姜黄素缓释片的制备及释放度研究
2015-01-12郑少华杨范莉陈琴华张继业王牛民西安交通大学第一附属医院西安7006西安交通大学药学院西安7006湖北医药学院附属东风医院实验中心十堰44008
郑少华,李 欣,周 莉,杨范莉,陈琴华,张继业,王牛民*(.西安交通大学第一附属医院,西安 7006;.西安交通大学药学院,西安 7006;.湖北医药学院附属东风医院实验中心,十堰 44008)
姜黄素缓释片的制备及释放度研究
郑少华1,李 欣1,周 莉2,杨范莉2,陈琴华3,张继业2,王牛民1*(1.西安交通大学第一附属医院,西安 710061;2.西安交通大学药学院,西安 710061;3.湖北医药学院附属东风医院实验中心,十堰 442008)
目的 制备姜黄素缓释片并对其释放度进行研究。方法 高效液相色谱法。色谱柱:XTerra C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-50mL·L-1冰醋酸溶液(60∶40);检测波长:420nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃。结果 在0.003 6~0.036mg·mL-1范围内线性关系良好,平均回收率为98.9%,RSD为1.2%,溶出8h后姜黄素累积释放率可达80%以上。结论 该缓释片释放性能良好,且测定方法准确可靠,可作为姜黄素缓释片释放度研究的评价方法。
姜黄素;高效液相色谱法;释放度
药用姜黄具有破血行气、通经止痛之功效[1]。姜黄素(curcumin,C21H20O6)是姜黄中的主要有效成分,具有抗氧化、抗炎及免疫调节、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化等生理和药理作用[2],并且其中一些药理作用已进入临床验证阶段,美国国立癌症研究所已将姜黄素列为第三代癌化学预防药[3]。但是,目前姜黄素还没有被批准上市的剂型,因此,众多学者致力于姜黄素制剂的研究。缓释剂型具有延长药物作用时间、提高治疗指数、减少服药剂量、降低毒性、服药方便和增加患者顺应性的特点。因此,本文研究制备了姜黄素缓释片并对其释放特性进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 ZRS-8G智能溶出仪(天津大学无线电厂);日本岛津LC-20AT系列高效液相色谱仪;AY-120电子天平(日本岛津);单冲压片机(北京国药龙立科技有限公司)。
1.2 试药 姜黄素对照品(中国食品药品检定研究院,批号0823-9802);姜黄素样品(质量分数≥98%,天津光复精细化工有限公司);姜黄素缓释片(自制);甲醇(天津科密欧化学试剂有限公司,色谱纯);十二烷基硫酸钠(上海晶纯有限公司);蒸馏水、液相用水(自制)。
2 方法与结果
2.1 姜黄素缓释片的制备 用单冲压片机粉末直接压片法制备姜黄素缓释片,片质量200mg,硬度2~3kg,每片的处方为:姜黄素37.50mg,卡波姆68.58mg,HPMC K4M51.25mg,十二烷基硫酸钠12.95mg,无水乳糖0.98mg,滑石粉2.45mg,硬脂酸镁3.30mg,玉米淀粉23.00mg。
2.2 姜黄素含量测定方法的建立
2.2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱为XTerra C18(150mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-50mL·L-1冰醋酸溶液(60∶40);检测波长为420nm;流速1mL·min-1;进样量20μL。理论板数按姜黄素峰计算达到3 000以上。
2.2.2 溶液制备 对照品溶液的制备:精密称取姜黄素对照品约3.6mg,置于100mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:精密称取40mg样品细粉(约含姜黄素7.5mg),置于100mL量瓶中,加5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液适量,振摇15min使溶解,用5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。
2.2.3 专属性考察 对2.2.2项下供试品溶液稀释进样20μL,显示主药成分在此色谱条件下,与杂质具有良好的分离效果,色谱图见图1。
图1 HPLC图A.姜黄素对照品;B.溶出样品;1.姜黄素Fig.1 HPLC chromatogramsA.curcumin reference;B.dissolution sample;1.curcumin
2.2.4 线性关系 精密称取姜黄素对照品3.6mg,置于100mL量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,作为储备液。分别精密量取储备液1,2.5,5和7.5mL,置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。分别取上述对照品溶液和储备液20μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,并以质量浓度(C)和峰面积(A)作线性回归。计算得回归方程:Y=128 031 524 X-374 349,r=0.999 3。结果表明,姜黄素在0.003 6~0.036mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.2.5 精密度实验 分别量取2.2.2项下的对照品溶液2,6和8mL,置于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀。分别连续进样5次,记录色谱图,以峰面积计算,RSD分别为0.69%,0.23%和0.19%,结果表明本方法精密度良好。
2.2.6 稳定性实验 取2.2.2项下的供试品溶液,分别于0,2,4,6,12,24和48h进样20μL,记录峰面积,RSD为0.35%(n=7),表明供试品溶液在室温下48h内稳定。
2.2.7 重复性实验 精密称取同一批样品(批号:20131222)共6份,加5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液稀释成0.03mg·mL-1的样品溶液,取20μL注入高效液相色谱仪,记录色谱图,得RSD=0.66%(n=6),表明方法的重复性良好。
2.2.8 回收率实验 精密称取批号为20131223的姜黄素缓释片细粉适量(相当于姜黄素11mg),置于100mL量瓶中,分别加入姜黄素对照品储备液(称取姜黄素对照品111mg,置于100mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀)约3.00,5.00和7.00mL,加5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液稀释至刻度,摇匀,制成低、中、高3种质量浓度的溶液各3份。各稀释10倍后分别取20μL注入高效液相色谱仪,记录色谱图,计算回收率,见表1。
表1 姜黄素加样回收率实验结果Tab.1 Results of curcumin recovery rate
2.2.9 溶出度测定 将3批样品片剂(批号20131222,20131223,20131224)按《中国药典》(2010年版二部附录ⅩC)规定的篮法进行实验[4]。溶出介质为500mL的5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液,温度为37±1℃,转速为50r·min-1。于1,2,3,4,5,6,7和8h时定时取样,过滤,同时立即补加等量释放介质。取出的样品液用甲醇稀释2.5倍进行HPLC分析,用标准曲线计算得累积释放度。结果显示,3批片剂都具有较好的释放。结果如表2。
表2 3批姜黄素缓释片释放实验结果Tab.2 Cumulative release results of Curcumin Sustained Tablets
3 讨论
选择色谱条件时,甲醇和水作为流动相姜黄素色谱峰会产生拖尾现象,但改为50mL·L-1冰醋酸溶液后,拖尾现象即消失。
姜黄素在水中的溶解度很差,有文献记载阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠可以使姜黄素的溶解度增大1倍,且质量浓度为5g·L-1的十二烷基硫酸钠对姜黄素的增溶作用最强[5],因此,本研究选择质量浓度为5g·L-1十二烷基硫酸钠水溶液作为溶出介质,以增加姜黄素的溶出效果,产生这种作用的可能原因是表面活性剂十二烷基硫酸钠在溶液中形成了临界胶束,对有效成分产生增溶作用[6]。
在进行姜黄素溶出度实验时,因姜黄素长时间见光易分解,因此实验过程必须在避光的条件下操作,溶出所得样品需立即处理进样,否则要在避光条件下保存。
姜黄素缓释片的处方中卡波姆和HPMC K4M作为缓释材料联合被使用,同时为增加姜黄素的溶解加入十二烷基硫酸钠作为增溶剂,无水乳糖为致孔剂,滑石粉和硬脂酸镁为润滑剂,玉米淀粉则为填充剂。
[1]韩刚,张义春,刘士勇.姜黄中姜黄素含量测定方法的比较[J].西北药学杂志,2005,20(1):15-16.
[2]牛生洋,郝峰鸽,许秋亚.姜黄素的提取及应用研究进展[J].河南科技学院学报:自然科学版,2008,36(4):58-61.
[3]张军,郭卫,翟光喜.姜黄素剂型的研究概况[J].食品与药品,2010,12(3):133-137.
[4]国家药典委员会.中国药典2010年版[S].二部.北京:中国医药科技出版社,2010:1044.
[5]韩刚,霍文,李秋影,等.姜黄素的稳定性研究[J].中成药,2007,29(2):291-293.
[6]韩刚,韩学成,张卫国.表面活性剂提高姜黄素提取率的研究[J].中成药,2004,26(4):13-15.
Preparation and release behavior of Curcumin Sustained Tablets
ZHENG Shaohua1,LI Xin1,ZHOU Li2,YANG Fanli2,CHEN Qinhua3,ZHANG Jiye2,WANG Niumin1*(1.The First Affiliated Hospital of Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710061,China;2.School of Pharmacy,Xi′an Jiaotong University,Xi′an 710061,China;3.Experiment Center,Dongfeng Hospital of Hubei Medical College,Shiyan 442008,China)
Objective To research the preparation method and release behavior of Curcumin Sustained Tablets.Methods The HPLC quantitative analysis was performed on an XTerra C18column(150mm×4.6mm,5μm)with methanol and 50mL·L-1glacial acetic acid solution(60∶40)as the mobile phase at a flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was 420nm and the column temperature was at 30℃.Results The calibration curve showed good linearity ranged from 0.003 6to 0.036mg·mL-1.The average recovery was 98.9%and RSD was 1.2%.Curcumin released from the tablets were more than 80%at 8h.Conclusion The release performance of Curcumin Sustained Tablets is good,and the analytical method is accurate and reliable,which can be used as an evaluation method for the release of Curcumin Sustained Tablets.
curcumin;HPLC;release behavior
10.3969/j.issn.1004-2407.2015.01.017
R944
A
1004-2407(2015)01-0065-03
2014-06-17)
陕西省自然科学基金(编号:2012JQ4025)
郑少华,女,主治医师
*通信作者:王牛民,男,主管药师