反相高效液相色谱法测定胃灵颗粒中芍药苷含量

王 建，刘金花，时亚杰

(1. 山东省济宁市食品药品检测中心，山东 济宁 272025; 2. 山东省济宁市精神病防治院，山东 济宁 272051)

胃灵颗粒由海螵蛸、白芍(炒)、白术(炒)、延胡索、甘草等中药组方，具有健胃和中、制酸止痛的功效，用于治疗胃炎、胃及十二指肠溃疡等疾病[1]。临床试验表明，胃灵颗粒对于胃脘痛、胃癌前病变、消化性溃疡具有良好的治疗作用。方中白芍具有养血调经、敛阴止汗、柔肝止痛、平抑肝阳之功效，但市售品多因硫熏导致有效成分分解，严重影响饮片质量，需对其质量进行严格控制。为进一步提高制剂质量，确保疗效，在原有标准的基础上，依据生产工艺参数，本试验中建立了有效控制白芍质量的检测指标，对提取方法、色谱条件进行了筛选，并进行了方法学验证。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200LC 型高效液相色谱仪(G1314C VWD SL 型紫外检测器，Chemstation 色谱数据工作站);Mettler XS205 型电子分析天平。芍药苷对照品( 中国药品生物制品检定所，批号为110736 -201035，含量以96.5%计);乙腈、磷酸为色谱纯，其他有机试剂均为分析纯，重蒸馏水。胃灵颗粒(规格均为5 g/袋，A厂家，批号为110701;B 厂家，批号为110904;C 厂家，批号为120101)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Thermo Hypersil GOLD C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(15 ∶85);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm，进样量:5 μL;柱温:25 ℃。理论板数按芍药苷峰计算，应不低于2 000，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

图1 高效液相色谱图

取本品研细，取约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定质量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称取芍药苷对照品8.52 mg，置100 mL 容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含81.11 μg 的溶液，作为对照品溶液。按处方工艺制备白芍药材的对照样品，根据供试品溶液的制备方法制备对照药材溶液。按处方量及工艺制备方法制备不含白芍药材的阴性样品，根据供试品溶液的制备方法，即得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液2，4，6，8，10，12 μL，按上述色谱条件进样测定，以峰面积( Y)为纵坐标、芍药苷进样量( X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=755.12 X+11.97，r=0.999 5(n=6)。结果表明，芍药苷进样量在0.164 4 ～0.986 6 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:取同一芍药苷对照品溶液，按上述色谱条件连续进样5 次，每次5 μL，测定峰面积。结果的RSD 为0.3%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液(批号为110701)，分别在制备后0，2，4，8，10，12 h 进样5 μL，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的RSD 为0.6%(n=5)，表明供试品溶液在12 h 内基本稳定。

重复性试验:取同批号(110701)样品5 份，每份1 g，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果样品平均含量5.269 4 mg/g，RSD 为0.9% ( n=5)，表明方法重复性较好。

加样回收试验:取已知含量的样品6 份，分别加入芍药苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，测定芍药苷含量，计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果( n=6)

2.4 样品含量测定

取3 批(批号为110701，110904，120101)样品，每批3 份，均按2.2.1 项下同法操作，制备供试品溶液，测定芍药苷的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果( n=3)

3 讨论

[2 -5]，以乙腈-0.1%磷酸溶液(15 ∶85) 为流动相，检测波长选230 nm，结果芍药苷峰与相邻峰分离良好，峰形对称，保留时间短且阴性样品无干扰。对样品提取时间、提取方法进行了比较，结果超声处理与加热回流提取相比，两者含量相当，故选用超声处理作为提取方法。还对提取时间(15，30，60 min)进行了考察，结果超声处理30 min 时芍药苷基本被提取完全，故选择提取时间为30 min。提取溶剂曾采用70%甲醇、稀乙醇，二者测得的含量一致，但稀乙醇提取的溶液黏性较大，为了更好地保护色谱仪，故选用70%甲醇作溶剂。从测定结果可见，由于胃灵颗粒原标准中无白芍含量测定项，因此得出的结果含量相差较大。采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便、快速、准确，可有效控制该药品的质量。

参考文献:

[1] WS3-B-1177 -92，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第六册)[S].

[2] 国家药典编委会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京：中国医药科技出版社，2010：726.

[3] 曾重英，龙海燕. 高效液相色谱法测定保胎灵片中芍药苷含量[J].中国药业，2011，20(9)：20 -21.

[4] 林 海，吴建明，戴德雄，等. 高效液相色谱法测定妇乐微丸中芍药苷含量[J]. 中国药业，2011，20(11)：29 -30.

[5] 张琼英. 高效液相色谱法测定健儿乐颗粒中芍药苷含量[J]. 中国药业，2010，19(17)：23.