提高广枣药材质量标准研究

龙凯花，刘 峰，王春柳，杨东花，李彤晖，辛永洁，李 晔＊（.陕西中医学院，咸阳 7206；2.西安交通大学药学院天然药物与工程中心，西安 7006；.陕西步长制药有限公司，西安 70075；.陕西省中医药研究院，西安 7000）

提高广枣药材质量标准研究

龙凯花1，刘 峰2，3，王春柳4，杨东花3，李彤晖4，辛永洁4，李 晔4＊（1.陕西中医学院，咸阳 712046；2.西安交通大学药学院天然药物与工程中心，西安 710061；3.陕西步长制药有限公司，西安 710075；4.陕西省中医药研究院，西安 710003）

目的 提高广枣药材的质量控制标准。方法 采用薄层色谱法（TLC）对广枣进行定性鉴别，高效液相色谱法（HPLC）同时测定广枣中没食子酸与原儿茶酸的含量。结果 TLC对没食子酸与原儿茶酸分离度均良好；没食子酸在3.53～70.60μg·mL－1范围内线性关系良好，平均加样回收率为103.8%，RSD为1.5%（n＝6）；原儿茶酸在6.24～124.8μg·mL－1范围内线性关系良好，平均加样回收率为101.4%，RSD为1.1%（n＝6）。结论 该定性方法专属性强，定量方法简便、快捷、准确，可作为广枣药材的质量控制方法。

没食子酸；原儿茶酸；广枣；质量标准；TLC；HPLC

广枣系蒙古族习用药材，为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris（Roxb）Burtt et Hill的干燥成熟果实，具有行气活血、养心安神的功效，用于气滞血瘀、胸痹作痛、心悸气短、心神不安［1］，为常用蒙药，是蒙医治疗心血管疾病的主药［2］。《中国药典》（2010年版）广枣药材标准中，仅对没食子酸进行薄层鉴别与含量测定。中药发挥治疗作用基于其所含的多种化学成分，单凭某一成分定性和定量的传统中药质量评价方法，其有效性和专属性不足以全面反映其质量。广枣中除没食子酸［3］外，水溶性酚酸成分原儿茶酸具有明显的抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集作用和抗缺氧活性［4－6］。为此，本实验对没食子酸与原儿茶酸同时进行定性鉴别与含量测定，在定性鉴别中还加入了广枣对照药材的鉴别，为有效控制广枣的质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；BP211D型电子分析天平（德国赛多利斯天平有限公司）；超纯水系统（Millipore，法国）。

1.2 试药 没食子酸对照品（供含量测定用，批号110831－200302），广枣对照药材（批号121334－200401），均购自中国药品生物制品检定所；原儿茶酸对照品（供含量测定用，批号110809－201205）购自中国食品药品检定研究院；薄层色谱硅胶G（青岛海洋化工有限公司）；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。广枣药材购自安徽药材市场，经陕西中医学院生药教研室王西芳教授鉴定为漆树科植物南酸枣Choerospondias axillaris（Roxb.）Burtt et Hill的干燥成熟果实。

2 方法与结果

2.1 鉴别 取广枣药材粉末2g，加甲醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液作为供试品溶液。另取广枣对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再分别取没食子酸与原儿茶酸对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录ⅥB）实验，吸取供试品溶液和对照药材溶液10μL及对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－丙酮－甲酸（5∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10g·L－1三氯化铁溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.2 没食子酸与原儿茶酸的含量测定

2.2.1 色谱条件 Kromasil Su C18柱（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－4mL·L－1磷酸（6∶94）；检测波长：270nm；柱温：35℃；流速：1.0mL·min－1；进样量：10μL。见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品、原儿茶酸对照品适量，置于棕色量瓶中，加甲醇制成每1mL含没食子酸0.353mg、原儿茶酸0.624mg的溶液，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉约1.5g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数70%甲醇25mL，称定质量，超声处理50min，放冷，用体积分数70%甲醇补足减失的质量，摇匀，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液储备液0.1，0.5，1，1.4，1.7和2mL，置于10mL棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密量取10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以没食子酸、原儿茶酸质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得没食子酸回归方程：Y＝144.56 X＋4.624 3（r＝0.999 9），线性范围为3.53～70.60μg·mL－1，原儿茶酸回归方程：Y＝153.96 X＋3.438 4（r＝0.999 9），线性范围为6.24～124.8μg·mL－1。

图1 HPLC图A.混合对照品溶液；B.广枣（广西）I；C.广枣（内蒙）I；1.没食子酸；2.原儿茶酸Fig.1 HPLC chromatogramsA.mixed control substances；B.Choerospondiatis Fructus（Guangxi）I；C.Choerospondiatis Fructus（Neimeng）I；1.gallic acid；2.protocatechuic acid

2.2.5 精密度实验 精密吸取混合对照品溶液10μL，重复进样6次，结果没食子酸与原儿茶酸峰面积的RSD分别为0.105%和0.241%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 重复性实验 精密称取同一批样品6份，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件连续测定6次，结果没食子酸平均质量浓度为0.029 4mg·mL－1，RSD为1.418%，原儿茶酸平均质量浓度为0.106 6mg·mL－1，RSD为1.882%，表明该方法重复性良好。

2.2.7 稳定性实验 取同一产地的广枣药材，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，放置0，4，8，12，16，20和24h分别进样10μL测定，没食子酸和原儿茶酸的峰面积RSD分别为0.344%和0.785%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.8 加样回收实验 准确称取已知含量的广西广枣样品适量，加入定量的没食子酸、原儿茶酸对照品溶液，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，计算平均加样回收率。没食子酸和原儿茶酸的加样回收率分别为103.8%和101.4%，见表1和表2。

表1 没食子酸加样回收率测定结果Tab.1 Recovery experiment results of gallic acid

表2 原儿茶酸加样回收率结果Tab.2 Recovery experiment results of protocatechuic acid

2.2.9 样品测定 按2.2.3项下方法制备供试品溶

液，按2.2.1项下色谱条件测定样品中没食子酸、原

儿茶酸的含量，结果见表3。

表3 广枣中没食子酸与原儿茶酸的含量测定结果Tab.3 Determination results of gallic acid and protocatechuic acid in Choerospondiatis Fructus

3 讨论

广枣药材的薄层鉴别中，与药典方法相比简化了制样方法，缩短了提取时间，减少了提取程序，并增加了广枣的对照药材，为定性分析提供了有效、简便、快捷的控制质量依据。

分别用乙醚、乙酸乙酯、乙醇、乙醇－水（体积分数50%和95%）、甲醇、甲醇－水（体积分数30%，50%，70%和90%）作为提取溶剂，采用超声提取，并对超声时间（20，30，40，50和60min）进行考察。结果表明，用体积分数70%的甲醇水溶液超声50min可最大限度地对没食子酸与原儿茶酸进行提取。

TLC定性鉴别时，同一条件下，广枣（广西）中没食子酸与原儿茶酸的含量均高于广枣（内蒙），通过HPLC含量测定，广枣（广西）中原儿茶酸的含量约为广枣（内蒙）的10倍。不同产地的广枣中没食子酸和原儿茶酸的含量差异较大，质量参差不齐。其中广枣（广西）中没食子酸与原儿茶酸的含量相差较大，比值达3.6，此外，广枣的酚酸类成分中没食子酸和原儿茶酸含量的相关性表现在药效学上是否也有所不同还需进一步研究。

［1］国家药典委员会.中国药典2010年版［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：41.

［2］汤喜兰，刘建勋，李磊，等.广枣模拟总有机酸对心肌缺血再灌注损伤的保护作用［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19（4）：168－172.

［3］刘莲英，杨瑞瑞，李维凤.广枣中没食子酸的含量测定［J］.西北药学杂志，2002，17（5）：204－205.

［4］Cao Y G，Zhang L，Ma C，et al.Metabolism of protocatechuic acid influences fatty acid oxidation in rat heart：new anti－angina mechanism implication［J］.Biochem Pharmacol，2009，77：1096－1104.

［5］王勤，孙芸，李维凤.HPLC法测定锁阳中没食子酸和原儿茶酸的含量［J］.西北药学杂志，2010，25（3）：190－192.

［6］郭英，贝玉祥，王雪梅，等.广枣提取物体外清除活性氧自由基及抗氧化作用研究［J］.微量元素与健康研究，2008，25（5）：22－24.

Improvement of quality standard for ChoerospondiatisFructus

LONG Kaihua1，LIU Feng2，3，WANG Chunliu4，YANG Donghua3，LI Tonghui4，XIN Yongjie4，LI Ye4＊（1.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China；2.Natural Medicines and Engineering Center，School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；3.Shaanxi Buchang Pharmaceutical Limited Company，Xi′an 710075，China；4.Shaanxi Academy of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China）

Objective To improve the quality standard of Choerospondiatis Fructus.Methods Thin layer chromatography（TLC）was used to identify Choerospondiatis Fructus，and high performance liquid chromatography（HPLC）was used to determine the gallic acid and protocatechuic acid content in the Choerospondiatis Fructus.Results TLC showed excellent performance for both gallic acid and protocatechuic acid；gallic acid in the range of 3.53－70.60μg·mL－1showed good linear relationship.The average recovery was 103.8%，and RSD was 1.5%（n＝6）；protocatechuic acid in the range of 6.24－124.8μg·mL－1showed good linear relationship.The average recovery was 101.4%，and RSD was 1.1%（n＝6）.Conclusion The qualitative method is specific.The quantitative method is simple，fast and accurate，and can be used for the quality control of Choerospondiatis Fructus.

gallic acid；protocatechuic acid；Choerospondiatis Fructus；quality standard；TLC；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.01.004

R282

A

1004－2407（2015）01－0014－03

2014－07－13）

国家“十二五重大新药创制”科技重大专项（编号：2011ZX09401－308－6）

龙凯花，女，在读硕士研究生

＊通信作者：李晔，女，研究员