高效液相色谱-串联四极杆质谱联用检测荞麦草中非法添加的苯乙双胍

陈 江，刘 凯，肖 引，罗定强

(1. 武警陕西省总队医院，陕西西安710054;2. 陕西省食品药品检验所，陕西西安710061)

荞麦草为蓼科植物，资源分布广。荞麦叶具有降糖、调脂作用[1]。中成药中非法添加化学成分，特别是非法添加降糖类成分，会危害患者的生命安全[2-3]。目前尚未有文献报道药材中检出非法添加化学成分，笔者收集了5 批荞麦草，经过高效液相色谱-串联四极杆质谱联用(LC-MS/MS)技术、多反应监测(MRM)扫描模式进行分析，其中1 批检出苯乙双胍。现报道如下。

1 仪器与试药

LC-20AD 型岛津高效液相色谱仪，API3200 串联四级杆质谱仪，Analyst 1.5 工作站，甲醇(美国Fisher 公司)。乙酸铵为分析纯(西安化学试剂厂)，超纯水(美国Millipore 纯水系统);盐酸苯乙双胍对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100922 -200701);5 批荞麦草样品均收购西安药材市场，经陕西省食品药品检验所鉴定为荞麦地上部分。

2 方法与结果

2.1 检测条件

色谱条件:色谱柱为Waters C18柱(150 mm×4.6 mm，3.5 μm)，流动相为甲醇-0.001 mol/L 乙酸铵(30 ∶70)，流速为0.2 mL/min。

质谱条件:离子源温度为450 ℃，离子化模式为ESI+，检测模式为MRM;雾化气(Gas1)气流量为40.00 mL/min，辅助加热气(Gas2)气流量为40.00 mL/min，气帘气(Curtain Gas)20.00 mL/min;喷雾电压、去集簇电压、碰撞能量电压值优化至最优灵敏度。离子对质谱参数见表1。

2.2 溶液制备

精密称取盐酸苯乙双胍对照品6.02 mg，加甲醇制成每1 mL含602 ng 的溶液，摇匀，即得对照品贮备液。取本品粗粉2 g，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，称定质量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

表1 苯乙双胍质谱参数

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品贮备液2 mL，分别置100，50，25，10，5 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别得到12.04，24.08，48.16，120.4，240.8 ng/mL 的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，按拟订的条件测定，以化合物定量离子对的峰面积( Y)对相应的浓度( X)进行线性回归计算，得线性方程Y=28 200 X+2 270(r=0.998 6)。结果表明，盐酸苯乙双胍进样量在12.04 ～240.8 ng 范围内与峰面积线性关系良好。

检测限与定量限确定:以信噪比S/ N 约为3 时，检测限为2.2 μg/Kg，S/ N 约为10 时，定量限为6.3 μg/Kg。

精密度试验:精密吸取苯乙双胍对照品溶液(48.16 ng/mL)，按拟订的条件连续测定5 次，以定量离子对计算精密度。结果的RSD 为2.66% ( n=5)。

稳定性试验:精密密吸取苯乙双胍对照品溶液(48.16 ng/mL)，按上述条件，分别在0，2，4，8，12 h 测定，以定量离子对计算。结果的RSD 为3.01% ( n=5)。

重复性试验:精密称取阳性样品2 g，平行6 份，依法制备供试品溶液，根据苯乙双胍定量离子对峰面积计算样品中苯乙双胍平均含量为1.52 μg/g，RSD 为3.13%(n=6)。

加样回收试验:取阴性样品粗粉2 g，分别精密加入盐酸苯乙双胍对照品溶液(24.08，48.16，120.4 ng/mL)50 mL，每个浓度平行制备3 份，按供试品溶液同法制备，按上述条件测定，计算回收率。结果低、中、高浓度溶液的平均加样回收率分别为85.6%，87.2%，89.6%，RSD 分别为2.1%，1.9%，1.6%(n=3)。

2.4 样品检测结果

按拟订的LC-MS/MS 条件进行测定，阳性样品与对照品苯乙双胍显相同保留时间的多反应监测离子对色谱峰。结果见图1。

3 讨论

中成药非法添加化学药品的目的是为了提高疗效、占有市场份额，但忽视了患者的健康安全，严重者可能危害生命。因此，监管部门应引起重视，加强宣传与管理。本试验中采用LC-MS/MS、多反应检测扫描方式进行样品检测。多反应监测模式可以看成2个SIM，试验时尽可能多选几个离子对，基质干扰时可更换相应的离子对，以提高专属性。判定阳性样品时，除阳性样品与对照品多反应监测离子对完全一致时，还应计算样品和对照品非定量离子对与定量离子对色谱峰的比值，仅当两者数值的相对偏差小于15%时方可判定两者为同一物质。另外，可利用定量离子计算阳性样品的含量。试验时，优化多反应监测离子对参数喷雾电压、去集簇电压、碰撞能量等条件，可提高灵敏度。

[1] 刘淑梅，韩淑英，崔国金，等. 甜荞麦叶总黄酮降糖、降脂作用及机制[J]. 第四军医大学学报，2003，24(9)：1 815.

[2] 杨 钊，陈安珍，吴爱英，等.UPLC-MS/MS 测定降糖类中成药及保健品中11 种化学药[J]. 药物分析杂志，2009，29(12):2 127.

图1 多反应监测离子对色谱峰

[3] 刘福艳，蒋 俊，谢元超，等. 液相色谱-质谱联用法检测中药制剂中掺入的双氯芬酸钠和醋酸泼尼松[J]. 药物分析杂志，2009，29(12):1 231.