β细胞素基因多态性与2型糖尿病患者血脂异常相关性研究

西安交通大学医学院第二附属医院干三病区（西安710004） 于俊霞 李秀丽 杨渭临

目前，随着经济发展和生活方式的改变，2型糖尿病发病率呈现逐渐升高的趋势。糖尿病发病机制主要是胰岛素抵抗和胰岛素分泌缺乏，二者都可以引起脂类代谢紊乱导致血脂异常。β细胞素是表皮生长因子家族的一个成员。在机体许多组织和培养的细胞包括血管平滑肌细胞和表皮细胞均有β细胞素的表达，尤其在胰腺、肝脏、肾脏和小肠，β细胞素的mRNA表达丰富［1～4］。近几年的一些研究表明［5～11］：β细胞素可以促进胰岛β细胞的分化和其他细胞向β细胞的转化。本研究旨在对β细胞素基因多态性与2型糖尿病患者血脂异常相关性进行研究。

资料与方法

1 临床资料 病例组：130例，为2006年8月至2007年5月我院门诊和住院的2型糖尿病患者，其中男85例，女45例。平均年龄为53．35±12．21岁，平均病程为3．16±4．67年，其诊断符合1999年 WHO糖尿病诊断标准。对照组：96例，均来自我院健康体检中心，其中男47例，女49例，平均年龄为49．08±13．32岁。

2 检测方法

2．1 标本收集：所有检测对象均隔夜禁食12～14h，次日清晨取静脉血。EDTA-K2抗凝血2ml冻存于-20℃用于提取基因组DNA，其余的送生化室进行生化指标的测定。

2．2 基因多态性鉴定：全血基因组DNA的测定；用RFLP-PCR对外显子1TGC19GGC进行基因多态性的筛查；利用SASP-PCR对5′非翻译区A-226G进行基因多态性的筛查；对筛查出的基因型进行测序鉴定。

3 统计学处理 本组所有数据均采用SPSS13．0统计学软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料组间比较采用卡方（χ2）检验，以P＜0．05为有显著性差异，P＜0．01为有极显著性差异。

结 果

1 外显子1 TGC19GGC（rs28549760）的基因型鉴定 见图1。Primer Premier 5．0设计引物，扩增PCR产物长度为268bp，野生型不能被SmaⅠ酶切，突变后可被SmaⅠ酶切。该位点不存在纯合突变，经酶切后产生3条片段分别为268bp、196bp和72bp，选择50bp的DNA Marker进行检测。

2 5′非翻译区 A-226G（rs11733938）基因型鉴定见图2。Primer Premier 5．0设计引物，应用等位基因特异性PCR，PCR产物长度为169bp，在2．0%琼脂糖凝胶上电泳，选择50bp的DNA Marker进行检测。

图1 外显子1TGC19GGC PCR产物酶切电泳结果

图2 5′非翻译区A-226G电泳结果

3 临床资料分析

3．1 外显子1TGC19GGC不同基因型与一般资料比较 见表1～2。根据外显子1TGC19GGC是否有T／G突变，分为TT和TG基因型。2型糖尿病组中总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、甘油三酯在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05）；健康对照组中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05）。高密度脂蛋白在TT基因型和TG基因型之间虽无显著性差异（P＞0．05），但是在TG基因型有降低的趋势。提示在BTC基因外显子1TGC19GGC研究中，2型糖尿病患者该位点基因突变与血脂水平无明显相关性，在健康对照组中TG基因型与高密度脂蛋白水平降低有一定的相关性。

3．2 5′非翻译区A-226G不同基因型与一般资料比较 见表3～4。根据5′非翻译区A-226G是否有A／G突变，分为AA＋AG基因型和GG基因型。2型糖尿病组中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白在两种基因型之间无显著性差异（P＞0．05），对照组中总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白在两种基因型间无显著性差异（P＞0．05），甘油三酯在GG基因型中明显升高（P＜0．05）。提示在BTC基因5′非翻译区A-226G-研究中，2型糖尿病患者该位点基因突变与血脂水平无明显相关性，在健康对照组中GG基因型与甘油三酯水平升高有一定的相关性。

表1 2型糖尿病组外显子1TGC19GGC不同基因型间一般资料比较（±s）

表1 2型糖尿病组外显子1TGC19GGC不同基因型间一般资料比较（±s）

注：两种基因间比较，P＜0．05

指标 TT基因型 TG基因型TC 4．29±1．08 4．59±1．25 TG 1．96±1．59 1．92±1．09 HDL 0．92±0．25 0．89±0．29 LDL 2．56±0．96 2．82±0．97

表2 对照组外显子1TGC19GGC不同基因型间一般资料的比较（±s）

表2 对照组外显子1TGC19GGC不同基因型间一般资料的比较（±s）

注：△两种基因型之间比较，P＞0．05

指标 TT基因型 TG基因型TC 4．33±0．80 4．13±0．61 TG 1．48±0．96 1．68±0．54 HDL-C 1．09±0．27 0．85±0．14△LDL-C 2．41±0．69 2．32±0．34

表3 2型糖尿病组A-226G不同基因型间一般资料比较（±s）

表3 2型糖尿病组A-226G不同基因型间一般资料比较（±s）

注：＊ 两种基因型之间比较，P＜0．05

指 标AG＋AA GG CHOL 4．34±1．06 4．40±1．70 TG 1．95±1．53 1．98±1．54＊HDL-C 0．91±0．25 0．98±0．34 LDL-C 2．62±0．97 2．34±0．86

表4 对照组A-226G不同基因型间一般资料比较（±s）

表4 对照组A-226G不同基因型间一般资料比较（±s）

注：＊ 两种基因型之间比较，P＜0．05

指标AG＋AA GG CHOL 4．3052±0．7785 4．560±1．0900 TG 1．4359±0．8326 2．552±2．0124＊HDL-C 1．0791±0．2717 1．018±0．1817 LDL-C 2．4186±0．6906 2．162±0．4672

讨 论

在2型糖尿病组，发现BTC外显子1TGC19GGC位点基因突变率较高，说明野生TT基因型在2型糖尿病的发病过程中可能有保护性作用。可能的机制：该位点位于外显子1上，外显子1主要编码BTC的信号肽，由于该基因位点的突变引起了编码氨基酸的改变，从了使所编码的信号肽结构发生变异引起信号转导发生异常，导致BTC功能发挥的异常，引起了胰岛β细胞功能缺陷，引起胰岛素分泌缺陷，可能参与了脂代谢的过程。本研究发现：在健康对照组中，TG基因型患者的高密度脂蛋白水平较TT基因型低，具体机制不清楚。目前关于这一方面的研究尚不多，但是通过本实验至少可以说明该位点基因突变对脂代谢方面的具有一定的影响，可能象糖代谢方面一样使脂代谢发生紊乱，从而表现为突变后高密度脂蛋白水平降低，发挥了不利于脂代谢方面的作用。从目前结果来看：外显子1TGC19GGC基因突变可能与2型糖尿病的发病以及血糖、血脂控制有关。

Steven等［12］在364例2型糖尿病患者和188例对照组中筛查了外显子1Cys7Gly，外显子2 Leu44Phe，外显子4Leu124Met 3个位点的基因多态性，并分析它们与107例志愿者高糖刺激后的胰岛素分泌与胰岛素敏感性方面的关系。发现这三个位点与2型糖尿病、胰岛素分泌以及胰岛素敏感性均无明显相关性。但是在外显子1Cys7Gly研究中发现：TG基因型患者的甘油三酯水平较高，此结果与Sliver等［13］的研究结果相同。并且在外显子2Leu44基因型中甘油三酯有升高的趋势，然而在外显子4Leu124基因型中CHOL有降低的趋势。因为BTC在内脏有表达，可能与脂代谢有一定的关系，但是有关BTC在脂肪代谢方面的影响仍无太多报道。

国外［14］关于BTC基因5′非翻译区A-226G与2型糖尿病的研究与我们的研究结果不一致，他们发现该位点基因多态性与2型糖尿病的发病有相关性。本研究发现该位点基因突变后，在健康对照组中甘油三酯水平明显升高，这说明该位点的基因突变与脂代谢有一定的相关关系，可以引起脂代谢紊乱。目前关于该位点与2型糖尿病及脂代谢方面相关关系的研究较少，它们之间的相互关系究竟如何有待于进一步研究。

综上所述，我们的研究发现BTC外显子1 TGC19GGC，该位点T等位基因突变为G等位基因后，可以引起高密度脂蛋白水平降低；5′非翻译区A-226G位点基因突变后可以引起甘油三酯水平升高。目前有关于BTC基因变异与脂代谢的相关关系，有待于进一步研究证实。

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