五味子及其制剂中有效成分测定方法的研究进展

刘长姣，于徊萍，孟宪梅

（吉林工商学院粮油食品深加工吉林省高校重点实验室，吉林长春130062）

五味子 Schisandra chinensis（Turcz.）Baill为木兰科多年生落叶植物，因果实具有甘、酸、辛、苦、咸五味而得名，具有敛肺生津、益胃养心、收敛固涩、滋补、强壮等功效，是常用中药之一。五味子中含有木脂素，多糖和三萜酸等多种有效成分，其中木脂素类具有保肝，降酶，抗艾滋病等多种活性[1]。本文对近些年来五味子及其制剂中有效成分测定方法的研究进展做一综述，以利于五味子有效成分研究与开发利用。

1 五味子中木脂素成分的测定方法

五味子中木脂素成分大多具有联苯环辛二烯母核，是一类低极性小分子化合物，如五味子甲素、五味子乙素，五味子醇甲等。近些年来常用的测定方法有分光光度法、高效液相色谱法、薄层扫描法等，现分别加以介绍。

1.1 分光光度法

分光光度法是药物成分分析常用方法之一，主要用于目标成分的鉴别和含量测定，具有简便、快速等优点。五味子木脂素分光光度法测定有直接测定法和变色剂显色法。马平勃[2]应用直接测定法测定五味子糖浆中五味子醇甲含量，以五味子醇甲为对照品，甲醇为空白，在234 nm处测定吸光度，平均回收率为100.25%，RSD为0.68%。田明[3]以五味子乙素为对照品，应用变色酸比色法测定五味子中总木脂素的含量，于570 nm处测定吸光度，绘制标准曲线，据此计算总木脂素得率。

上述方法适合测定五味子总木脂素含量，但难于定量测定某一组分。张立庆等[4]利用信息提取技术进行数学建模，利用岭回归（RR）分光光度法测定五味子提取液中五味子甲素、五味子乙素和五味子醇甲的含量，运用计算机VB语言对实验数据进行RR分析。实验结果表明RR分光光度法对样品中各组分的平均回收率在92.35%～108.69%之间，样品不经分离即可同时测定，是一种很有实用价值的方法。

1.2 高效液相色谱法

高效液相色谱法（HPLC）是色谱法中应用最广泛的方法，具有分离效能高、分析速度快、准确度高等特点，广泛用于天然产物的定性、定量和杂质分析。王彦涵等[5]应用HPLC法对五味子属14个种（变种）18个样品（果实、茎藤和根）中，五味子醇甲、醇乙、酯甲、甲素、乙素、表-加巴辛和安五脂素等成分进行了测定，证明五味子属植物果实的木脂素含量高于根和茎。冯雪松等[6]采用HPLC/UV测定不同产地五味子药材甲醇提取液的指纹图谱并进行比较。结果发现指纹图谱中有22个共有峰，确定了其中五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲6个成分。施祖勇等[7]建立HPLC法测定复方益肝灵片中五味子醇甲、醇乙和甲素的含量，平均回收率分别为97.8%、98.1%和97.3%，RSD分别为1.2%、1.9%和0.82%。张林林等[8]建立UFLC同时测定护肝胶囊中五味子醇甲、甲素和乙素的方法，平均回收率分别为99.7%、98.5%、99.2%，RSD分别为1.1%、2.3%、1.6%（n=5）。上述测定方法见表1。

表1 HPLC法检测木脂素的测定条件Table 1 HPLC analysis condition of lignans

1.3 薄层扫描法

薄层扫描法具有灵敏、准确、专属性好的特点，可用于目标成分定性和定量分析。施虹[9]应用双波长扫描法测定补肾益精丸中五味子甲素含量，展开剂为石油醚（60℃～90℃）和乙酸乙酯（8∶1），平均回收率为99.40%，RSD为3.40%。程东岩等[10]以薄层扫描法测定鹿心宁胶囊中五味子乙素的含量，展开剂为正己烷和醋酸乙酯（8∶3），平均回收率为100.9%，RSD为2.96%。韩正洲等[11]采用薄层色谱法鉴别南、北五味子，并对南、北五味子中五味子甲、乙素的含量进行测定。从薄层定性结果可看出南五味子中五味子甲素含量较高，但不含五味子乙素；北五味子中五味子甲素含量较低，但五味子乙素含量较高，故可据此鉴别南、北五味子。

1.4 毛细管色谱法

1.4.1 胶束电动毛细管色谱法

胶束电动毛细管色谱法是把一些离子型表面活性剂加到电解液中，当其浓度超过临界浓度后就形成有一疏水内核、外部带电荷的胶束。在此法中，被分离物质在水相中进行分配，溶质在水相中的迁移受电渗流和本身电泳迁移率的支配，而在胶束相中的迁移是电渗流和胶束电迁移共同作用的结果，不同物质根据其电迁移率及分配系数的不同而被分离。刘海兴等[12]建立了胶束电动毛细管色谱法测定生脉注射液中五味子酯甲含量的新方法，确定的最佳缓冲溶液为25 mmol/LNa2B4O7，表面活性剂SDS的浓度为30 mmol/L，15%乙醇溶液（pH9.82）为有机添加剂，测定时运行电压为18 kV，检测波长为254 nm，在此条件下，20 min内分离出9个峰，且各组分之间分离度较好；测得生脉注射液中五味子酯甲的平均含量为0.228 g/L，回收率为97%，RSD为3.7%。Kan Tian[13]等应用胶束电动毛细管色谱法分离测定五味子种子中木脂素成分，证明只应用表面活性剂SDS不能达到分离所有组分的效果，在其中加入离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐可使所有的化合物分开，得到较好的分离效果，测得北五味子和南五味中五味子醇甲、酯甲、甲素和乙素的回收率分别为：103.70%和97.01%，97.46%和102.79%，98.23%和105.87%，102.91%和104.83%。

1.4.2 毛细管电色谱法

毛细管电色谱法（CEC）是一种集毛细管电泳和液相色谱两者优点于一体新型的高效微分离技术。它采用熔融石英毛细管柱，柱内填充高效液相色谱用的固定相，用高压直流电源代替高压泵，既能分离中性物质，又能分析带电物质，具有高效、微量、快速等特点。LeonaK等[14]应用CEC法测定五味子种子中木脂素，采用大孔聚丙烯酰胺填充毛细管柱，测定条件为：进样电压5 kV（2.0 s），分离电压22.5 kV，柱温 25℃，检测波长200 nm（带宽10 nm），流动相为30%乙腈的10 mmoL/L Tris-15 mmoL/L硼酸盐缓冲液（pH 8.2）。在此条件下，CEC对五味子醇甲、醇乙、丙素和戈米辛N的定量分析结果与HPLC测定结果一致，分析时间不超过35min。

2 五味子其他成分的测定

2.1 五味子多糖的测定

多糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗病毒病菌、降血糖等作用，在抗肿瘤、抗病毒等药物的研究中占有一定的地位。五味子多糖成分的测定方法与天然产物中多糖常用测定方法相同，主要为分光光度法。韩学忠[15]采用硫酸-酚法测定五味子多糖含量。李巧云等[16]采用蒽酮—硫酸法测定五味子粗多糖含量。

2.2 五味子挥发油的测定

五味子种子中挥发性成分约占种子的2.34%，有明显的辛辣、芳香气味。五味子挥发油的测定方法主要是气相-质谱（GC-MS）联用法。该方法具有准确度高，快速灵敏等优点。刘风雷等[17]应用超临界CO2法提取五味子精油，用气相色谱法测定北五味子油中亚油酸的含量，回收率为98.75%，RSD为1.21%。李晓宁等[18]对辽五味子的挥发油成分进行鉴定，利用色质联用仪GC/MS产生的双线性数据，及化学计量学发展的二维色谱/质谱数据解析方法，得到了各组分的纯色谱曲线和质谱；共检出56个组分，鉴定了其中49个化合物，占挥发油总量的98.27%。上述方法测定条件见表2。

表2 挥发油CG-MS分析条件Table 2 Analysis condition of essential oil with GC-MS

2.3 微量元素的测定

五味子是可以应用于保健食品中的中草药之一，因此其微量元素的研究也得到一定发展。李承范[19]等用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定汪清、和龙、龙井、珲春、安图、敦化6个县市种植五味子样品中微量元素含量。样品采用硝酸-过氧化氢消解体系消化后，用ICP-MS法进行微量元素的测定。方法的检出限为 0.002 ng/mL～0.092 ng/mL，RSD 在 1.87%～4.96%之间，标准加入回收率在94.0%～104.5%之间，并证明五味子对各元素的吸收、富集具有一定的平衡关系，而且重金属含量比较低。谭晓虹等[20]建立南、北五味子中微量元素的火焰原子吸收光谱测定法。结果表明南、北五味子中均含有 Fe、Cu、Zn、Mn，平均回收率分别为101.7%、99.68%、102.9%和96.18%，RSD分别为：0.383%、1.06%、0.630%和0.177%。

2.4 原儿茶酸的测定

五味子中的原儿茶酸能降低心肌耗氧量，拮抗肾上腺素所致的耗氧量增加，提高心肌耐氧能力，缩小心肌梗死范围。许育海等[21]采用RP-HPLC法测定五味子中原儿茶酸的含量。确定乙腈-水-酸系统的分离效果更好，并发现在流动相中加入醋酸铵可使原儿茶酸保留时间缩短，改善原儿茶酸和相邻组分的分离。最终确定的色谱条件为LunaC18（2）色谱柱（150 mm×4.60 mm，5 μm），检测波长为 258 nm，流动相为乙腈-5 mmol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（6∶94∶1），流速为1.0 mL/min，柱温为35℃，经测定4批南五味子药材中原儿茶酸的质量分数在0.15 mg/g～0.4 mg/g的范围内。

2.5 五味子其他部位有效成分的测定

除了五味子果实以外，针对五味子植株的茎、叶和嫩芽中的活性成的研究也取得了一定的研究进展。

Radek Sladkovský等[22]以反相液相色谱法测定了不同年份（1997-1999）欧洲中部地区五味子茎叶提取物中槲皮素、山奈酚和（E）-苯乙烯酸的含量。刘俊霞[23]等应用苯酚-硫酸法测定不同品种的北五味子藤茎中多糖含量，证明不同品种的北五味子藤茎多糖的含量有一定的差异。丁璞[24]等应用HPLC法比较五味子根茎叶6种木脂素含量，证明野生五味子根茎叶总木脂素含量高于栽培品种，其根茎叶总木脂素含量顺序为根＞主枝＞侧枝＞叶。李贞霞[25]等采用微波消解电感耦合等离子体-原子发射光谱法测定了五味子嫩芽中的矿质元素 Ca、Cr、Cu、K、Fe、Mg和 Pb 的含量。证明五味子嫩芽中含有丰富的矿质元素，RSD为0.245%～4.130%。该方法简单、快速、可靠、灵敏度高，且多元素可以同时测定，能满足实际样品分析需要.

3 结语

五味子是我国常用中药材之一，由于其具有护肝，抗衰老等功能，对其中有效成分的研究也得到不断的深入，不仅仅只局限于木脂素。对其有效成分的深入研究和准确测定，可以有效的控制五味子及其加工产品的质量，促进五味子的深加工，提高我国五味子加工利用水平，扩大五味子需求量。

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