γ-亚麻酸甲酯纳米乳的制备及质量评价

郭义明，孙 录，戴维群，李 忻

(吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 130033)

γ-亚麻酸(全顺式6，9，12 - 十八碳三烯酸)具有调节血脂、抗血栓、抗脂质过氧化以及增强人体免疫功能等重要的生理活性，直接参与体内一系列代谢和生理合成过程，有独特的医疗和保健作用[1-2]，因此通常被制成高纯度的γ-亚麻酸甲酯(Gamma-linolenic acid methyl ester，GLA)及适宜的制剂以保存和应用。目前，临床使用的含γ-亚麻酸制剂以口服的月见草油胶丸、月见草油乳、月见草油软胶囊为主，其中γ-亚麻酸含量低，需要剂量比较大，生物利用度低。纳米乳是胶体分散系统，由油相、水相和表面活性剂组成的热力学稳定体系，能提高难溶药物的溶解度，粒径小，能促进药物吸收，提高药物生物利用度。随着纳米乳化技术日趋成熟，纳米乳在药学领域中的应用日益广泛[3-5]。笔者以γ-亚麻酸甲酯作油相，蒸馏水作水相、聚山梨酯80 为表面活性剂、聚乙二醇400 为助表面活性剂制备了水包油型γ-亚麻酸甲酯纳米乳，分析了影响纳米乳粒径的因素，并对其结构、形态、分散性和稳定性等进行评价，以期寻找γ-亚麻酸甲酯的一种安全、稳定、高效的用药系统，为研究γ-亚麻酸注射剂提供理论依据。

1 仪器与材料

FA25 型分散乳化机(上海弗鲁克机电设备有限公司);Zetasizer3000HSA 型激光粒度分析仪(英国MALVERN 公司);Hitachi8100IV 型透射电子显微镜(TEM，日本Hitachi 公司);FTIR8400S 型红外光谱仪(IR，日本SHIMADZU 公司);HP5890 -II 型气相色谱仪(美国HP 公司)。γ-亚麻酸甲酯(参照文献[5]合成，含量98.7%);聚山梨酯80(Tween 80，上海申宇医药化工有限公司);聚乙二醇400(PEG400，上海三浦化学试剂公司)。

2 方法与结果

2.1 制备[6]

以聚山梨酯80 作表面活性剂，PEG400 作助表面活性剂，γ-亚麻酸甲酯为油相，蒸馏水为水相，将聚山梨酯80 与γ-亚麻酸甲酯分别按质量比1 ∶10，2 ∶10，3 ∶10，4 ∶10，5 ∶10，6 ∶10，7 ∶10，8 ∶10，9 ∶10 混合，并加入PEG400(聚山梨酯80 与PEG400 质量比为5 ∶1)混匀，室温下将混合液加入到分散乳化机搅拌下的水相中，水相逐渐变成乳白色，继续搅拌20 min 后变成透明的水包油型γ-亚麻酸甲酯纳米乳，用激光粒度分析仪测定粒径，结果见图1。聚山梨酯80 的含量对纳米乳的粒径有显著影响，当γ-亚麻酸甲酯在乳液中含量为25%，聚山梨酯80 与γ-亚麻酸甲酯重量比为5 ∶10 时，得到了粒径小于100 nm 的γ-亚麻酸甲酯纳米乳。

图1 聚山梨酯80 对纳米乳粒径的影响

2.2 结构分析

在4 000 ～400 cm-1波长范围内，用溴化钾压片法测定γ-亚麻酸甲酯和γ-亚麻酸甲酯纳米乳的红外光谱，结果见图2。γ-亚麻酸甲酯的红外光谱(IR)图2 显示，在3 500 ～3 200 cm-1范围内的强峰属于羟基和分子内氢键结合峰;在1 740 cm-1的特征强吸收属于酯羰基官能团;在1 170 cm-1处的吸收峰属于羰基甲酯官能团;在2 800 ～3 000 cm-1的3 个尖峰和1 500 cm-1附近的尖锐峰带是由于烃链的C—H 伸展产生的。红外光谱在715 cm-1和1 620 cm-1处的特征吸收带表明了双键的存在。上述特征吸收峰在γ -亚麻酸甲酯纳米乳的IR 图2 中均能观察到。在1 245 cm-1和940 cm-1处的吸收峰是由于聚山梨酯80 存在而产生的，可归于C—O—C 的对称带和不对称带引起的伸缩震动。IR图谱证明，乳化后γ-亚麻酸甲酯的特征吸收峰没有发生任何移动，表明γ-亚麻酸甲酯没有发生化学结构变化。

图2 红外光谱图

2.3 形态观察

将γ-亚麻酸甲酯纳米乳室温下放置6 个月，用透射电子显微镜观察γ-亚麻酸甲酯纳米乳的形貌，结果见图3。可见，纳米乳液滴呈球形，平均直径约为60 nm。

图3 γ-亚麻酸甲酯纳米乳透射电镜图

2.4 稳定性

将γ-亚麻酸甲酯纳米乳室温下放置6 个月，外观、粒径均无明显变化，置离心机中，以10 000 r/min 的速度离心30 min 进行加速实验，溶液没有相分离发生。用气相色谱法测定纳米乳中的γ-亚麻酸甲酯含量[7]，结果未发生明显变化，表明将γ-亚麻酸甲酯制成纳米乳后质量稳定，纳米乳载体能保持γ-亚麻酸甲酯的稳定性。

2.5 分散性

用激光粒度分析仪分别测定新鲜制备及室温贮存6 个月的γ-亚麻酸甲酯纳米乳粒径，粒径分布见图4。结果贮存6 个月的γ-亚麻酸甲酯纳米乳粒子粒径分布虽有微弱变化，但依然介于40 ～100 nm 之间，有很好的分散性，平均粒径约60 nm。

图4 γ-亚麻酸甲酯纳米乳粒径分布图

3 讨论

γ-亚麻酸中含有3 个不饱和双键，对热敏感、容易氧化、在碱性条件下易发生双键位置及构型异构化反应，形成共轭多烯酸，失去生理活性。故制备时应选择在室温下进行。留样试验结果表明，水包油型γ-亚麻酸甲酯纳米乳室温贮存6 个月后各项检查指标未发生明显变化。

纳米乳制备工艺是由纳米乳的微观结构和特有的理化性质决定的，与表面活性剂类型、油相的性质及药物的油水分配系数等因素有关，本试验中表面活性剂聚山梨酯80 的用量对载药量影响最明显，乳滴的粒径及其分布也取决于聚山梨酯80 的用量。PEG400 做助表面活性剂有助于纳米乳的自发形成。

γ-亚麻酸甲酯纳米乳的制备为γ-亚麻酸的应用开拓了新的途径，基于本试验结果可以认为，这种纳米乳系统可以无须化学修饰而用于制备γ-亚麻酸甲酯的非肠道给药注射剂型。

[1] 乔 冬，庞广昌，李 杨. γ-亚麻酸对小鼠免疫系统的调节作用[J].食品科学，2011，32(21):254 -259.

[2] 周同永，任 飞，邓 黎，等. γ -亚麻酸及其生理生化功能研究进展[J]. 贵州农业科学，2011，39(3) :53 -58.

[3] 李艳萍，张志荣. 纳米乳的研究进展及其应用[J]. 华西药学杂志，2010，25(4): 485 -488.

[4] 李 蔚，王春洪. 自微乳及其在中药制剂中的应用[J]. 中国药业，2012，21(6):94 -96.

[5] 郭义明，王 虹，郭 宇.γ-亚麻酸乙酯的合成研究[J]. 中国生化药物杂志，2004，25(2):88 -90.

[6] 党 庆，魏希颖. 连翘种子油纳米乳的制备及体外评价[J]. 药物生物技术，2011，18(2)：155 -159.

[7] 刘春静，陈月坤，刘荣荣，等. 月见草油γ -亚麻酸绝对含量的测定[J]. 中国油脂，2012，37(1)：69 -71.