百令胶囊对大鼠急性肾缺血再灌注损伤的保护作用

湖北医药学院附属太和医院 （十堰 442000） 宋艳丽 郭俐宏 朱克刚

急性肾损伤（Acute kidney injury，AKI）是一组临床综合征，是指突发（1～7d内）和持续（＞24h）的肾功能突然下降，血清肌酐（Cr）至少上升0．5mg／dl，表现为氮质血症、水电解质和酸碱平衡以及全身各系统症状，可伴有少尿（＜400ml／24h或17ml／h）或无尿（＜100ml／24h）病死率达30%～60%［1］。急性肾损伤的发生过程中肾脏缺血-再灌注在发病机制中占重要地位，百令胶囊常用于其辅助性治疗并有一定的疗效。本组通过大鼠急性肾缺血再灌注损伤的动物模型研究百令胶囊治疗机制，为临床用药提供理论依据。

材料与方法

1 实验动物 选择健康SD大鼠30只，体重200～250g，雌雄兼用，SPF级，湖北省实验动物研究中心提供，合格证：SCXK（鄂）2010～2013。

2 药品试剂及仪器 MDA测试盒由南京生物医学工程研究所提供；日立7150型全自动生化分析仪由日本日立精密仪器株式会社提供 ；水合氯醛由青岛沙子口化工厂提供（批号：970108）；百令胶囊由杭州中美华东制药有限公司提供（国药准字Z10910036）。

3 大鼠急性肾缺血再灌注损伤动物模型制备将大鼠随机分为3组：①假手术组；②模型组；③百令胶囊组；10% 水合氯醛（28mg／100g）经腹腔注射麻醉，仰卧位固定，腹正中切口，分离腹主动脉上双侧肾动脉分支，夹闭双侧肾动、静脉45min后再灌注45min，反复3次即可［2］。再灌后逐层缝合腹膜，腹壁肌肉和皮肤。术后模型组按（1ml／100g）0．95%生理盐水灌胃；假手术组只灌等量0．95%生理盐水但不夹闭造模；百令胶囊组按（0．2g／100g）灌胃，以上各组连续灌胃14d（1次／d），3组再灌注后24h及第14天心脏直接取血送检。

4 检测指标和方法 第14天心脏取血按文献［3］方法测定血清 MDA、SOD含量，采用日立7150型全自动生化分析仪测定血清肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）。

结 果

1 大鼠一般情况变化 假手术组大鼠体毛有光泽，反应敏捷，饮食正常，无死亡。百令胶囊组大鼠比假手术组稍差，部分鼠体毛光泽，反应一般，饮食正常，1例死亡。模型组大鼠体毛无光泽，竖毛，反应迟钝，蜷缩少动，饮食量少，模型组死亡5例。

2 血清MDA含量及SOD活性 见表1。模型组血清MDA含量14d后明显高于假手术组（P＜0．05），提示模型组肾损伤严重。百令胶囊组14d后血清MDA含量释放明显少于模型组（P＜0．05），SOD明显高于模型组（P＜0．05）。提示百令胶囊能明显抑制MDA的产生，并具有清除氧自由基抑制脂质过氧化等作用。

3 大鼠血清肌酐和尿素氮水平 见表2。模型组血清肌酐含量14d后明显高于假手术组（P＜0．05），提示模型组肾损伤严重。百令胶囊组14d后血清肌酐含量明显少于模型组（P＜0．05）；尿素氮降低并接近正常水平，与模型组比较有显著性差异（P＜0．05），提示百令胶囊能明显降低血清肌酐及尿素氮。

表1 两组病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

表1 两组病例血清MDA及SOD含量（±s，n＝10）

注：▲与假手术组比较，P＜0．05；＃与模型组组比较，P＜0．05

MDA（nmol／ml）SOD（U／ml）组 别治疗前 治疗14d后 治疗前 治疗14d后±6．51模型组 147．22±11．31 188．57±17．12▲ 68．21±5．33 61．24±4．52百令胶囊组 147．39±12．38 152．27±14．23▲＃ 68．59±5．47 99．32±7．72▲＃假手术组 148．26±12．37 148．57±12．11 78．21±6．36 75．72

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

表2 大鼠血清Cr和BUN水平（±s，n＝10）

注：▲与假手术组比较，P＜0．05；＃与模型组组比较，P＜0．05

BUN（mmol／L）组 别Cr（μmol／L）治疗前 治疗14d后 治疗前 治疗14d后94．21±8．34 93．57±7．13 5．24±0．31 5．74±0．12模型组 95．22±8．57 168．33±17．48▲ 14．96±0．29 20．74±0．78▲百令胶囊组 95．31±8．35 102．24±10．24▲＃ 15．57±0．45 8．01±0．61▲＃假手术组

讨 论

百令胶囊为冬虫夏草菌经发酵制成虫草菌粉，具有与天然虫草基本一致的药理作用［4］，主要成份有腺苷、虫草素、蛋白质、多种氨基酸、糖及多种维生素、微量元素等。用于支气管哮喘、慢性支气管炎、慢性肾功能不全等治疗。现代研究证实：冬虫夏草有抗炎、调节机体免疫功能、抗脂质代谢作用，其腺苷可使SOD升高，对清除自由基，降低脂质过氧化物，改善肾血流，改善肾功能起着非常重要的作用［5］。

急性肾损伤是由多种病因导致、涉及多学科的临床常见危重病，在医院具有较高的发病率［6］，常见于造影剂、创伤、大手术、药物肾毒等。急性肾缺血再灌注损伤过程中产生大量的氧自由基，引起过氧化反应，造成细胞膜基本特征的改变，MAD大量产生，MDA是脂质过氧化代谢产物，可间接反映细胞受氧自由基损伤的程度。而SOD是清除自由基的一种特性酶，保护细胞免受损害，可间接反映机体清除氧自由基的能力。故测定MDA及SOD可以证明抗氧化功能。本实验研究结果显示：在肾急性缺血14d后，百令胶囊组MDA含量明显低于模型组，提示百令胶囊能抑制MDA的产生，而百令胶囊组SOD的明显增高，说明其具有清除自由基抑制脂质过氧化的作用，这与文献［7］报道百令胶囊抗氧化作用（即清除对机体有毒害作用的自由基）相一致。百令胶囊治疗14d后血清Cr含量明显减少，尿素氮降低并接近正常水平，提示百令胶囊能明显清除血清肌酐及尿素氮。说明百令胶囊对急性肾缺血再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能为清除自由基抑制脂质过氧化，抑制横纹肌溶解，增加肾血流量及肾小球滤过率，改善微循环，降低肾小管对肌酐及尿素氮的重吸收进而改善肾功能。

总之，本实验研究证实百令胶囊对大鼠急性肾缺血再灌注损伤有一定的保护作用，下一步我们将采用免疫组化观察百令胶囊对肾小管再生情况的影响。

［1］ Palevsky PM，Zhang JH，O’Connor TZ，etal．Intensity of renal support in itically ill patients with acute kidney inju-ry［J］．N Engl J Med，2008，359（6）：7-9．

［2］ 张 伟，夏晓红，王燕凌，等．老年大鼠肾缺血再灌注损伤一氧化氮合酶的变化与意义 ［J］．陕西医学杂志，2011，39（4）：421-423．

［3］ 郭俐宏，陈德森，张 琴，等．血塞通治疗脑梗死患者74例临床分析 ［J］．陕西医学杂志，2011，40（4）：477-479．

［4］ 李辉锋，夏祖生．贝那普利联合百令胶囊治疗慢性肾炎临床观察 ［J］．当代医学，2011，17（29）：135-135．

［5］ 池艳春，郭 静，王 丹，等．百令胶囊对糖尿病肾病大鼠TGF-l／Smad信号通路影响的实验研究 ［J］．中国中医药科技，2010，17（3）：204-205．

［6］ 张涛志 ，刘东伟．还原型谷胱甘肽治疗急性肾损伤12例［J］．中国药业，2012，21（5）：67-68．

［7］ De-Rubeais FR，Aven PA，Melhem MF，etal．A ttenuation of renal injury in db／db mice over expressing superoxide dismutase［J］．Diabetes，2004，53（3）：762-768．