μl 0.25%戊二醛静置5 min。推片，干燥，甲醛固定，瑞氏染色10 min，水洗，晾干。计算200个红细胞中形成花环的细胞百分率。测定红细胞免疫复合物花环率不加血清。

1.2.4 MTT法测定外周血T淋巴细胞转化能力

于试验第3、6周周日无菌采集肝素抗凝血2 ml，参照Mosmann T[13]和杨发龙等[14]研究方法对外周血T淋巴细胞转化能力进行测定。

1.3 数据处理

试验中所有试验数据均采用SPSS17.0统计处理软件进行方差分析，差异显著性用Duncan's新复极差法进行多重比较。

2 结果

2.1 冻干乳酸菌对肉鸡生长性能的影响

试验期间因病死亡情况：对照组死亡只数17只，低剂量组死亡11只，中、高剂量试验组分别死亡7只和5只。

2.1.1 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡均重的影响(见表1)

表1 冻干乳酸菌对肉鸡均重的影响(g)

由表1可以得出，与对照组(Ⅰ组)相比，21 d时，低剂量组对肉鸡均重影响不显著（P＞0.05），中、高剂量组肉鸡均重显著提高了3.39%、3.87%，差异显著（P＜0.05）；42 d时，所有处理组对肉鸡均重的影响差异不显著（P＞0.05）。由此可见，在对肉鸡均重的影响方面，中、高剂量组在试验前期（1～21 d）阶段对肉鸡均重影响效果较好。

2.1.2 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡平均日增重的影响(见表2)

由表2可知，与对照组相比，各处理组对试验后期(22～42 d)及全期(1～42 d)肉鸡平均日增重影响均不显著(P＞0.05)；试验前期(1～21 d)，低剂量组对肉鸡平均日增重影响差异不显著(P＞0.05)，中、高剂量组肉鸡平均日增重显著提高了20.54%、18.93%(P＜0.05)。由此可见，在对肉鸡平均日增重的影响方面，中、高剂量组在试验前期（1～21日龄）对肉鸡影响效果较好。

表2 冻干乳酸菌对肉鸡平均日增重的影响（g）

2.1.3 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡料重比的影响（见表3）

由表3可知，与对照组相比，试验前期（1～21 d）低剂量组对肉鸡料重比的影响不显著（P＞0.05），中、高剂量组肉鸡的料重比显著降低了5.85%、6.43%（P＜0.05）；试验后期（22～42 d）各处理组肉鸡料重比差异均不显著（P＞0.05）。试验全期（1～42 d），中剂量组料重比较对照组显著降低4.90%（P＜0.05）。由此可知，试验全期中剂量的冻干乳酸菌可以显著降低肉鸡的料重比。

表3 冻干乳酸菌对肉鸡料重比的影响

2.2 冻干乳酸菌对肉鸡免疫功能的影响

2.2.1 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡免疫器官指数的影响（见表4）

表4 冻干乳酸菌对肉鸡免疫器官指数的影响（g/kg）

由表4可知，与对照组相比，在试验21 d时，低剂量组对肉鸡脾脏指数、法氏囊指数显著提高33.75%、30.00%（P＜0.05）；中剂量组胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数显著提高了35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05）；高剂量组胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数显著提高了32.80%、32.50%、29.57%（P＜0.05）。42日龄时，3种剂量组对肉鸡法氏囊指数的影响均不显著（P＞0.05）；低剂量组对胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数影响均不显著（P＞0.05），中剂量组胸腺指数、脾脏指数显著提高23.56%、32.95%（P＜0.05），高剂量组胸腺指数、脾脏指数显著提高了20.19%、34.09%（P＜0.05）。由此可见，在肉鸡基础日粮中添加不同剂量的冻干乳酸菌，可不同程度地提高肉鸡的免疫器官指数。

2.2.2 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡红细胞花环率的影响（见表5）

表5 冻干乳酸菌对肉鸡红细胞花环率的影响（%）

由表5可知，与对照组相比，21 d时，低剂量组的RBC-CR1显著提高13.51%（P＜0.05），对RBC-IC的影响差异不显著（P＞0.05）；中剂量组RBC-CR1显著提高12.53%（P＜0.05），RBC-IC显著提高了141.67%（P＜0.05）；高剂量组 RBC-CR1显著提高 12.78%（P＜0.05），RBC-IC显著提高了108.10%（P＜0.05）。42日龄时，低剂量组对RBC-CR1、RBC-IC影响差异均不显著（P＞0.05）；中剂量组RBC-CR1显著提高52.21%（P＜0.05），RBC-IC显著提高了28.10%（P＜0.05）；高剂量组RBC-CR1显著提高57.47%（P＜0.05），RBC-IC显著提高了50.37%（P＜0.05）。

由此可知，在肉鸡基础日粮中添加中、高剂量的冻干乳酸菌均能提高红细胞花环率。

2.2.3 不同剂量冻干乳酸菌对肉鸡T淋巴细胞转化能力的影响（见表6）

表6 冻干乳酸菌对肉鸡T淋巴细胞转化能力的影响(OD570 nm)

由表6可知，与对照组相比，低剂量组在21、42日龄时对T淋巴细胞转化率差异性影响均不显著（P＞0.05），21日龄时，中、高剂量组T淋巴细胞转化率显著提高20%、12%（P＜0.05）；42日龄时，T淋巴细胞转化率显著提高9.80%、8.61%（P＜0.05）。由此可见，在肉鸡基础日粮中添加中、高剂量的冻干乳酸菌，均可显著提高肉鸡的T淋巴细胞转化能力。

3 讨论

3.1 冻干乳酸菌对肉鸡生长性能的影响

益生菌被动物摄入后，主要以两种形式进入动物胃肠道，一种以活菌形式直接进入胃肠道，改善肠道内环境，维护肠道微生态平衡；而另一种则以内生孢子形式进入胃肠道，复活后分泌多种酶类和抑制肠道致病菌多肽类物质，参与饲料消化，起到抑菌预防疾病的作用[15]。大量试验结果表明，在肉鸡基础日粮中添加益生菌可不同程度地提高肉鸡均重、平均日增重、降低料重比及死亡率等。唐志刚等[16]的研究结果表明，添加益生菌对肉鸡前期（1～21日龄）增重、平均日增重较对照组分别提高了7.2%（P＜0.05），料重比降低了6.04%（P＜0.05）；后期(22～42日龄)平均日增重较对照组提高1.00%(P＜0.05)。赵新海等[17]的研究也得到了类似的结果，在肉鸡基础日粮中添加微生态制剂，可减少肉鸡的死淘率。本研究结果表明，在肉鸡基础日粮中添加乳酸菌，试验前期(1～21日龄)高剂量组与对照组相比肉鸡均重、日增重分别提高了3.87%、18.93%(P＜0.05)，料重比降低 6.43%(P＜0.05)。试验全期中剂量组料重比较对照组显著性降低4.90%（P＜0.05）。与唐志刚等[16]、赵新海等[17]的研究结果相一致，肉鸡生长前期，消化系统发育尚未完善，饲料中的乳酸菌在肉鸡肠道内定植后，分泌的酶类有助于饲料的消化，因而前期肉鸡生产性能较对照组相比提高显著，肉鸡生长后期已具备完善的消化系统，故乳酸菌对肉鸡后期生长性能影响效果不明显。

3.2 冻干乳酸菌对肉鸡免疫器官指数的影响

作为禽类的重要免疫器官，胸腺、脾脏、法氏囊的发育状态和机能的强弱直接决定禽类的免疫水平[18]。免疫器官重量的相对增加，可以反映出机体免疫水平的增强[2，19]。目前，大多数关于益生菌对免疫器官影响的研究结果都表现为促进作用。张建梅等[2]的研究表明，复合微生态制剂对肉鸡的法氏囊指数和脾脏指数均高于对照组。本试验中剂量组肉鸡21日龄时胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数显著高于对照组35.69%、23.75%、32.61%（P＜0.05），高剂量组3种免疫器官指数依次较对照组提高32.80%、32.50%、29.75%（P＜0.05），高剂量组对免疫器官指数的提升幅度更高。本试验与张建梅等的研究结果相比，免疫器官指数提高幅度较高，这可能与肉鸡的品种、微生态制剂种类及饲养环境存在一定的关系。试验后期各组法氏囊指数差异性不显著，可能是42日龄时各组肉鸡的法氏囊均处于退化消失阶段的原因。

3.3 冻干乳酸菌对肉鸡红细胞免疫功能的影响

红细胞免疫系统即通过红细胞膜上的C3b受体实现红细胞识别、黏附、杀伤抗原及加速清除免疫复合物的能力[14，20]。目前，关于微生态制剂对肉鸡红细胞免疫功能影响的研究报道虽然不多，但有关此方面的研究都表明微生态制剂能够提高动物机体的红细胞花环率。司振书等[21]的研究结果表明，21日龄时，试验组E-C3bR和E-ICR比对照组高16.24%和19.93%，差异显著（P＜0.05）。本试验21日龄时，中剂量试验组RBC-CR1和RBC-IC分别显著高出对照组12.53%、141.67%，高剂量试验组RBC-CR1和RBC-IC分别较对照组提高12.78%、108.10%(P＜0.05)。与司振书等[21]的结果相比，本试验结果对RBC-CR1和RBC-IC花环率提升幅度不同，一方面可能是所用肉鸡品种不同，红细胞免疫活性不同；另一方面可能是所用微生态制剂不同，不同微生态制剂对红细胞的刺激程度不同。本试验中，试验组RBC-CR1数值高于对照组，说明乳酸菌提高了机体的非特异性免疫，当外界抗原入侵时，可结合更多的免疫复合物，清除抗原；中、高剂量试验组RBC-IC显著高于对照组，说明机体免疫复合物含量高于对照组，因而红细胞表面吸附的免疫复合物也明显高于对照组。其原因可能是乳酸菌既作为抗原物质刺激其它免疫器官，同时又改变了红细胞的免疫功能。

3.4 冻干乳酸菌对肉鸡T淋巴细胞转化能力影响

T淋巴细胞是动物机体内细胞免疫中占主导作用的免疫活性细胞，因此可以把外周血液中T淋巴细胞的数量作为评价机体细胞免疫功能的重要指标[22]。钟德金等[23]的研究表明，微生态制剂的添加可提高蛋鸡T淋巴细胞水平。本试验研究结果中、高剂量冻干乳酸菌的添加在试验全期均可显著提高T淋巴细胞转化能力（P＜0.05），与钟德金等[23]研究结果相一致。说明乳酸菌能促进肉鸡外周血T淋巴细胞的增殖反应，提高肉鸡的细胞免疫水平，低剂量组T淋巴细胞水平与对照组差异显著性不明显，可能与进入机体后乳酸菌定制剂量有关。