CD147分子表达与前列腺癌恶性程度相关性研究＊

西安医学院机能实验中心（西安710021） 周 芳 谭逸然

前列腺癌（Prostate cancer，PCa）的发病率在不同种族和地区有着极大的差异，在西方国家，PCa是男性最常见的恶性肿瘤，约占男性恶性肿瘤的1／3，死亡人数居第2位，仅次于肺癌。我国是PCa的低发区，但随着人群寿命的延长，饮食结构及生活习惯的改变，疾病检测手段的提高，前列腺癌的发病率逐年上升，并成为威胁我国老年男性生命的重要疾病［1，2］。

CD147分子是最近肿瘤研究的一个新兴热点。研究发现CD147在正常细胞中不表达或仅有极低的表达，但在乳腺癌、肝癌、喉鳞癌等多种恶性肿瘤中高度表达，且肿瘤恶性程度越高，CD147蛋白表达越高［3，4］。证明其表达与肿瘤的发生相关性很强。但CD147在前列腺癌中表达如何改变以及与前列腺癌恶性程度的关系未见报道。

材料与方法

1 组织来源 本实验选取2004～2007年间，西安医学院第一附属医院97例前列腺癌患者组织和45例正常前列腺组织进行对比，组织标本由西安交通大学第一附属医院病理科提供。97例前列腺癌患者平均年龄68．6岁，均有临床及病理诊断。按TNM分期I期15例，II期26例，III期29例，IV期27例。全部标本均经10%多聚甲醛处理，石蜡包埋，4μm连续切片。

2 实验试剂 CD147单克隆抗体、S-P（Streptavidin／Peroxidase）免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均来自美国Sigma公司。

3 石蜡切片免疫组化染色 采用S-P免疫组化染色法检测CD147，用已知CD147阳性肝癌标本做阳性对照，PBS取代一抗作阴性对照。免疫组织化学操作按说明书进行，步骤如下：①切片脱蜡水化，二甲苯20min×2，无水酒精5min×2，95%酒精2min×2，90%酒精2min，80%酒精2min，70%酒精2min，PBS3min×3；②灭活内源性过氧化物，3%双氧水10min，PBS5min×3；③封闭非特异结合，去背景，5%正常羊血清20min；④抗原抗体结合，一抗室温80min或4℃过夜，PBS5min×3，二抗室温20min，PBS 5min×3，三抗室温20min，PBS 5min×3；⑤DAB显色；⑥复染，苏木精复染7min，1%盐酸酒精分化30s；⑦透明和封片。

4 评价方法 CD147染色阳性表现棕黄色或棕褐色，主要定位于胞膜和胞浆。每张切片均由三位病理科医生分别随机观察具有代表性的10个高倍视野，根据胞膜和胞浆的染色程度及染色细胞百分率进行评分：基本不着色者为0分，着色淡者为1分，着色适中者为2分，着色深者为3分；着色细胞占计数细胞百分率＜5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，＞51%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘为其最后得分，0～1分为阴性，2～3分为弱阳性（＋），＞4分为强阳性（⧺）。

5 统计学处理 本组对所有资料采用SPSS10．0软件进行处理，正常组标本与PCa组标本中CD147表达区别采用卡方（χ2）检验，PCa组标本中各期CD147表达区别用秩和检验，以P＜0．05为有显著性差异，P＜0．01为有极显著性差异。

结 果

1 CD147在前列腺正常组织和癌组织中的表达见表1及附图。45例正常前列腺组织中40例表达为阴性，5例表达为弱阳性；97例前列腺癌组织中38例表达为弱阳性，59例表达为强阳性。CD147在阳性表达在前列腺癌组织中明显升高（P＜0．01）。

2 CD147在前列腺癌各期中的表达 见表2。将前列腺癌按TNM分期分为I，II，III和IV期，各期CD147阳性表达率分别为0．1%、34．3%、56．1%和84．8%。各期分别和其前一期比较（即I和II期比较，II和III期比较，III和IV期比较），CD147阳性表达率均升高（P＜0．01），各期阳性表达率具有极显著性差异（P＜0．01）。

附图 前列腺组织免疫组化染色图 A示正常组织；B示弱阳性；C示强阳性 （×200）

表1 正常组和PCa组标本中CD147阳性表达

表2 PCa组标本TNM分期之间CD147表达阳性率比较

讨 论

本实验结果提示：CD147在前列腺癌组织中也有高表达，而且随着TNM分期的升高，CD147在前列腺癌组织表达阳性率及强阳性也升高。说明前列腺癌的发生与CD147的表达有关，并且与TNM分期呈正相关。

正常组织的上皮细胞由一层基底膜与躯体其它部位隔离开来，正常细胞是不能突破这一基底膜屏障的。但是肿瘤细胞通过刺激基质细胞释放基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs），破坏基底膜屏障。随着前列腺癌的分级增加（即恶性程度增加），其基底膜的缺失也增大。另外，肿瘤若增大到一定的体积时，就需要新生毛细血管来提供其生长所需的养份，获得生成血管能力是前列腺上皮肉瘤发展为浸润性肿瘤的重要步骤。

CDl47分子是一个新的细胞表面粘附分子，又叫细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（Extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN），研究发现：CD147在正常细胞中不表达或仅有极低的表达，但是在肿瘤组织中，尤其是恶性肿瘤组织中表达常较高，其在肿瘤的浸润和转移、肿瘤的恶性转化及血管形成中发挥重要作用［5，6］。目前已证实了CDl47分子在乳腺癌、肝癌、喉鳞癌、骨肉瘤等多种恶性肿瘤中高度表达［7］。CDl47分子可刺激肿瘤周围间质细胞产生MMPs，从而降解细胞外基底膜和间质成分，与肿瘤侵袭和转移密切相关［8，9］。而且，肿瘤细胞表达的CDl47分子也可作用于邻近的癌细胞，相互诱导促进MMPs释放降解基质，并水解肿瘤细胞表面的粘附成分而有助于癌细胞的迁移［7，8］。另外，它还可以通过在RNA和蛋白水平影响血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）的表达，促进肿瘤血管的生成［10，11］。另外，CD147分子的表达还和自噬有很强的相关性，也可以通过自噬来调控肿瘤的发生与发展，而在前列腺癌中的其他机制还需要进一步研究。

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